甜蜜素测定方法

甜蜜素测定方法1实验原理气象色谱法测定甜蜜素是国标中的第一法，测定原理，是用亚硝酸钠分解食品中的甜蜜素，产生的环己醇在硫酸的介质中与亚硝酸钠作用，生成环己醇亚硝酸酯，该物质在氢火焰中有良好的响应值，以保留时间定性，峰面积定量。2实验步骤取样品2克左右，需要提取打碎成粉末或者最大程度的剪碎，加入蒸馏水25ml在30摄氏度水浴中超声提取甜蜜素45mins，同时做空白实验、对照实验（加入甜蜜素标准品）和回收率实验（炒货样品最好每个都做回收，蜜饯样品可使用一个回收率进行计算），45mins结束后，加入5ml浓度为100g/L的硫酸在30°中稳定10mins，取出置于4摄氏度冰水浴中5mins，随后加入5ml正己烷（4℃）封住液面，防止而后产生的衍生物环己基氨基磺酸酯挥发，再加入5ml浓度为50g/L的亚硝酸钠，封管，缓慢摇动，放入冰水浴中，反应开始前10mins内不要剧烈摇动，后20mins内，每5mins左右漩涡震荡一次，冰水浴的时间总共30mins，从冰水浴中取出后，加入氯化钠饱和溶液2.5ml，离心，取上清，上机分析。3工作曲线制作分别加入取配置好的实验室级别标准溶液于50ml离心管中，加入量参考表1，定溶到同一刻度，标准溶液浓度为5mg/ml，按上述方法进行操作，得到工作曲线。由于平时日检的产品的甜蜜素含量基本在1mg/g到5mg/g这个区间，尤其在1mg/g到2mg/g的产品居多，所以，我们有针对性的将这两个区间的点加入的相对密集，以便于准确的得到产品的甜蜜素含量。如表1所示，标准溶液配制时间为20140505，标准溶液浓度为5.2340mg/ml。表12014年5月5日标准工作曲线No.标准溶液加入量（ml）甜蜜素（mg）Area(L)BLANK100.502.6170025220.84.187239631.05.234051141.26.280862051.57.851076661.89.42129257210.4680103582.513.085012949315.70201552103.518.31901842此工作曲线定期校正，由于色谱柱的柱效会一直下降，因此每次做出的标准曲线的斜率会有所差异。4结果和计算上机分析后，得到色谱峰面积，带入工作曲线，得到甜蜜素含量M，单位mg，带入以下公式计算：X：为样品中甜蜜素含量；单位：g/kgM：由工作曲线得出的甜蜜素含量；单位：mgm：样品的质量；单位：g；P：为加标回收率；F’：为计算换算系数0.8908；注：加标回收率主要使用生产级别的甜蜜素，浓度5mg/ml，向样品中加入2ml，计算回收率；计算换算系数，主要是用于将环己基氨基磺酸钠换算为环己基氨基磺酸。实验要素：1、样品尽量打碎，超声提取时间不宜超过45mins；2、硫酸、正己烷和亚硝酸钠的添加顺序有严格要求，不可混乱顺序；3、添加正己烷的移液枪要精确，至少系统误差是一样的；4、冰浴时间不宜超过30mins，冰浴后应尽快上机；5、计算回收率时，参考标准品的峰面积变化，前后两次实验标准品的峰面积之比应为0.90~1.10，否则说明标准品已经降解，不宜用作计算回收率。6、定期校准标准工作曲线。