农业部1077号公告-6-2008 水产品中玉米赤霉醇的测定

ICS67.050B50中华人民共和国国家标准农业部1077号公击-6-2008水产品中玉米赤霉醇类残留量的测定液相色谱-串联质谱法DeterminationofzeranoIsresiduesinaquaticproductsbyLC-MSIMSmethod2008-08-11发布2008-08-11实施中华人民共和国农业部发布农业部1077号公告-6-2008目日昌本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共租国农业部提州。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位:农业部渔业环境及水产品质量监怦检验测出中心〈哈尔、滨)、哈尔眩市食品丁:业研究所。本标准主要起草人:战培荣、孙言春、杨桂玲、陈忠祥、杨旭、南东立、孙娜、卢玲、王海涛、赵影霞、陆九韶。农业部1077号公告-6-2008水产品中玉米赤霉醇类残留量的测定液相色i普-串联质谱法1范围本标准规定了水产品中玉米亦每醇类残留盐液相色谱串联质i普训定方法，本标准适用于水产品中r玉米赤每醇、自-玉米赤每醉、α-玉米赤每烯醉、卡也来亦寄:烯自豆、丧米赤莓酣、玉米赤每:除酣单个或多个混合物残留莹的模相色谱串联质谱检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为水标准的条款。凡是注目期1~~1Jlm文件‘其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准.然而，鼓励根据本掠准边丘克协识的各方研究是否可使用这些文件的最新版本回凡是不注口期的引用文件，其最新版本运用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T3016水产品抽样方法3原理用乙腊提取鼠样l归的六种韦.米赤草草醇类.J书正己炕j说!J旨，经过氨基固相萃取柱净化后，用液相色谱一串联质谱仪测定，色谱保留时间和质谱特征离子共同定性，外标法定量.•4试剂以下所用试剂，除特味注明外j匀为分析纯试剂，试验用水符合GB/T6682一级水要求。4.1α玉米赤每醇、r玉米赤每醉、Q-主米赤每烯~、日一玉米赤霉烯醇、玉米赤每阳、玉米赤霉烯酬，际准品，纯度均大于97%。4.2乙脯t色谱纯。4.3正己:皖:包谱纯。4,4乙酸乙醋:色i曾主巾。4.5甲醇:色谱纯。4.6无水硫酸铀:G40C烘干4h.干燥保存目4.7正己;皖-乙酸乙酣(60+40):准确盘取芷己皖60mL和乙酸乙酷40mL.?由叫04.8正己;民-乙酸乙醋(20γ80):准确量取正己提20mL和乙酸乙酣80mL，由匀e4.9乙脂溶液(20%):取20mL乙脯.]10*榕解，定容至100mL.4.10乙腊饱和的正己烧溶液:乙睛lOOmL中加入15rnL正己埠，泪匀，备用g4.11标准储备液(l00μg/mU:精确称取适量的α-玉米赤霉醇、自-3S:米赤霉醉、α-玉米赤i.J;;胎醇、~­玉米赤霉烯醉、:F.米赤毒酷]、玉米赤碍烯阳.J可j甲醇分别配成地度为100周/mL的标准储备液，一18'C冰箱中保存，贮存期1年。4.121昆合标准储备液0，00μg/mU:分别准确吸取1.0mL的α玉米赤毒醉、日-玉米赤每醉、r玉米赤霉烯醇、R一玉米赤莓烯醇、玉米赤每酣、玉米赤莓烯用标准贮备撒至100n止容量瓶中，用甲醇稀释定容，-18°e冰箱中保存，贮存期6个月，农业部1077号公告-6-20084.13混合标准t作溶液:准确吸取混合标准储备液，用乙腊榕液(4.9)稀释成浓度为0.50ng/mL­100.00ng/rnL系列标准工作攘，4'C暂时存放。5仪器和设备5.1液相色谱串联质谱联用仪(配电喷雾离子源)•5.2涡旋混合器。5.3离心机:4000r/min.5.4分析天平:感量为0.01g.5.5分析天平:感量为0.00001日。5.6组织匀浆机。5.7旋转蒸发仪。5.8固相萃取装置。