SNT 2322-2009 进出口食品中乙草胺残留量检测方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２３２２—２００９进出口食品中乙草胺残留量检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犮犲狋狅犮犺犾狅狉狉犲狊犻犱狌犲犻狀犳狅狅犱狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２００９０７０７发布２０１００１１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布食品伙伴网书书书前　　言本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局负责起草和中华人民共和国云南出入境检验检疫局参加起草。本标准主要起草人：卫锋、董振霖、周兴伟、杨春光、王玉萍、鲍晓霞、蓝芳、王建华、杨长志、彭云霞。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２３２２—２００９食品伙伴网进出口食品中乙草胺残留量检测方法１　范围本标准规定了食品中乙草胺残留量的气相色谱测定、气相色谱质谱确证和制样方法。本标准适用于花生、大豆、玉米、小麦、洋葱、海菜、鸡肉、猪肉、腰果和松茸中乙草胺残留量的测定。２　方法提要试样中的乙草胺残留物用乙腈或乙酸乙酯提取，经凝胶渗透色谱仪（ＧＰＣ）和／或硅胶固相萃取柱（ＳＰＥ）净化，用气相色谱法（ＧＣ）测定和气相色谱质谱法（ＧＣＭＳ）确证，外标法定量。３　试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为色谱级，水为重蒸馏水。３．１　正己烷。３．２　乙酸乙酯。３．３　环己烷。３．４　乙腈。３．５　丙酮。３．６　无水硫酸钠：分析纯；６５０℃灼烧４ｈ，贮于密封容器中备用。３．７　乙酸乙酯正己烷：３＋９７（体积比）。３．８　乙酸乙酯正己烷：５＋９５（体积比）。３．９　乙酸乙酯环己烷：５０＋５０（体积比）。３．１０　乙草胺标准品（ａｃｅｔｏｃｈｌｏｒ，Ｃ１４Ｈ２０ＣｌＮＯ２，ＣＡＳＮｏ．：３４２５６８２１）：纯度大于等于９８％。３．１１　乙草胺标准溶液：准确称取适量的乙草胺标准品，用丙酮配成浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准储备液。根据需要将标准储备溶液用正己烷稀释成适当浓度的标准工作液。标准储备液和标准工作液避光在０℃～４℃条件下贮存。有效期６个月。４　仪器与设备４．１　气相色谱仪：配微池电子捕获检测器（μＥＣＤ）。４．２　气相色谱质谱仪：配电子轰击源（ＥＩ）。４．３　凝胶渗透色谱仪。４．４　旋转蒸发仪。４．５　离心机：５０００ｒ／ｍｉｎ。４．６　高速均质器４．７　硅胶固相萃取柱：６ｍＬ／１０００ｍｇ，或相当者；使用前用１０ｍＬ正己烷淋洗。４．８　离心管：１００ｍＬ，塑料和玻璃。４．９　滤膜：０．４５μｍ，有机相。５　试样制备与保存５．１　蔬菜类、食用菌类５．１．１　取洋葱等有代表性辛辣蔬菜样品约５００ｇ，将其可食用部分，将其切成约４ｃｍ２的小块。装入洁１犛犖／犜２３２２—２００９食品伙伴网净的容器内，密闭并标明标记。－１８℃以下保存。５．１．２　取有代表性蔬菜样品（洋葱等辛辣蔬菜除外）和松茸等有代表性食用菌样品约５００ｇ，将其可食用部分，用捣碎机将样品加工成浆状。混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。－１８℃以下保存。５．２　海菜取海菜有代表性样品约５００ｇ，切碎后，用捣碎机将样品加工成浆状。混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。－１８℃以下保存。５．３　粮谷和坚果类取花生、玉米、小麦、大豆、腰果等有代表性样品约５００ｇ，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。４℃以下保存。５．４　动物源类取鸡肉、猪肉等有代表性样品约５００ｇ，用绞肉机绞碎，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。－１８℃以下保存。６　测定步骤６．１　提取粮谷、坚果：称取试样１０ｇ（精确至０．１ｇ）于１００ｍＬ塑料离心管中，加入５０ｍＬ乙腈，在匀浆器上匀浆２ｍｉｎ。