DB51 T 1024-2010 马铃薯抗晚疫病性室内鉴定技术规程

65.020.01B1四川省地方标准DB51DB51/T1024—2010马铃薯抗晚疫病性室内鉴定技术规程RuleofResistanceIdentificationforPhytophthoreinfestans(Mont)DeBaryonPotatointheLaboratory2010-2-10发布2010-3-1实施四川省质量技术监督局发布DB51/T1024—2010I目次前言.................................................................................Ⅱ1范围................................................................................12规范性引用文件......................................................................13术语和定义..........................................................................14仪器、试剂及材料....................................................................25试验地环境、参试马铃薯质量和菌株选择................................................26栽培技术............................................................................27室内抗性鉴定方法....................................................................28马铃薯品种（系）抗病性评价标准......................................................3附录A................................................................................5附录B................................................................................5附录C................................................................................6DB51/T1024—2010II前言本标准附录A、附录B、附录C为资料性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准起草单位：四川省农业科学院植物保护研究所、四川省彭州市通济镇农技站、四川省农业科学院园艺科学研究所。本标准主要起草人：刘波微、彭化贤、席亚东、高波、何俊荣。DB51/T1024—20106马铃薯抗晚疫病性室内鉴定技术规程RuleofResistanceIdentificationforPhytophthoreinfestans（Mont）DeBaryPotatointheLaboratory1范围本规程规定了马铃薯品种的试验地环境、参试马铃薯质量和菌株选择、马铃薯栽培技术、室内抗性鉴定方法和马铃薯品种（系）抗病性评价标准。本标准适用于四川省对马铃薯品种、品系、低代材料晚疫病的室内抗性鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。3术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1抗病性鉴定EvaluationofDiseaseResistance是评价寄主品种、品系对特定病害抵抗或感染程度。3.2离体叶片鉴定EvaluationofLeafinVitro将马铃薯品种、品系、低代材料的叶片从植株上取下，经室内培养、人工接种而进行的抗性水平鉴定。3.3对照感病品种ControlAffectedVariety用于鉴定试验中的本地易感马铃薯品种。目前常用的感病品种有：米拉、大西洋、Favorita、坝薯10号。3.4脱毒马铃薯种薯(Virus-FreeSeedPotato)经处理，除去了马铃薯病毒病的种薯。3.5DB51/T1024—20106复叶（CompoundLeaf）每个叶柄上生有多个叶片的叶片。3.6.