5.9氮吹仪。5.10鸡心瓶:100mL。5.门具塞聚丙烯离心管:50mL。5.12具塞刻度玻璃管:10mL,5.13氨基固相萃取桂:规格为500mg,3mL.6测定步骤6.1 试样预处理按SC/T3016的规定执行。6.2提取净化称取(5.00士0.02)g试样子50mL离心管中，加入3g无水硫酸例(4.6)，涡动20s，如乙JJ奇(4.2)15mL，充分均质混匀，4000r/min离心10min.取上清液于另一离心管E|10另取-50mL离心管，加入10mL乙睛(4.2)，清洗刀头。清洗液用来榕解上一步的残余物，重复提取一次，合并两次提取液。提取液中加入乙脯饱和的正己烧榕液(4-.10)15mL，充分震荡，3000r/min离心5min‘弃七层正己烧。再加乙睛饱和的正己烧榕液(4.10)10mL重复脱脂一次。下层转至100mL鸡心瓶中，50°C旋蒸至近乎，加乙酸乙醋SmL，涡动1min，静置30s.上清液转移至SOmL离心管e鸡心瓶中加正己烧10mL，涡动30~，静置30s，上消液转移至同一个离心管。再用正己烧10时，洗搔鸡心瓶一次.合并二次残余物溶解液，备IIJ0缸基固相萃取柱依次用乙酸乙酷和正己'院各5mL活化.取备用液全部过柱(流连不超过1mL/min)，再依次用正己皖、正己就-乙酸乙酶(4-(4.8)和乙酸乙.7)各5mL淋洗。依次用正己惋-乙酸乙醋酷各4时，洗脱，合并两次洗脱液.50('氯气吹干。残余物用乙脂榕液(4.9)1.0mL}容解，涡动混匀，过O.2μm滤膜，供被轩i色i宫一串联质谱仪测定.6.3 空白添加标准曲线的制备分别精确取6种玉米赤~酶类药物混合标准储备液适量，添加到5.00g宅自试样中，制得浓度在0.00μg/kg~100.00μg/kg范围内的S~7个不同添加浓度的试样，按:6.2步骤操作，供液相色谱-串联质谱仪测定。6.4测定6.4.1色谱条件a)色谱柱IBERCJa(2.lXSOm皿，粒径1.7μm)j或相当者.2农业部1077号公告-6→2008h)川d)()f)忧lJJ才门:八峭:;j(;P,相:乙)]r'j:，.流速，0.3utLI汀川。柱温，35(.:。肢，样体积，10μL.流动相梯度洗脱程序见表1.表1流动相梯度i先脱程序日f间，mIDA相，%l主刷，Yoo8515315853.51090410904.385155.58S1564.2质谱参考条件a)离子拥:电喷雾离子源。b)扫描方式:负离子扫描。c)检测方式=多反应监测(MRM).d)电离电压:2.6kYoc)离子眼温度:1100e°D算化温度:380°C.g)第化气流速:600L/h.h)药物保留时间、定性离子对、定量;离子对、锥孔电压和碰撞能量见表2。表2玉米赤黯醇类药物的保留肘闽、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能药物名称保留MI同口lin定性离子对rn/z定量离子对mh锥孔电压V碰撞他母eVα'玉米亦霉同事2.1532127732130332127740402023F习2米赤.醇1.9932127732130332127740402023a-玉米赤稳烯醇2.203192753193013192751\.0402022?玉米赤草草烯蹲2.0231927531930131927510402022玉米赤霉酣2.48319275.231920531927540402020玉米赤埋在烯嗣2.51317273317175317273404018186,4.3定性依据在同样的测试条件下，阳性样品保留时间与标准物质保留时间之问的相对标准偏差应在士5%以内，且监测到的离子的相对丰度.用与最强离子基峰的强度百分比表示，应当与浓度相当的校正标准相对丰度一致.校正标准可以是标准品i容液，也可以是添加了标准物质的样品。~峰与次强碎片离子相对丰度比符合表3的要求。