以４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，将上清液倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用１０ｍＬ乙酸乙酯环己烷溶液（３．９）溶解残渣，过膜，供凝胶渗透色谱（ＧＰＣ）净化。禽肉组织：称取试样１０ｇ（精确到０．１ｇ）于１００ｍＬ塑料离心管中，加入５ｇ无水硫酸钠，搅拌均匀，加入５０ｍＬ乙腈，在匀浆器上匀浆２ｍｉｎ。以４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，将上清液用无水硫酸钠脱水后倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用１０ｍＬ乙酸乙酯环己烷溶液（３．９）溶解残渣，过膜，供凝胶渗透色谱（ＧＰＣ）净化。洋葱：称取试样５ｇ（精确至０．１ｇ）于１００ｍＬ玻璃离心管中，在７００Ｗ消解功率下微波消解４０ｓ。恢复至室温，加入５０ｍＬ乙酸乙酯，在匀浆器上匀浆２ｍｉｎ。以４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，将上清液倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用１ｍＬ正己烷溶解残渣，供固相萃取柱净化。海菜、松茸：称取试样５ｇ（精确至０．１ｇ）于１００ｍＬ玻璃离心管中，加入５０ｍＬ乙酸乙酯，在匀浆器上匀浆２ｍｉｎ。以４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，将上清液倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用１ｍＬ正己烷溶解残渣，供固相萃取柱净化。６．２　净化６．２．１　凝胶渗透色谱净化条件ａ）　色谱柱：ＳＸ３２０×２ｃｍ（内径），或相当者；ｂ）　流动相：环己烷乙酸乙酯（１＋１，犞／犞）；ｃ）　流速：５．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）　进样量：５．０ｍＬ；ｅ）　淋洗体积：４０ｍＬ；ｆ）　收集体积：３０ｍＬ；ｇ）　清洗体积：１０ｍＬ。６．２．２　凝胶渗透色谱净化将６．１中粮谷、坚果和禽肉组织的提取液过滤膜（４．９）注入凝胶渗透色谱仪中，收集４０ｍＬ～７０ｍＬ流出液，在４０℃水浴上减压浓缩至干，用１ｍＬ正己烷溶解残渣，供固相萃取柱净化。６．２．３　硅胶固相萃取柱净化将６．１中洋葱、海菜、松茸提取液和６．２．２净化液注入硅胶固相萃取柱（４．７）中，再用２×１ｍＬ正己烷润洗盛样液容器，注入硅胶柱中，依次用１０ｍＬ正己烷、５ｍＬ乙酸乙酯正己烷溶液（３．７）和５ｍＬ乙２犛犖／犜２３２２—２００９食品伙伴网酸乙酯正己烷溶液（３．８）淋洗，再用１５ｍＬ乙酸乙酯正己烷溶液（３．８）洗脱，收集洗脱液于４０℃水浴减压浓缩至干，用正己烷定容至５ｍＬ，供气相色谱测定和气相色谱质谱确证。６．３　测定６．３．１　气相色谱条件ａ）　色谱柱：ＤＢ５石英毛细管柱，３０ｍ×０．３２ｍｍ（内径），膜厚０．２５μｍ，或相当者；ｂ）　色谱柱温度：６０℃（１ｍｉｎ）１５℃／→ｍｉｎ２６０℃（５ｍｉｎ），３００℃（后运行１５ｍｉｎ）；ｃ）　进样口温度：２５０℃；ｄ）　检测器温度：３２５℃；ｅ）　载气：氦气，纯度≥９９．９９５％，１．８ｍＬ／ｍｉｎ；ｆ）　进样量：１μＬ；ｇ）　进样方式：无分流进样，０．７５ｍｉｎ后开阀。６．３．２　气相色谱质谱条件ａ）　色谱柱：ＤＢ５ＭＳ石英毛细管柱，３０ｍ×０．２５ｍｍ（内径），膜厚０．２５μｍ，或相当者；ｂ）　色谱柱温度：６０℃（１ｍｉｎ）１５℃／→ｍｉｎ２６０℃（５ｍｉｎ），３００℃（后运行１５ｍｉｎ）；ｃ）　进样口温度：２５０℃；ｄ）　色谱质谱接口温度：２８０℃；ｅ）　载气：氦气，纯度≥９９．９９５％，１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｆ）　进样量：１μＬ；ｇ）　进样方式：无分流进样，０．７５ｍｉｎ后开阀；ｈ）　电离方式：ＥＩ；ｉ）　电离能量：７０ｅＶ；ｊ）　测定方式：选择离子监测方式（ＳＩＭ）；ｋ）　监测离子（ｍ／ｚ）：定量１６２，定性１７４、２３４、２６９；ｌ）　溶剂延迟：３ｍｉｎ。６．３．３　气相色谱测定根据样液中乙草胺含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中乙草胺响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，乙草胺的保留时间约为１２．