江西省新余市第四中学高三一轮复习人教版生物选修三课件专题111DNA重组技术的基本工具(共49张PP

现代生物科技专题1【网络构建】2基因工程细胞工程【网络构建】3胚胎工程考纲要求1.基因工程(1)基因工程的诞生(Ⅰ)。(2)基因工程的原理及技术(Ⅱ)。(3)基因工程的应用(Ⅱ)。(4)蛋白质工程(Ⅰ)。2.克隆技术(1)植物的组织培养(Ⅱ)。(2)动物的细胞培养与体细胞克隆(Ⅰ)。(3)细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ)。3.胚胎工程(1)动物胚胎发育的基本过程与胚胎工程的理论基础(Ⅰ)。(2)胚胎干细胞的移植(Ⅰ)。(3)胚胎工程的应用(Ⅱ)。4.生物技术的安全性和伦理问题(1)转基因生物的安全性(Ⅰ)。(2)生物武器对人类的威胁(Ⅰ)。(3)生物技术中的伦理问题(Ⅰ)。5.生态工程(1)简述生态工程的原理(Ⅱ)。(2)生态工程的实例(Ⅰ)。4勇夺选修15分知识内容07080910111213141516171819频率基因工程15126151515150.5细胞工程1549150.33胚胎工程15530.25安全伦理生态工程60.08总计15159961515156151515538题（选修3）09年有6分是细胞结构内容；10年有6分是代谢内容；11年有9分是代谢和生态内容；15年9分是免疫知识。2、12年新课标全国高考理综卷选修题考点分布（选修3）6专题一基因工程假如你是一位育种专家，你能培育出下面几种“生物”吗？请问你准备用什么方法？7这些定向改造基因的设想能实现吗？经过多年的努力，科学家终于在20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程89一.基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平特点本质DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平定向改造生物基因重组基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的。因此又叫做DNA重组技术。101.1DNA重组技术的基本工具三种基本工具剪刀针线运输车限制性核酸内切酶DNA连接酶运载体问题探讨：11苏云金芽孢杆菌毒蛋白普通棉花抗虫棉12基因工程培育抗虫棉的简要过程普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌（有抗虫性状）提取抗虫基因棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)重组DNA导入形成培育抗虫棉的关键步骤有哪些？•基因工程培育抗虫棉的关键步骤：关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来关键步骤二：抗虫基因与DNA“缝合”关键步骤三：抗虫基因进入棉花细胞“分子手术刀”—限制性核酸内切酶“分子缝合针”—DNA连接酶“分子运输车”—基因进入受体细胞的载体13（1）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”⒈主要来源：14原核生物限制酶就是细菌的一种防御性工具，切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。简称：限制酶分布：主要在原核生物中你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？二.基因工程的工具原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。限制酶在原核生物中的作用15T16磷酸二酯键1234512345A2、作用特点：17（1）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”2、作用特点：18识别特定核苷酸序列,切断两个核苷酸之间的磷酸二酯键。具有特异性。一种限制酶一般只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。3、限制酶识别序列大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成思考与探究P72、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？通过长期的进化，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。19限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。•想一想限制酶所识别的序列有什么特点？20限制酶所识别的序列的特点中心轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。21EcoRⅠSmaⅠ3、限制性核酸内切酶的作用特点①能识别特定核苷酸序列；（专一性）3、限制性核酸内切酶的作用特点：②从特定部位的两个核苷酸之间切开。（切点：磷酸二酯键）T1234512345A（专一性）2223SmaⅠ平末端平末端4.限制酶的作用结果：2425EcoRⅠ黏性末端黏性末端4.限制酶的作用结果：26EcoRⅠ黏性末端黏性末端重复演示27EcoRⅠ黏性末端黏性末端大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶EcoRΙ能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。什么叫黏性末端？被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。28SmaⅠ平末端平末端限制酶SmaΙ能识别GGGCCC序列，并在G和C之间切开。2930平末端当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同来源的DNA片段混合将不同种来源的DNA片段连接起来生物A基因片段生物B基因片段……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……酶切31（1）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”4.作用结果：32产生黏性末端或平末端•要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。•如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。思考?33（2）“分子缝合针”——DNA连接酶34①作用:把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来.②作用原理：恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键3536T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低T4DNA连接酶③类型：类型E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)相同点差别（2）“分子缝合针”——DNA连接酶37DNA连接酶寻根问底P6•DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么?38AGTACTAATDNA母链DNA聚合酶DNA聚合酶TTAGATATCCAA……………………………………………………39DNA聚合酶DNA连接酶区别1区别2相同点1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链2)能将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板4041【探规寻律】几种酶的作用部位限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶作用于①部位,DNA解旋酶作用于②部位。（3）“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体⒈载体需要的条件：⑴有1~多个限制酶切点⑵对受体细胞无害⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达⑷有某些标记基因，便于筛选⒉常用运载体：⑴质粒⑵动植物病毒（3）λ噬菌体的衍生物42⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？⑵霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？（最常用）质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并且有自我复制能力的双链环状DNA分子。4344•常用的载体质粒：能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别独立于细菌拟核DNA之外的一种可以自我复制的小型环状的DNA分子451）载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。2）载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。3）载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。4）载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。5）载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。46小结47基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有专一性(识别序列)切开DNA分子的磷酸二酯键产生黏末端或平末端DNA连接酶连接磷酸二酯键种类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶运载工具具备的条件能在宿主细胞中自我复制并稳定存在具一种至多种限制酶切点具标记基因质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定481.限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段:你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？…CTGCA…G①…AC…TG②CG…GC…③…G…CTTAA④G…ACGTC…⑤…GC…CG⑥GT…CA…⑦AATTC…G…⑧②和⑦能连接形成…AC…TGGT…CA…④和⑧能连接形成…G…CTTAAAATTC…G…CG…GC……GC…CG③和⑥能连接形成①和⑤能连接形成…CTGCA…GG…ACGTC…反向对称思考与探究P749