DB13T 1384.11-2011 饲料中加丽素黄的测定

ICS65.120B46DB13河北省地方标准DB13/T1384.11—2011饲料中加丽素黄的测定Determinationofcarophyllyellowinfeed2011-05-10发布2011-05-20实施河北省质量技术监督局发布DB13/T1384.11—2011I前言本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。本标准由负责起草，河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学、石家庄市疾病预防控制中心、北京出入境检验检疫局技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人：张岩、丛斌、李挥、卢晓宇、吕品、张宏、马春玲、杨立学、沈磊、贾茜、米振杰、李志平、李强。DB13/T1384.11—20111饲料中加丽素黄的测定1范围本标准规定了饲料中加丽素黄的测定方法。本标准适用于饲料中加丽素黄的测定。本方法中高效液相色谱法的检出限为1.0mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法方法一高效液相色谱法3方法提要试样用乙腈提取，正己烷脱脂、浓缩后，高效液相色谱仪进行检测，外标法定量。4试剂和材料所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙腈：色谱纯。4.2正己烷：色谱纯。4.3正丙醇。4.42,6-二叔丁基对甲酚（BHT）：化学纯。4.5无水硫酸钠：650℃灼烧4h，处于干燥器内，冷却后备用。4.6乙腈提取剂：0.25gBHT溶液溶与500mL乙腈。4.7BTH-乙腈溶液：5gBHT溶液溶于500mL乙腈。4.8加丽素黄标品：纯度大于等于90％。4.9标准储备液：分别准确称取5.00mg纯品，精确至0.01mg加丽素黄标准品，加入BHT－乙腈溶液溶解，定容于200mL棕色容量瓶，配置成浓度为25.0µg/mL的标准储备液。充氮气装置-18℃避光保存，可使用两周。4.10混合标准工作液：准确移取加丽黄素标准储备液，用乙腈准确稀释成适宜浓度，即配即用。5仪器设备5.1高效液相色谱仪：配二极管阵列（DAD）或紫外－可见（UV－Vis）检测器。DB13/T1384.11—201125.2分析天平：感量0.01mg，0.01g。5.3旋涡混合器。5.4超声提取器。5.5离心机。5.6微孔滤膜：0.22µm，有机系。6测定步骤6.1提取与净化称取试样约5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入30mL乙腈提取剂（4.8）及10g无水硫酸钠（4.5）后，涡旋混合1min，在35℃以下水浴超生提取10min，再以3000r/min离心5min。将上清液移入预置有20mL正己烷的125mL分液漏斗中，振摇0.5min后，静置分层；收集下层乙腈相，正己烷相留在分液漏斗，待本试样后续脱脂重复使用。按上述步骤对离心管中残留物质每次有20mL乙腈提取剂在重复提取两次，所得提取液用上述正己烷相依次脱脂。合并三次脱脂后所收集的乙腈相，加入5mL正丙醇，于40℃以下旋转蒸发浓缩至近干，用乙腈溶解并定容至5.0mL，0.20µm滤膜过滤，滤液待测。6.2高效液相色谱法测定6.2.1色谱条件色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm（内径），5µm，或相当者；柱温：35℃；流动相：乙腈－水（95＋5，体积比）；流速：1.0mL/min；检测波长：452nm；进样量：20µL.6.2.2色谱测定根据试样中被测物的含量情况，选取相应值适宜的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和待测样中的加丽黄素的响应值应在仪器线性响应范围内。标准工作液与待测样液等体积进样。6.3空白实验除不称取试样外，按上述测定步骤进行。7结果计算mAVcAXS×××=……………………………………………….(1)式中：X——试样中加丽素黄的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——测定液中加丽黄素的峰面积；c——标准工作液中加丽黄素的浓度，单位为微克没毫升（µg/mg）；DB13/T1384.11—20113V——定容体积，单位为毫升（mL）；AS——标准工作液中加丽黄素的峰面积；m——最终样液所代表的样品质量，单位为克（g）。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。方法二定性方法9试剂9.1Sakaguchi试剂：将1g硼酸溶解于100mL80％的硫酸中。10仪器10.1体式显微镜10.2电子天平10.3食品研磨机11分析步骤11.1试样处理取适量饲料样品粉碎，以便把加丽素类物质从饲料小颗粒中释放出来。11.2定性试验将0.2克试样或饲料放在白瓷滴试板上，加入10毫升Sakaguchi试剂，充分反应，加丽素红显现深绿色，加丽素黄显现深紫罗兰色。_________________________________