SNT 2167-2008 危险品生殖细胞致突变试验方法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１６７—２００８危险品生殖细胞致突变试验方法犕狌狋犪狋犻狅狀狋犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳狉犲狆狉狅犱狌犮狋犻狏犲犮犲犾犾犳狅狉犱犪狀犵犲狉狅狌狊犵狅狅犱狊２００８０９０４发布２００９０３１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言本标准修改采用联合国经济合作与发展组织（ＯＥＣＤ）化学品测试方法Ｎｏ．４７８《啮齿类动物显性致死试验》（１９８４）。本标准与ＯＥＣＤ化学品测试方法Ｎｏ．４７８相比，存在以下差异：———对ＯＥＣＤ化学品测试方法Ｎｏ．４７８进行了编辑性修改；———增加了前言部分。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所、江南大学、天津市检验检疫科学技术研究院。本标准主要起草人：李宁涛、张园、庞震、赵黎华、赵琢、李学洋。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２１６７—２００８危险品生殖细胞致突变试验方法１　范围本标准规定了危险化学品生殖细胞致突变试验的试验方法和试验结果与评价。本标准适用于对危险化学品进行生殖细胞致突变性的测定。２　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ１４９２４．１　实验动物　配合饲料通用质量标准ＧＢ１４９２５　实验动物　环境及设施３　术语和定义下列术语和定义适用于本标准。３．１显性致死　犱狅犿犻狀犪狀狋犾犲狋犺犪犾犻狋狔精子在发生过程中受电离辐射或化学毒物损伤造成染色体断裂，发生了突变的精子与正常卵细胞结合后的杂合子发生死亡。３．２活胎　犾犻狏犲犳狅犲狋狌狊完整成型，色鲜红有光泽，有自然运动，机械刺激后有运动反应的胚胎。３．３早期死亡胚胎　犲犪狉犾狔犱犲犪犱犳狅犲狋狌狊胚胎形体较小，外形不完整，胎盘较小或不明显的胚胎。３．４晚期死亡胚胎　狋犲狉犿犻狀犪犾犱犲犪犱犳狅犲狋狌狊有完整的胚胎形状，肢体已形成，比正常胚胎小，色泽暗淡，无自然运动，机械刺激后无运动反应，胎盘小且颜色苍白的胚胎。４　试验方法４．１　试验器材和试剂４．１．１　器材灌胃针、注射器及针头、外科手术剪、手术刀、无齿镊。４．１．２　试剂———蒸馏水、生理盐水或二甲基亚砜等溶剂；———阳性对照物可用环磷酰胺、三亚乙基密胺或乙基甲磺酸酯。１犛犖／犜２１６７—２００８４．２　试验动物选用性成熟的大鼠或小鼠，一般多采用小鼠。小鼠体重３０ｇ～３５ｇ，大鼠体重２００ｇ～３００ｇ。成年健康的试验动物进入实验室后，应有３ｄ～５ｄ适应环境。试验动物饲养条件应符合ＧＢ１４９２４．１和ＧＢ１４９２５有关规定。４．３　受试样品配制４．３．１　配制要求受试样品应根据受试样品的理化性质确定受试样品所用的溶剂或载体。受试样品应临用先配。固体受试样品应溶于或悬浮于适当的溶剂或载体中。液体受试样品可直接使用或稀释后使用。４．３．２　溶剂或载体选择首选蒸馏水、植物油、食用淀粉、羧甲基纤维素钠等。如非常用溶剂或载体，应有参考资料说明其成分，但所用溶剂或载体的使用剂量水平对试验动物应不产生毒作用，且不与受试样品发生任何化学反应。必要时可设溶剂或载体对照组，以确定溶剂或载体的影响。４．４　剂量与分组４．４．１　染毒剂量受试样品至少设三个剂量组，染毒剂量可选择在１／１０ＬＤ５０～１／３ＬＤ５０之间，剂量组的剂量间距以２倍～４倍为宜。应先进行预试验以确定最高剂量，最高剂量应能使试验动物出现毒性症状或繁殖能力轻微降低，中间剂量应引起较轻的可观察到的毒性效应，低剂量应不出现任何毒效应。对照组除不接触受试样品外，其他条件应与染毒组完全相同。４．４．２　动物分组健康的性成熟动物，随机分为不同剂量组、阳性和阴性对照组。雄性动物每组不少于１０只～１５只，雌性动物每组不少于２０只～３０只，雌雄动物以２∶１为宜，受孕动物应达到２０只以上。４．５　染毒方法雄性动物接触受试物，时间可为一次、５ｄ～７ｄ或３个月；接触途径通常采用经口染毒或腹腔注射；阳性对照组用环磷酰胺３０ｍｇ／ｋｇ，每日一次，连续染毒品５ｄ，或于动物交配前一天，一次给予３００ｍｇ／ｋｇ的三亚乙基密胺或４００ｍｇ／ｋｇ的乙基甲磺酸酯；阴性对照组给予等量不含受试毒物的溶剂。４．６　动物处理雄性动物从最后一次接触受试物的当天开始，与未接触过受试物并从未生育过的雌性动物同笼，交配１周，第二周更换另一批同样数量的雌性动物同笼交配，如此连续进行交配，小鼠可进行６批～８批，大鼠８批～１２批。４．７　观察与解剖雌雄动物同笼后，雌性大、小鼠以检查出阴栓的时间作为妊娠第０天，在小鼠妊娠第１４天、大鼠妊娠第１６天，将其处死，剖腹取出子宫，检查并记录两侧子宫内的着床数、早期死亡胚胎、晚期死亡胚胎和活胎数。５　试验结果与评价５．１　平均受孕率、总着床数、平均着床率和平均早期胚胎死亡率计算平均受孕率、总着床数、平均着床率和平均早期胚胎死亡率分别按式（１）、（２）、（３）、（４）进行计算。平均受孕率＝每组孕鼠数每组同笼雌鼠总数×１００％…………………………（１）总着床数＝活胎数＋早期胚胎死亡数＋晚期胚胎死亡数………………（２）平均着床率＝每组总着床数每组受孕雌鼠数×１００％…………………………（３）平均早期胚胎死亡率＝每组早期胚胎死亡数每组受孕雌鼠数×１００％……………………（４）２犛犖／犜２１６７—２００８５．２　差异显著性检验各试验组每批交配动物的各项指标均与对照组进行比较，以判断是否具有显著性差异。大、小鼠的平均受孕率和平均着床率呈正态分布，可用狋检验进行显著性检验。早期胚胎死亡数呈负二项分布，应按负二项分布的统计学方法进行显著性检验。５．３　结果评价平均早期胚胎死亡数随着受试物剂量的增高而增加，即具有剂量反应关系，并有统计学意义，或至少在一个剂量水平上出现可重复的并具有统计学意义的增高，即可判定该受试物在本试验系统中的试验结果为阳性；如果受试物不引起与剂量有关的有统计学意义的平均早期胚胎死亡数增高，即不具有剂量反应关系，或者在任何剂量水平上没有可重复的并具有统计学意义的增高，则可以认为该受试物的试验结果为阴性。犛犖／犜２１６７—２００８书书书８００２—７６１２犜／犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行　业　标　准危险品生殖细胞致突变试验方法ＳＮ／Ｔ２１６７—２００８中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６　６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６　印张０．５　字数６千字２００８年１１月第一版　２００８年１１月第一次印刷印数１—２０００书号：１５５０６６·２１９２７８　定价６．００元