SNT 2319-2009 进出口食品中喹氧灵残留量的检测方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２３１９—２００９进出口食品中喹氧灵残留量检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狇狌犻狀狅狓狔犳犲狀狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２００９０７０７发布２０１００１１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言本标准的附录Ａ、附录Ｂ、附录Ｃ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：杨方、卢声宇、陈祥明、刘正才、林永辉、李捷、林安清、李波、蓝锦昌、江锦彬。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２３１９—２００９进出口食品中喹氧灵残留量检测方法１　范围本标准规定了进出口食品中喹氧灵残留量的液相色谱与液相色谱质谱／质谱的检测方法。本标准适用于大豆、花椰菜、樱桃、木耳、葡萄酒、茶叶、蜂蜜、猪肝、鸡肉、鳗鱼中喹氧灵残留量的测定和确证。２　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　方法提要试样中残留的喹氧灵采用乙酸乙酯振荡或饱和碳酸氢钠溶液乙酸乙酯提取，ＮＨ２固相萃取小柱净化或凝胶渗透色谱结合ＮＨ２固相萃取小柱净化，液相色谱仪或液相色谱质谱／质谱仪检测及确证，外标法定量。４　试剂和材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１　正己烷：色谱纯。４．２　乙酸乙酯：色谱纯。４．３　乙腈：色谱纯。４．４　甲醇：色谱纯。４．５　环己烷：色谱纯。４．６　丙酮：色谱纯。４．７　碳酸氢钠。４．８　无水硫酸钠：使用前于６５０℃干燥４ｈ，密封保存。４．９　环己烷乙酸乙酯溶液：分别量取５０ｍＬ环己烷与乙酸乙酯，混匀。４．１０　５％丙酮正己烷溶液：移取５ｍＬ丙酮于９５ｍＬ正己烷中，混匀。４．１１　５０％乙腈水溶液：分别量取５０ｍＬ乙腈与５０ｍＬ水，混匀。４．１２　饱和碳酸氢钠溶液：称取一定量碳酸氢钠溶于水溶液中至饱和。４．１３　喹氧灵标准物质（英文名Ｑｕｉｎｏｘｙｆｅｎ，分子式Ｃ１５Ｈ８Ｃｌ２ＦＮＯ，ＣＡＳＮｏ．１２４４９５１８７，相对分子质量３０８．１４）：纯度大于等于９８％。４．１４　喹氧灵标准贮备液（１００ｍｇ／Ｌ）：准确称取０．０１００ｇ喹氧灵标准物质，用甲醇溶解并定容至１００ｍＬ，该标准储备液于４℃可保存３个月。４．１５　喹氧灵标准工作液：根据需要取适量标准贮备液，以５０％乙腈水溶液稀释成适当浓度的标准工作液。标准储备液于４℃可保存１个月。４．１６　氨基（ＮＨ２）固相萃取柱：５００ｍｇ，３ｍＬ。４．１７　滤膜：０．４５μｍ，０．２２μｍ，有机系。１犛犖／犜２３１９—２００９５　仪器和设备５．１　液相色谱仪，配紫外或二极管阵列检测器。５．２　液相色谱质谱／质谱联用仪，配电喷雾（ＥＳＩ）源。５．３　分析天平，感量分别为０．１ｍｇ与０．０１ｇ。５．４　凝胶渗透色谱。５．５　离心机：４５００ｒ／ｍｉｎ，配有１００ｍＬ的具塞塑料离心管。５．６　粉碎机。５．７　组织捣碎机。５．８　涡旋混合器。５．９　超声波清洗器。５．１０　固相萃取装置。５．１１　氮吹仪。６　试样制备和保存６．１　水果蔬菜类　取有代表性样品５００ｇ，将可食部分切碎后（不可水洗），用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，分成两份，装入洁净容器内，密封并标识。６．２　茶叶、粮谷与坚果类取有代表性样品５００ｇ，用粉碎机粉碎并通过２．０ｍｍ圆孔筛，混匀，分成两份，装入洁净容器内，密封并标识。６．３　肉及肉制品　取有代表性样品５００ｇ，切碎后用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净容器内，分成两份，密封并标识。６．４　蜂蜜　取有代表性样品５００ｇ，对于无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过６０℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，分成两份，装入洁净样品瓶中，密封并标识。