DB51 T 1022-2010 辣椒抗疫病性室外盆栽人工鉴定技术规程

65.020.01B15四川省地方标准DB51DB51/T1022—2010辣椒抗疫病性室外盆栽人工鉴定技术规程RuleofResistanceIdentificationwithArtificialMethodforphytophthoracapsiciLeonianonthePeppersatthePots2010-2-10发布2010-3-1实施四川省质量技术监督局发布DB51/T1022—2010I目次前言.................................................................................Ⅱ1范围................................................................................12规范性引用文件......................................................................13术语和定义..........................................................................14用具和试剂..........................................................................15健康苗的准备.........................................................................26接种体准备..........................................................................27鉴定方法............................................................................38结果判定............................................................................4附录A................................................................................5附录B................................................................................5附录C................................................................................6DB51/T1022—2010II前言本标准的附录A、附录B、附录C和附录D是资料性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准起草单位：四川省农业科学院植物保护研究所、四川省农业科学院园艺研究所、四川省双流县农业发展局植保站。本标准主要起草人：彭化贤、席亚东、刘波微、滕有德、向清茹。1辣椒抗疫病性室外盆栽人工鉴定技术规程RuleofResistanceIdentificationwithArtificialMethodforPhytophthoracapsiciLeonianonthePeppersatthePots1范围本规程规定了辣椒抗疫病(PhytophthoracapsiciLeonian)性室外鉴定的健康苗准备、接种体准备、鉴定方法和判定结果的技术要求。本标准适用于四川省对辣椒品种（系）对疫病的室外盆栽抗性鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB／T16715.3瓜菜作物种子茄果类3术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1人工接种鉴定ArtificialInoculationforIdentification用人工繁殖或收集的病原物，仿照自然情况，创造发病条件，按一定量接种，诱发植物病害发生，根据接种对象抗性表现和发病程度确定品种抗性的鉴定方法。3.2接种体Inoculum指用于人工接种鉴定用的病原体，本规程特指辣椒疫霉菌的菌丝体。3.3营养土NutritionSoil根据幼苗生长发育的需要人工配制和混合好的土壤。3.4对照品种ControlVariety在抗性鉴定时附加的本规程特定的感病和抗病品种作为对照的品种。3.5接种针InoculationNeedle用于划伤辣椒茎部的接种工具。4用具和试剂24.1用具倒置显微镜、超净工作台、恒温生物培养箱、冰箱、消毒锅、不锈钢打孔器（3mm）、14cm×14cm塑料钵、塑料薄膜、特殊接种针。4.2试剂硝酸钾KNO3、硫酸铜CuSO44.3消毒剂0.1%升汞、75%酒精、甲醛(38％HCHO)。4.4肥料和农药过磷酸钙(主要成分为Ca(H2PO4)2)、尿素CO(NH2)2、50％多菌灵WP。5健康苗的准备5.1育苗土壤的配置采用1份田土、2份草炭土或堆肥等腐熟的有机肥，土壤过于黏重时适当加入一些沙子或炭灰，混匀之后，加入过磷酸钙1kg/m3～2kg/m3、尿素250g/m3～300g/m3、硝酸钾0.5kg～1.0kg/m3，草木灰5kg/m3～10kg/m3，最后过筛去掉粗颗粒物，即配成营养土。