浙大植物生理学报告-叶绿素

装订线装装订线线实验报告课程名称：植物生理学实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质的鉴定一、实验目的和要求掌握植物中叶绿体色素的提取分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法。二、实验内容和原理：以菠菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。原理如下：1、叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。2、皂化反应。叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。3、取代反应。在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg++可依次被H+和Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。H+取代Mg2+,Cu2+(Zn2+)取代H+。4、叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。5、定量分析。叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量分析三、主要仪器设备：1、天平（万分之一）、可扫描分光光度计（）、离心机2、研具、各种容（量）器、酒精灯等四、操作法与实验步骤：专业：生工1202姓名：徐梦浙学号：3120100203同组：胡季宏实验名称：姓名：学号：装装订线P．2、叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定：3．叶绿素定量分析：鲜叶0.1g，加1.9mlH2O，磨成匀浆，取2份0.2ml加80%丙酮4.8ml,摇匀，4000转离心3min,上清液在645，652，663测定OD，计算Chla,Chlb和Chl总量的值。五、实验数据记录和处理波长645652663管一0.0640.0910.167管二0.0650.0920.169平均0.0650.0920.168Ca(mg/L)=12.7OD663-2.69OD645=1.959mg/LCb(mg/L)=22.9OD645-4.68OD663=0.702mg/LCT(mg/L)=Ca+Cb=2.661mg/L或=OD652*1000/34.5=2.667mg/L两者基本相等实验名称：姓名：学号：装装订线P．Chla含量(mg/g.FW)=（Ca(mg/L)/1000）*2/0.1*5/0.2=0.980mg/g.FWChlb含量(mg/g.FW)=（Cb(mg/L)/1000）*2/0.1*5/0.2=0.351mg/g.FWChl总含量(mg/g.FW)=（CT(mg/L)/1000）*2/0.1*5/0.2=1.332mg/g.FW7、讨论、心得1、为什么叶绿素吸收红光和兰紫光？叶绿素由基态上升到激发态需要吸收一定的能量，光量子提供的能量要使叶绿素激发，就必须要满足那个能量值，而处于这个能量值范围的光为红光和蓝紫光，所以光吸收的是红光和蓝紫光。2、为什么可用皂化后的叶绿素盐来测定叶绿素的吸收光谱？因为由于叶绿素皂化反应后的叶绿素盐并不影响叶绿素分子的骨架结构，叶绿素对光的吸收规律与叶绿素盐对光的吸收规律几乎是相同的，而且皂化反应可以从叶绿体色素中只筛选出叶绿素，排除了其他色素的干扰，所以可用皂化后的叶绿素盐来测定叶绿素的吸收光谱。