６．５　果汁、果酒等样品将取得的全部原始样品倒入洁净的混样桶中，充分搅拌混匀，再将混匀样品分装两份，每份约５００ｍＬ，密封并标识。６．６　保存条件茶叶、果酒、蜂蜜、粮谷于０℃～４℃保存，蔬菜、水果、肉及肉制品于－１８℃保存。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。７　测定步骤７．１　提取７．１．１　茶叶、谷物及坚果等样品：称取５ｇ（精确至０．０１ｇ）试样，置于１００ｍＬ具塞塑料离心管中，加入１５ｍＬ饱和碳酸氢钠溶液（４．１２）振摇浸泡１０ｍｉｎ，加入２０ｍＬ乙酸乙酯（４．２），涡动３０ｓ后超声提取２０ｍｉｎ，４５００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，移出有机相，残渣再加入２０ｍＬ乙酸乙酯重复提取１次，合并提取液，经无水硫酸钠（４．８）干燥后于５０℃旋转蒸发至近干，加入５ｍＬ正己烷（４．１），涡动３０ｓ溶解残渣，按７．２．２步骤净化。７．１．２　蔬菜与水果样品：称取１０ｇ（精确至０．０１ｇ）试样，置于１００ｍＬ具塞塑料离心管中，加入３０ｍＬ２犛犖／犜２３１９—２００９乙酸乙酯，振摇均匀后超声提取２０ｍｉｎ，４５００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ，移出有机相，残渣再加入２０ｍＬ乙酸乙酯重复提取１次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于５０℃旋转蒸发至近干，加入５ｍＬ正己烷，涡动３０ｓ溶解残渣，按７．２．２步骤净化。７．１．３　果汁、蜂蜜、葡萄酒等：称取１０ｇ（精确至０．０１ｇ）试样置于２５０ｍＬ具塞三角瓶中，加入１０ｍＬ饱和碳酸氢钠溶液、３０ｍＬ乙酸乙酯，振摇均匀后超声提取２０ｍｉｎ，４５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，移出有机相，残渣再加入２０ｍＬ乙酸乙酯重复提取１次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于５０℃旋转蒸发至近干，加入５ｍＬ正己烷，涡动３０ｓ溶解残渣，按７．２．２步骤净化。７．１．４　肉及肉制品：称取１０ｇ（精确至０．０１ｇ）试样置于１００ｍＬ具塞塑料离心管中，加入１０ｍＬ饱和碳酸氢钠溶液、３０ｍＬ乙酸乙酯，以均质器于１００００ｒ／ｍｉｎ均质提取３０ｓ，４５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，移出有机相，残渣再加入２０ｍＬ乙酸乙酯重复提取１次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于５０℃旋转蒸发至近干，加入１０ｍＬ环己烷乙酸乙酯（４．９），涡动３０ｓ溶解残渣，于４５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，按７．２．１与７．２．２步骤顺序净化。７．２　净化７．２．１　凝胶渗透色谱对于７．１．４所得的提取液，取５ｍＬ通过样品环注入凝胶色谱柱，按以下条件操作：ａ）　净化柱：ＢｉｏＢｅａｄｓＳＸ３填料，２５ｍｍ（内径）×２００ｍｍ；ｂ）　流动相：环己烷乙酸乙酯（１＋１，体积比）；ｃ）　流速：４．２ｍＬ／ｍｉｎ。收集９．５ｍｉｎ～２１．５ｍｉｎ的流出液，５０℃旋转蒸发至近干，加入５ｍＬ正己烷，待固相萃取小柱净化。注：若５．００ｇ样品中所含的脂肪量大于０．５ｇ，则应调整样品提取液体积，使得注入凝胶色谱的５ｍＬ样液中所含的脂肪量不大于０．５ｇ。７．２．２　固相萃取小柱净化使用前以３ｍＬ甲醇、３ｍＬ正己烷预淋洗小柱，将样品提取液上柱，用５ｍＬ正己烷淋洗，弃去全部淋洗液，以５ｍＬ５％丙酮正己烷（４．１０）洗脱，保持流速约为１ｍＬ／ｍｉｎ，收集洗脱液，于５０℃氮吹至近干，以５０％乙腈水溶液（４．１１）定容１ｍＬ，过０．４５μｍ滤膜，供高效液相色谱测定；或以５０％乙腈水溶液定容５ｍＬ，过０．２２μｍ滤膜，供液相色谱质谱／质谱测定。７．３　液相色谱测定　７．３．１　色谱条件　ａ）　色谱柱：ＷａｔｅｒｓＳｙｍｍｅｔｒｙＣ１８柱，４．６ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ，５μｍ，或相当者；ｂ）　流动相：乙腈水（７５＋２５，体积比）；ｃ）　流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）　检测波长：２３５ｎｍ；ｅ）　进样量：４０μＬ。