DB32∕T 3171-2017 农产品产地环境水中Hg(Ⅱ)的测定 酶联免疫法

ICS65.020B04DB32江苏省地方标准DB32/T3171—2017农产品产地环境水中Hg(Ⅱ)的测定酶联免疫法DeterminationofHg(Ⅱ)inwaterofagriculturalproducingareabyenzyme-linkedimmunosorbentassay2017-01-20发布2017-03-20实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T3171—2017I前言本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构及编写》的规定编写。本标准由南京农业大学提出。本标准起草单位：南京农业大学、江苏省农业科学院本标准主要起草人：刘凤权、王利民、张存政、王鸣华、华修德、孙远明DB32/T3171—20171农产品产地环境水中Hg(Ⅱ)的测定酶联免疫法1范围本标准规定了农产品产地环境水中Hg(Ⅱ)的酶联免疫检测方法。本标准适用于农产品产地环境水中Hg(Ⅱ)的在线筛查和快速监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法3原理采用间接竞争ELISA方法，在微孔板上包被Hg(Ⅱ)包被抗原，检测样品中残留的Hg(Ⅱ)与微孔板上的包被抗原竞争汞抗体，加入酶标羊抗鼠二抗后，显色剂显色，终止液终止反应。用酶标仪测定450nm处吸光值(OD450)，吸光值与检测样品中的Hg(Ⅱ)残留量成负相关。4试剂与设备4.1除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水均为GB/T6682中规定的三级水。4.2Hg(Ⅱ)酶联免疫检测试剂盒包括阳性参考品、阴性参考品、检测液、Hg(Ⅱ)抗体溶液、酶标二抗溶液、底物溶液、终止溶液和包被有Hg(Ⅱ)包被源的可拆卸96孔板，96孔板真空密封包装。Hg(Ⅱ)酶联免疫检测试剂盒应满足：对农产品产地环境水中Hg(Ⅱ)的检测限位0.001mg/L；阳性样品的符合率≥90%，阴性样品的符合率≥90%，假阴性率≤5%，假阳性率≤5%；对Cd(Ⅱ),Pb(Ⅱ),Cr(Ⅲ),As(Ⅲ)，Cu(Ⅱ),Zn(Ⅱ),Mn(Ⅱ),Fe(Ⅲ)等重金属离子的交叉反应均小于1%。Hg(Ⅱ)酶联免疫检测试剂盒在4℃下保存（有效期：180天）。4.3酶标仪：用于读取测定OD450值。5试样准备采集的水样经过滤后与检测液等体积混合，待测。6测定6.1撕开包装袋，根据检测试样数取出一定量的检测微孔条。DB32/T3171—201726.2用检测液将抗体溶液100倍稀释，并与样品等体积混合后，按照每孔50μL加样，同时设置两孔阴性参考品、两孔阳性参考品对照，并设一孔空白对照（空白对照孔不加抗体溶液）。37℃孵育45min，并洗板。6.3用检测液将酶标二抗溶液100倍稀释，按照每孔50μL加样。37℃孵育30min，并洗板。6.4按照每孔50μL加样，加入底物溶液，37℃孵育10min。6.5按照每孔25μL加样，加入终止溶液，并在5min之内测定OD450值。7结果判定对照阳性参考品OD450平均值、阴性参考品OD450平均值和空白孔的结果，根据竞争免疫法的原理及微孔板OD450值，按照如下原则进行结果判定：表1检测结果判定表结果判定判定依据无效阳性参考品显色OD450平均值≤0.8或阴性参考品OD450平均值≥0.1阳性样品OD450值与阳性参考品显色OD450平均值的比值≤0.9阴性样品OD450值与阳性参考品显色OD450平均值的比值＞0.9_________________________________