空白添加标准溶横的质1蓝色谱图和玉米赤莓醇类药物子离子的质谱图见附录A中的图A.l~图A.703在业部1077号公告一6-2008表3基峰与次强碎片离子丰度比的要求相对丰度，Va允许偏差，Va50土2020-50三2510-20土30三二10土506,4.4定量测定按6.4.1和6.4.2设定仪器条件，待仪器稳定后，取样品制备液和空白添加棍合标准t作溶液进行测定，作单点或多点校准，外标法计算样品中药物的残留量‘定盘离子采用丰度最大的二级特征离子碎片。样品榕掖及空白添加理什标准c作情液巾0:-=f米赤莓醉、日-王米赤莓醇、α-玉米赤碍烯醇、自'毛米赤霉烯醉、玉米赤霉阳、=石-*赤莓烯闸的峰丽积均应在仪器检测的线性范围之内。6.5空白试验除不加标样外，按照上述测定条件和步骤进行平行操作。7结果计算试样中玉米赤莓醇类的残留量'按公式(1)计算，测定结果扣除空向值，保留三位小敏:单点校准:X、八r川、xA川 (1)或空白添1m标准;曲线校准:由A，=aX，+b，求得a和1b，代人公式(1)。式中:X一一测试样品中辛米赤霉醇类的残留茧，单位为微克每千克(μg/kg)iX，一一空白添加样品中相应玉米赤莓回事类的陈度，单位为11生克每千克(μ在/kg)iA一一待坝I]样品榕被中相应玉米赤每醇类的峰而积;A，--空向添加样品惰液中相应的玉米赤霉醇类的峰商i积;1n，~一-空白添加样品质量，单位为克(g);m一一待削样品质量，单位为克(gλ8方法灵敏度、准确度和精密度8.1 灵敏度6种玉米赤霉醇类残留的检测限均为O.50,l!gjkg.定量限均为1.00μg/埠。8.2准确度木方法在添加活度地围为1.00!J.g/kg~20.00μg/kg时的回收率为60%~120%08.3精密度本方法批间相对标准偏差15%。批内相对标准偏差15%04农业部1077号公告-6-2008附录A(资料性附录)玉米赤霉醇类特征离子质量色谱固和质谱图A,l玉米赤霉醇类标准溶渡特征离子质量色谱固王米赤莓醇类标准溶液特征离子质盘色谱图见图A.I。Zenmo1080702_48~.~ 2:MRMof4Chωmel吨ES­2..47飞 lmlzυ11'1111'I川O.∞0.501.001.502.∞2.503.四3.504.∞4.505.005.50Zeranol080702_48 2:MRMof4ChannelsES­1∞可自2.48319205到川2.66c4Ojn门1111'111't，III，111飞I'ι川I',,'1',iF'j,I川11'11111111唱rI10，佣0.501剧l.502∞2.503.003.504.∞4.505.005.50Zeranol080702482\~mMof4Ch国内nelsES­2.51 317273100:1-'1到川1.70e401111川II，rI，IIIIII川'111111门1'111111'1110.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.50Zer田。1080702_482:~mMof4ChaJll1t1sES­100一飞飞Z与1317175京寻川2.200404I'I''IiiI'iIii'1Iii1'I''I''I'11'1'iII1I'O.∞0.50I∞1，502.002.503.003.504.∞4.505.005.50ZenmoJ080702_48D1HMof4ChannelsES­1.9~2.15 3213031_00\』,dA1\L扭。4oI''I'iiI I,,II'11'I'IIIIIO.∞0.50I朋1.502.002.503.003.504.004.505.∞5.50Z付fjno1080702_48I:MRMof4Ch田melsES­_1.9~2.1532127710。可孔A*~~川3.92e40川jI'III'III'·，千叭1'11'11'11111[1…1'1'10.000.50 l.001.502.∞2.503.003504.004.505.005.50Zerano10807024,8I:MR\1of4ChannelsE5­_2.0j2.~9319.1275.2100，\回这~~川立的。4o111川，1川I川'ι'ililiill.i