5.2营养土的消毒处理——福尔马林消毒法将营养土铺开在硬质地面，厚度约3cm~4cm，按每立方米的营养土喷洒福尔马林溶液(38％甲醛)75倍液200ml～250ml，充分拌匀，再堆积起来，覆盖塑料薄膜封闭3d～5d，打开薄膜把营养土摊开，晾晒10d左右即可使用。——多菌灵消毒法用50％多菌灵WP500倍镕液喷营养土，每立方米营养土用药量25g～30g。5.3营养钵的准备将塑料钵用75%酒精浸泡15min后，将消毒营养土装入消毒塑料钵，放入水层为2cm的盘内24h后，取出备用。5.4种子质量符合GB／T16715.3中二级良种以上的要求。5.5种子消毒和催芽先将消毒后的种子在弱光下晾晒2h～3h，然后用约55℃的热水浸种并不停地搅拌30min，再用清水浸种2h～3h，略加揉搓后洗净捞出，即可播种。5.6播种用水喷透营养钵土面，每钵均匀撒播种子３粒～４粒，覆盖约0.2cm厚的消毒营养土，参试鉴定的每份品种共播5钵，整齐摆放在半径100m内没有辣椒种植的露地中，覆盖地膜保温。5.7苗期管理80%种子出苗后，揭地膜。苗龄35d～40d、具2片～3片真叶时，选晴天定苗，浇水，每钵2苗～３苗。定苗7d后，用1%尿素根部追肥一次，辣椒植株具有6片叶时开始接种。病虫害管理见附录A。6接种体准备6.1培养基制备3燕麦琼脂培养基（OMA）：燕麦15g，蔗糖20g,琼脂18g，蒸馏水1000ml。在121ºC高压灭菌锅湿热灭菌40分钟后备用,灭菌后的pH为7.0～7.2。胡萝卜琼脂培养基（CAA）:胡萝卜汁200g，琼脂18g，蒸馏水1000ml。在121ºC高压灭菌锅湿热灭菌40分钟后备用，灭菌后的pH为7.0～7.2。6.2病原菌分离与鉴定采集当年的典型疫病的新鲜茎秆病，在病健交界处取表皮或植株茎髓组织块5mm～10mm，经自来水冲洗干净，经0.1%升汞、75%酒精消毒，置入OMA培养基上，放入25ºC±1ºC恒温培养箱中培养，待长出菌丝，转入OMA培养基上培养15d，在倒置显微镜（16×16倍）下鉴定是否产生游动孢子囊，游动孢子囊大小和形态描述见附录B。6.3接种针制作用于划伤辣椒茎部的特殊接种针。用一个直径为4mm～5mm、长为10cm～12cm的圆形塑料棒或木质棒，在棒的端部固定平行、紧挨的2根大头针，大头针的尖部仅为0.5mm长。6.4病原菌培养挑取带孢子囊的菌丝置于接种在CAA培养基上，在25ºC±1ºC恒温培养箱中培养7d，待菌丝覆盖整个培养皿（直径90mm）备用。6.5接种在辣椒植株茎与叶片分叉处，用酒精消毒接种针轻轻的刺伤茎杆，造成一浅口，将带菌培养基切成约2mm小菌片，贴在浅口上,用湿棉球盖上保湿18h～24h。每份参试鉴定的辣椒品种设接菌和不接菌的对照，培养基不带病原菌。设立感病品种和抗病品种两个对照。每品种重复5钵,每钵3株。7鉴定方法7.1调查时间和次数接种后10d～15d调查，调查一次7.2调查方法对参试鉴定的辣椒品种（系）进行逐株调查，以茎为单位，按附录D辣椒疫霉菌症状描述进行病情分级。记载每株的病情级别，根据病情分级数计算病情指数。表1原始记载表病情分级品种名称01234病情指数7.3计算用病情指数表示辣椒品种疫病发生平均严重度。病情指数用I表示，按公式（1）进行计算。∑（li×di）I＝━━━━━━━×100（1）4L×Ｄ式中：I——病情指数；li——各级病株数；di——各严重度级值；L——调查总株数；D——最高级值。计算结果保留到小数点后两位。8结果判定品种抗病性评价是按照病情指数划分品种的抗性水平，见附录C。在抗性鉴定中，实验的感病对照品种的病情指数≧50，抗病对照品种病情指数≦30（该值为参考数值），参试品种的空白对照的病情指数为0，即辣椒植株不发病，该抗性鉴定结果有效。5附录A（资料性附录）主要虫害及推荐防治方法病虫害名称推荐农药及方法蚜虫50%抗蚜威WP2000倍，叶面喷雾10%吡虫啉WP1500倍，叶面喷雾跗线螨1.8%阿维菌素EC1500倍，叶面喷雾10%浏阳霉素2000-4000倍液，叶面喷雾附录B(资料性附录)辣椒疫病的症状辣椒疫病属于真菌性病害，叶片、茎和果实均可发病。以茎基部和茎节分杈处发生成段水渍状的暗绿色病斑为典型症状。苗期发病，发病部位在幼苗茎基部，呈暗绿色水渍状软腐，致使上部猝倒。成株期发病，根、茎、叶、枝、果均可受害。茎部多在近地面处发生，病斑初期为暗绿色水渍状，以后出现环绕表皮扩展的暗褐色或黑褐色条斑，病部易缢缩折倒，病部以上茎梗也易凋萎死亡。果实受害多从蒂部开始，病斑呈暗绿色水渍状软腐，边缘不明显，很快扩展到全果实，引起腐烂，潮湿时病部覆盖白色霉层，干燥后形成暗褐色僵果。游动孢子囊大小和形态描述：疫霉菌在培养基上都能产生成熟的游动孢子囊（见图），游动孢子囊形态变化很大，有圆形、椭圆形、长椭圆形、不规则形等，游动孢子囊大小范围为长19.41µm-84.11µm，寛18.76µm-45.29µm；游动孢子囊一般有一个乳突，厚度为1.29µm-9.71µm。辣椒疫霉菌游动孢子囊6附录C(资料性附录)C.1辣椒疫病菌病情分级标准病级受害症状０级无病１级茎的一部分变褐或接种叉叶柄变蔫２级茎的大部分变褐、缢缩３级茎变褐、叶萎蔫４级植株倒伏萎蔫或枯死C.2辣椒品种抗疫病性评价分级标准抗性水平英文缩写病情指数高抗HR0～5.99抗R6.00～15.99中抗MR16.00～29.99中感MS30.00～49.99感S50.00～69.99高感HS大于70.00