３ｍｉｎ。标准品的色谱图参见附录Ａ图Ａ．１。６．３．４　气相色谱质谱确证乙草胺标准溶液及样液均按６．３．２规定的条件进行测定，如果样液与标准溶液相同的保留时间有峰出现，则对其进行质谱确证。经确证分析被测物ＳＩＭ色谱峰保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，所选择的离子均出现；选择离子ｍ／ｚ１６２、１７４、２３４、２６９（其丰度比１００∶５４∶２４∶８）与标准样品相关离子的相对丰度一致，相似度在允许偏差差之内（见表１），则可判定样品中存在乙草胺。乙草胺标准品总离子流色谱图、选择离子质谱图和全扫描质谱图参见附录Ａ图Ａ．２、图Ａ．３和图Ａ．４。表１　犌犆犕犛确证相对离子丰度的最大允许偏差相对丰度（基峰）／％ＥＩＧＣＭＳ（相对）／％＞５０±１０＞２０～５０±１５＞１０～２０±２０≤１０±５０３犛犖／犜２３２２—２００９食品伙伴网６．４　空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。６．５　结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（１）计算试样中乙草胺的含量，计算结果需将空白值扣除。犡＝犃×犮×犞犃ｓ×犿…………………………………………（１）　　式中：犡———试样中乙草胺的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犮———标准工作液中乙草胺的浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犃———样品溶液中乙草胺的峰面积；犃ｓ———标准工作溶液中乙草胺的峰面积；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———最终样液所代表的试样量，单位为克（ｇ）。７　测定低限和回收率７．１　测定低限本方法的测定低限均为０．０１ｍｇ／ｋｇ。７．２　回收率气相色谱法检测样品的添加浓度及回收率数据见表２，气相色谱质谱法检测样品的添加浓度及回收率数据见表３。表２　气相色谱法检测样品的添加浓度及回收率数据样品名称添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％花生０．０１７１．３～９１．２０．０２７７．２～９１．５０．０５７８．１～９６．４大豆０．０１７６．２～８８．７０．０２７４．５～８６．９０．０５７６．０～９４．２玉米０．０１７５．７～８６．００．０２７３．９～８６．８０．０５７６．８～９２．３小麦０．０１７５．９～８８．２０．０２７８．３～９１．６０．０５７６．７～８９．１洋葱０．０１７６．６～９３．１０．０２８２．６～９３．７０．０５８０．０～９３．２样品名称添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％海菜０．０１８６．７～９５．９０．０２８１．８～９６．７０．０５７９．１～９３．２鸡肉０．０１８２．０～９４．６０．０２８０．３～８８．８０．０５８０．１～９７．２猪肉０．０１７６．０～８６．７０．０２７７．１～８５．５０．０５７８．９～９８．８腰果０．０１７４．３～８７．７０．０２７５．４～８９．２０．０５７５．４～９２．７松茸０．０１８１．５～９７．６０．０２８３．１～９６．５０．０５７９．３～９５．３４犛犖／犜２３２２—２００９食品伙伴网表３　气相色谱质谱法检测样品的添加浓度及回收率数据样品名称添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％花生０．０１７１．５～８８．３０．０２７７．５～９４．００．０５７０．１～９０．２大豆０．０１７４．９～８５．２０．０２８２．５～９０．３０．０５７６．２～９６．２玉米０．０１７０．９～８５．８０．０２７５．９～８８．８０．０５７８．１～９６．４小麦０．０１７１．３～８６．２０．０２８４．３～９２．６０．０５７４．７～９０．２洋葱０．０１８２．６～９１．１０．０２７８．６～８９．７０．０５７９．０～９５．２样品名称添加浓度／（ｍｇ／ｋｇ）回收率／％海菜０．０１７９．０～９３．７０．０２７６．１～９３．５０．０５８１．９～９７．８鸡肉０．０１８０．０～９７．７０．０２８４．１～９５．５０．０５７９．９～９８．８猪肉０．０１７７．４～８９．２０．０２７４．９～８６．２０．０５８０．４～９４．２腰果０．０１７６．４～９０．２０．０２７７．４～８７．２０．０５７７．４～９７．９松茸０