DB13T 1384.6-2011 饲料中泰乐菌素的测定

ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1384.6—2011饲料中泰乐菌素的测定Determinationoftylosininfeed2011-05-10发布2011-05-20实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1384.6—2011I前言本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、北京出入境检验检疫技术中心、河北医科大学、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、杨立学、卢晓宇、吕品、贾茜、李志平、马春玲、米振杰、沈磊、范斌、高振同、武英利。DB13/T1384.6—20111饲料中泰乐菌素的测定1范围本标准规定了饲料中泰乐菌素的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中泰乐菌素的测定。本标准的方法检出限为1.0μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696:1987)3原理试样用碱性溶液溶解后，用固相萃取柱萃取，洗脱液浓缩后用甲醇溶液定容，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1水：应符合GB/T6682规定的一级水。4.2甲醇：HPLC级。4.3二氯甲烷：分析纯。4.4乙酸钠：分析纯。4.5甲醇+水(2＋8)（V/V）：量取20mL甲醇与80mL水混合。4.6固相萃取柱：HLB或相当者,200mg，3mL。4.7泰乐菌素标准品：纯度≥95％。4.8泰乐菌素标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取适量的泰乐菌素标准物质（4.7），用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4℃冰箱中，可使用两个月。4.9泰乐菌素标准工作溶液：用空白样品提取液分别配成泰乐菌素浓度为2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL标准工作溶液。标准工作溶液在4℃保存，可使用一周。4.10乙酸钠缓冲液（pH＝5.5，0.15mol/L）：称取12.30g醋酸钠于1000mL量瓶中，加900mL水，使溶解，调节pH至5.5，用水定容。5仪器DB13/T1384.6—201125.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.lmg和0.0lg各一台。5.3氮吹仪。5.4旋涡混匀器。5.5离心管：100mL。5.6高速离心机。5.7滤膜过滤器：0.45μm，有机相。5.8刻度离心管：10mL。6试样的制备6.1提取准确称取5g样品（精确至0.01g）于100mL离心管中，加入30mL二氯甲烷于旋涡混匀器上快速混匀10mim,5000r/min离心5min。将上清液移至20mL试管中，氮吹仪吹至近干，加1mL甲醇溶解残渣，再加入乙酸钠缓冲溶液4mL,轻轻摇匀，在离心管中加入5mL正己烷，轻轻摇匀，于5000r/min离心5min,使分层，取水相待净化。6.2净化将水相移入OasisHLB柱器（使用前分别用3mL甲醇和5mL水预处理，保持柱体湿润）中，以不高于2mL/min的流速过柱，待溶液完全流出后，用5mL水洗离心管和贮液管并过柱,然后再用5mL甲醇＋水（20＋80）洗柱，弃去全部淋出液。在65kPa的负压下，减压抽干10min，最后用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL刻度离心管中，于50℃氮吹仪吹干，用甲醇＋水（30＋70）定容至1.0mL，过0.45μm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱－质谱仪测定。7测定步骤7.1测定7.1.1液相色谱条件色谱柱：C18，5μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者。流动相：水（A）+甲醇（B）。流速：0.25mL/min。梯度：0min～5.0min20％～90％B，5.0min～7.0min90％B，7.1min～9.0min20％B。柱温：30℃。进样量：25μL。7.1.2串联质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子监测。扫描方式：多反映检测（MRM）。雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气。电喷雾电压、碰撞电压等自动优化至最佳值。定性离子对(m/z)：916.5/174，916.5/772.5。DB13/T1384.6—20113定量离子对(m/z)：916.5/174。7.2液相色谱－串联质谱测定泰乐菌素标准工作溶液在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以样品峰面积为纵坐标，工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中泰乐菌素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。泰乐菌素标准物质质谱图参见附录A。7.3空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算结果用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值：mVcX•=式中：X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）。c——从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）。V——样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)。m——样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15％。...........................................................(1)DB13/T1384.6—20114AA附录A（资料性附录）标准物质总离子流图及质谱图图A.1泰乐菌素总离子流图及质谱图_________________________________