小叶(Lenflet)组成复叶的叶片称作小叶。4仪器、试剂及材料4.1仪器生物显微镜、光照培养箱、超净工作台、生化培养箱、冰箱、消毒锅、移液枪、烧杯、培养皿（90mm）、不锈钢刀、不锈钢打孔器（5mm）、接种针和直尺。4.2试剂洋菜、75%酒精、碳酸钙、蔗糖、碳酸钙4.3材料黑麦、番茄汁。5试验地环境、参试马铃薯质量和菌株选择5.1试验地环境试验地选择在远离马铃薯种植区的地方。5.2参试马铃薯品种（系）选择纯度高、新鲜、无病虫、无损伤的脱毒马铃薯。5.3品种（系）田间种植数量每品种（系）种植10株以上。5.4菌株的选择选择四川省优势马铃薯生理小种2个-3个小种进行接种。四川省马铃薯晚疫病菌优势生理小种有：3,4号、1,3,4号和2,3,4号。6栽培技术见附录C7室内抗性鉴定方法7.1培养基制备7.1.1水洋菜培养基琼脂条20g，加水至1000mL，湿热灭菌。在121ºC高压灭菌锅湿热灭菌40分钟后备用。7.1.2黑麦培养基DB51/T1024—20106黑麦60g、番茄汁100ml、蔗糖20g、琼脂条20g，碳酸钙1g、加水至1000mL，湿热灭菌。在121ºC高压灭菌锅湿热灭菌40分钟后备用。7.2取样7.2.1取样时间待植株生长至10片复叶后进行取样。7.2.2取样方法和数量在每个品种（系）的各个植株中部随机采集小叶叶片30片。7.3菌种繁殖和菌液制备7.3.1繁殖使用对照感病马铃薯品种进行菌种繁殖。薯块表面用75%酒精消毒，用不锈钢刀将薯块切成0.3cm~0.5cm厚的薯片,待用；用不锈钢打孔器在晚疫病菌平板上打孔，获得直径为5mm的菌块，放置在消毒后的培养皿内，再将切好的薯片放在菌块上。置18℃~20℃生化培养箱内培养，4d~6d产生大量孢子囊，待用。7.3.2菌液制备用接种针挑取对照感病马铃薯品种薯片上的菌丝体和孢子囊放入装有无菌水的培养皿中，生物显微镜镜检，记录无菌水中的孢子囊数量，调整孢子囊数量为1000个/ml，放入4℃的冰箱内2h~3h,取出后3h内完成接种。7.4接种在培养皿中倒入水洋菜培养基，水洋菜倒入量以铺平皿底面为准，将鉴定品种（系）的叶片叶背面朝上放在培养基上，用移液器取20µl孢子囊悬浮液滴于叶片背面，静置12h左右，将叶片翻转成正面朝上，置光照培养箱中培养。7.5培养在设定温度18℃，10h黑暗，14h光照的光照培养箱中培养。7.6调查时间培养后的第5d进行调查。7.7调查方法以叶片为单位，调查具有典型晚疫病症状（见附录D）的各个叶片，以病斑的长为准，用直尺按十字交叉法测量病斑的长和宽。7.8计算方法平均病斑直径(mm)=1/2*（长+寛）7.9病情调查原始记载（见附录C）DB51/T1024—201068马铃薯品种（系）抗病性评价标准室在该抗性鉴定中，对照感病品种叶片的发病率在40%以上时，该抗性鉴定结果有效。马铃薯品种（系）抗晚疫病性评价标准鉴定品种抗病水平英文缩写发病程度免疫I无症状或仅出现白色小点抗病R平均病斑直径＜0.5cm，周围无褪绿的晕圈。中感MS平均病斑直径＞0.5cm，＜1.0cm。病斑水浸状周围，有褪绿的晕圈，病斑表面可见白色菌丝体。感病S平均病斑直径＞1.0cm，＜1.5cm。病斑水浸状周围，有褪绿的晕圈，病斑表面上白色菌丝体明显。重感HS平均病斑直径＞1.5cm以上，具有大量的白色霉层。6附录A（资料性附录）马铃薯栽培技术1深耕整地疏松土壤环境，耕层深达25cm。2平衡施肥、沟施垄种2.1施肥原则施用肥料符合NY/T494原则，无机肥不得施用硝态氮肥和含氯离子的肥料。2.2施肥种类及施肥量底肥：农家肥45000kg/hm2，45%硫酸钾复合肥450kg/hm2，过磷酸钙300kg/hm2。追肥:以无机肥为主，尿素225kg/hm2，硫酸钾240kg/hm2。3．种植密度株距25cm，行距70cm，采用整薯播种。4.防治病虫害试验期间不能使用杀菌剂。附录B(资料性附录)马铃薯晚疫病侵染植株症状病原Phytophthorainfestans称致病疫霉,属鞭毛菌亚门真菌。症状主要侵害叶、茎和薯块。叶片染病，发病初期，先在叶尖或叶缘生水浸状绿褐色斑点，病斑周围具浅绿色晕圈，湿度大时病斑迅速扩大，呈褐色，并产生一圈白霉，即孢子梗和孢子囊，尤以叶背最为明显，干燥时病斑变褐干枯，质脆易裂，不见白霉，且扩展速度减慢。茎部或叶柄染病，现褐色条斑。发病严重的叶片萎垂，卷缩，终致全株黑腐，全田一片枯焦，散发出腐败气味。块茎染病，初生褐色或紫褐色大块病斑，稍凹陷，病部皮下薯肉亦呈褐色，慢慢向四周扩大或腐烂。6马铃薯晚疫病危害症状附录C(资料性附录)马铃薯晚疫病室内病情调查记载表鉴定地点：调查、记载人：调查时间：年月日病情调查结果品种（系）叶片序号长（cm）宽（cm）叶片表面症状123……30平均123……30平均