７．３．２　色谱测定　以喹氧灵标准工作液进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。标准工作液和待测样液中喹氧灵的响应值均应在仪器线性响应范围内。按８项下规定进行结果计算。在本方法条件下，喹氧灵的保留时间约为８．０ｍｉｎ。标准品色谱图参见附录Ａ中图Ａ．１。７．４　液相色谱质谱／质谱法测定７．４．１　色谱条件ａ）　色谱柱：ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＢＥＨＣ１８柱，２．１ｍｍ（内径）×５５ｍｍ，１．７μｍ，或相当者；ｂ）　柱温：３０℃；３犛犖／犜２３１９—２００９ｃ）　流动相：乙腈水（７０＋３０，体积比）；ｄ）　流速：３００μＬ／ｍｉｎ；ｅ）　进样量：１０μＬ。７．４．２　质谱条件ａ）　离子源：电喷雾源（ＥＳＩ），正离子模式；ｂ）　扫描方式：多反应监测（ＭＲＭ）。其他参考质谱条件参见附录Ｂ中表Ｂ．１。７．４．３　液相色谱质谱／质谱测定根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和待测样液中喹氧灵的响应值均应在仪器线性响应范围内。按８项下规定进行结果计算。在本方法条件下，喹氧灵的保留时间约为１．５ｍｉｎ，在锥孔电压为３０Ｖ时，标准品的二级质谱图与多反应监测（ＭＲＭ）色谱图分别参见附录Ｃ中图Ｃ．１与图Ｃ．２。７．４．４　定性标准进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超过表１中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表１　定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０７．５　空白实验　除不加试样外，均按上述步骤进行。８　结果计算和表述用数据处理软件或按式（１）计算试样中喹氧灵药物的残留量，计算结果需扣除空白值：犡＝犮×犞犿…………………………（１）式中：犡———试样中喹氧灵残留量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犮———从标准工作曲线得到的喹氧灵溶液浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）；犞———样品溶液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———最终样液所代表的试样质量，单位为克（ｇ）。９　测定低限、回收率９．１　测定低限液相色谱法的测定低限为０．０１ｍｇ／ｋｇ。液相色谱质谱／质谱法的测定低限为０．００１ｍｇ／ｋｇ。９．２　回收率９．２．１　液相色谱法检测喹氧灵添加回收率数据见表２。４犛犖／犜２３１９—２００９表２　液相色谱法检测喹氧灵药物残留的添加回收率数据样品名称添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％大豆０．０１０７５．２～１０４．５０．０２０７６．２～９２．９０．０４０８１．８～９３．０花椰菜０．０１０７６．６～１０６．５０．０２０９０．１～１０２．４０．０４０９４．９～１００．３樱桃０．０１０８１．４～１０２．８０．０２０８３．２～９８．００．０４０８６．６～９８．４木耳０．０１０８９．６～１０８．２０．０２０８４．２～１０４．４０．０４０８８．９～１０４．８葡萄酒０．０１０７７．２～１０２．８０．０２０７９．２～９８．２０．０４０８２．８～９７．２茶叶０．０１０７４．６～１０７．６０．０２０７６．２～１００．３０．０４０７８．９～９４．８蜂蜜０．０１０７９．４～１０２．８０．０２０９１．９～９９．７０．０４０８４．８～９５．６猪肝０．０１０７４．６～１０６．５０．０２０７６．３～１０１．５０．０４０８０．７～９６．９鳗鱼０．０１０７４．６～１００．３０．０２０７６．２～９７．７０．０４０８０．９～９８．３鸡肉０．０１０７４．６～１０４．５０．０２０７８．３～９３．８０．０４０８１．６～９４．１５犛犖／犜２３１９—２００９９．２．２　液相色谱质谱／质谱法检测喹氧灵添加回收率数据见表３。表３　液相色谱喹氧灵药物残留的添加回收