NYT 2005-2011 动植物油脂中反式脂肪酸含量的测定 气相色谱法

ICS67.200X14中华人民共和国农业行业标准NY／T2005—2011动植物油脂中反式脂肪酸含量的测定气相色谱法Determinationoftransfattyacidsinanimalandvegetablefatsandoils—GC2011-09-01发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T2005—2011前言本标准按照GB／T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：李培武、谢立华、李英、丁小霞、张文、周海燕。ⅠNY/T2005—2011动植物油脂中反式脂肪酸含量的测定气相色谱法1范围本标准规定了气相色谱法测定动植物油脂中反式脂肪酸含量的方法。本标准适用于动植物油脂中反式脂肪酸含量的测定。本方法检出限：C18︰1-9t为2.0mg／kg，C18︰1-11t为0.8mg／kg，C18︰2-9t，12t为3.6mg／kg，C22︰1-13t为4.1mg／kg.2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB／T5524动植物油脂扦样GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理动植物油脂试样经氢氧化钾一甲醇和三氟化硼一甲醇在加热条件下甲酯化后，以气相色谱分离，火焰离子化检测器(FID)检测，内标法定量。4试剂除非另有说明，均使用分析纯试剂。水为GB／T6682规定的二级水。4.1异辛烷(C8H18)：色谱纯。4.2无水甲醇(CH4O)。4.3氢氧化钾(KOH)。4.4氯化钠(NaCl)。4.5三氟化硼甲醇溶液（质量分数）：50%～52%。4.6二十一烷酸标准品：纯度不低于99%。4.7脂肪酸甲酯标准品：C4︰0、C6︰0、C8︰0、C10︰0、C11︰0、C12︰0、C13︰0、C14︰0、C14︰1、C15:0、C15:1、C16:0、C16:1、C17:0、C17:1、C18:0、C18:1、C18:1、C18:1、C18:2、C18:2、C18:3、C18:3、C20:0、C20:1、C20:2、C20:3、C20:3、C20:4、C20:5、C21:0、C22:0、C22:1、C22︰2、22︰6、C23︰0、C24︰0、C24︰1，纯度不低于99%。4.8氢氧化钾甲醇溶液[c(KOH=0.5mol／L)]：称取2.8g氢氧化钾(4.3)，加入100mL无水甲醇(4.2)。4.9三氟化硼甲醇溶液（质量分数10%）：取10mLi氟化硼甲醇(4.5)，加入40mL无水甲醇(4.2)。4.10饱和氯化钠溶液。4.11二十一烷酸内标储备溶液(10mg／mL)：准确称取100mg二十一烷酸标准品(4.6)，用异辛烷(4.1)溶解定容至10mL。该标准储备溶液在－18℃下，可以稳定储藏1年。4.12二十一烷酸内标工作溶液(400µg／mL)：取400µL内标储备溶液(4.11)，用异辛烷(4.1)稀释定容至10mL。该标准工作溶液在-18℃下，可以稳定储藏1个月。4.13脂肪酸甲酯标准工作溶液：脂肪酸甲酯标准品(4.7)，用异辛烷(4.1)稀释，配置成各单个脂肪酸1NY/T2005—2011甲酯标准工作溶液和混合脂肪酸甲酯标准工作溶液，其浓度为100µg／mL～200µg／mL。该标准工作溶液在－18℃下，可储藏1个月。5仪器设备5.1气相色谱仪：带有FID检测器。5.2分析天平：感量0.1mg。5.3具盖螺口试管：25mL。6试样制备按GB／T5524的规定进行。7分析步骤7.1油脂试样甲酯化称取混合均匀油脂样品25mg(精确到0.1mg)置于25mL具盖螺口试管(5.2)中，加入100µL内标工作溶液(4.12)，1mL氢氧化钾甲醇溶液(4.8)，100℃反应10min;取出冷却至室温后，加入2mL三氟化硼甲醇溶液(4.9)，100℃反应15min；冷却至室温，再加入2mL异辛烷(4.1)和2mL饱和氯化钠溶液(4.10)，混和，静置澄清后，取上清液待测。7.2色谱条件7.2.1色谱参考条件7.2.1.1色谱柱：RT-2560，100m×250µm×0.2µm或相当者；7.2.1.2载气：氦气，流速：1.0mL／min，分流比：30︰1；7.2.1.3进样口温度：250℃；7.2.1.4检测器温度：280℃；7.2.1.5柱温箱温度：初始温度100℃，以5℃／min升温至180℃保持30min，再以3℃／min升温至240℃保持8min；7.2.1.6进样量：1µL。7.2.2脂肪酸甲酯的换算因子分别取1mL单个脂肪酸甲酯标准工作溶液和混合脂肪酸甲酯标准工作溶液(4.13)于进样瓶，用以下色谱条件进行气相色谱检测，得到每个脂肪酸甲酯的峰面积和保留时间，按式(1)计算出每个脂肪酸甲酯的响应因子。2121sicisicCAFAC×=×……………………………………………(1)式中：Fi——脂肪酸甲酯i的响应因子；Csi——混合标准工作溶液中脂肪酸甲酯i的浓度，单位为毫克每毫升(mg／mL)；Asi——混合标准工作溶液中脂肪酸甲酯i的峰面积；Cc21——混合标准工作溶液中二十一烷酸甲酯的浓度，单位为毫克每毫升(mg／mL)；Ac21——混合标准工作溶液中二十一烷酸甲酯的峰面积。7.3样品测定取1mL样液(7.1)于进样瓶，用气相色谱检测，得到样液每个脂肪酸甲酯的峰面积和保留时间。通过与混合标准溶液图谱比对定性，与内标(c21)峰面积比对定量，计算出样液中反式脂肪酸甲酯的含量。2NY/T2005—20118结果计算8.1试料中某一种反式脂肪酸含量的计算试料中反式脂肪酸i的含量(wi)以质量百分数(%)表示，按式(2)计算：212121100icciicACVwFAm×=×××…………………………………(2)式中：wi——试料中反式脂肪酸i的含量，单位为百分率(%)；Fi——脂肪酸甲酯i的响应因子；Ai——样液中脂肪酸甲酯i的峰面积；Ac21——样液中二十一烷酸甲酯的峰面积；Cc21——二十一烷酸的浓度，单位为毫克每毫升(mg／mL)；Vc21——试样中加入二十一烷酸工作溶液的体积，单位为毫升(mL)；m——试样质量，单位为毫克(mg)。8.2反式脂肪酸总含量的计算试料中反式脂肪酸总量（w）以质量百分数(%)表示，按式(3)计算：iw=w∑…………………………………………………(3)式中：w——试料中反式脂肪酸总含量，单位为百分率(%)；wi——试料中反式脂肪酸i的含量，单位为百分率(%)。测定结果取其两次测定的算术平均值，计算结果保留至小数后两位。9精密度9.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值的10%，以大于10%的情况不超过5%为前提。9.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的20%，以大于20%的情况不超过5%为前提。3NY/T2005—20114