SNT 2190-2008 进出口动物源性食品中非甾体类抗炎药残留量检测方法 液相色谱-质谱质谱

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１９０—２００８进出口动物源性食品中非甾体类抗炎药残留量检测方法液相色谱质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狉犲狊犻犱狌犲狊狅犳狀狅狀狊狋犲狉狅犻犱犪犾犪狀狋犻犻狀犳犾犪犿犿犪狋狅狉狔犱狉狌犵狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱２００８０９０４发布２００９０３１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言本标准的附录Ａ为规范性附录，附录Ｂ和附录Ｃ均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中国检验检疫科学研究院和中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：于静、彭涛、代汉慧、李建中、安娟、林维宣、岳振峰、唐英章。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２１９０—２００８进出口动物源性食品中非甾体类抗炎药残留量检测方法液相色谱质谱／质谱法１　范围本标准规定了进出口动物源性食品中２０种非甾体类抗炎药残留量的液相色谱质谱／质谱测定方法。本标准适用于牛肉、猪肝、兔肝、牛奶和鸡蛋中对乙酰氨基酚、邻乙酰水杨酸（残留标示物：水杨酸）、卡洛芬、酮洛芬、托芬那酸、美洛昔康、氟尼辛、布洛芬、非诺洛芬、甲芬那酸、萘普生、双氯芬酸、吡罗昔康、二氟尼柳、氟比洛芬、萘丁美酮、舒林酸、托美汀、吲哚美辛和苯基丁氮酮残留量的检测。２　方法提要用乙腈提取试样中残留的非甾体类抗炎药，经正己烷去除脂肪后，采用液相色谱质谱／质谱检测，外标法定量。３　试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为去离子水或相当纯度的水。３．１　乙腈：高效液相色谱级。３．２　正己烷：高效液相色谱级。３．３　甲醇：高效液相色谱级。３．４　甲酸：高效液相色谱级。３．５　乙酸铵。３．６　无水硫酸钠：６５０℃灼烧４ｈ，置于干燥器中备用。３．７　乙腈饱和的正己烷：１００ｍＬ乙腈（３．１）中加入１００ｍＬ正己烷（３．２），充分振荡后，静置分层，取上层液体。３．８　０．１％甲酸水溶液（含０．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵）：准确量取１ｍＬ甲酸（３．４）和称取０．０３８６ｇ乙酸铵（３．５）于１Ｌ容量瓶中，用水定容至１Ｌ。３．９　稀释液：０．１％甲酸水溶液（含０．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵）（３．８）乙腈（８０＋２０，体积比）。３．１０　标准品：对乙酰氨基酚、水杨酸、卡洛芬、酮洛芬、托芬那酸、美洛昔康、氟尼辛、布洛芬、非诺洛芬、甲芬那酸、萘普生、双氯芬酸、吡罗昔康、二氟尼柳、氟比洛芬、萘丁美酮、舒林酸、托美汀、吲哚美辛和苯基丁氮酮，纯度大于等于９９％。标准物质信息见附录Ａ表Ａ．１。３．１１　标准储备溶液：称取各药物标准品（３．１０）（精确至０．１ｍｇ），用乙腈溶解，配制成浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准储备溶液，－１８℃冷冻避光保存。３．１２　中间标准溶液：分别移取１ｍＬ单个药物的标准储备液于１０ｍＬ容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为１０μｇ／ｍＬ的中间标准溶液，０℃～４℃冷藏避光保存。３．１３　混合标准工作溶液：根据需要用稀释液（３．９）稀释中间标准溶液（３．１２）成适合浓度的混合标准工作溶液，现用现配。３．１４　微孔滤膜：０．２μｍ，有机相。１犛犖／犜２１９０—２００８４　仪器和设备４．１　液相色谱质谱／质谱仪：配备电喷雾离子源（ＥＳＩ）。４．２　组织捣碎机。４．３　天平：感量为０．０００１ｇ和０．００１ｇ。４．４　均质器：１００００ｒ／ｍｉｎ。４．５　振荡器。４．６　离心机：１００００ｒ／ｍｉｎ。４．７　减压浓缩仪。４．８　超声波水浴。４．９　涡旋混合器。４．１０　具塞离心管：聚四氟乙烯，５０ｍＬ。５　试样制备与保存５．１　牛肉、猪肝、兔肝从原始样品取出有代表性样品约５００ｇ，用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于－１８℃冷冻避光保存。５．２　牛奶从原始样品取出有代表性样品约５００ｇ，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于０℃～４℃冷藏避光保存。５．３　鸡蛋从原始样品取出有代表性样品约５００ｇ，去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于０℃～４℃冷藏避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。６　测定步骤６．１　提取和净化称取约５ｇ试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，加入适量无水硫酸钠（３．６），再加入２０ｍＬ乙腈，用均质器以１００００ｒ／ｍｉｎ均质２ｍｉｎ，再用振荡器振摇提取２０ｍｉｎ后，１００００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，收集上清液于１２５ｍＬ分液漏斗中。残渣用２０ｍＬ乙腈再提取一次。合并上清液，加入２０ｍＬ乙腈饱和后的正己烷（３．７），振荡５ｍｉｎ，静置２０ｍｉｎ，收集下层液体。４０℃水浴中减压浓缩至近干，残留物依次用０．５ｍＬ乙腈、０．５ｍＬ和１．０ｍＬ０．１％甲酸水溶液（含０．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵）（３．８）溶解，超声波水浴助溶３０ｓ后，转移至１０ｍＬ刻度试管，用０．１％甲酸水溶液（含０．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵）定容到２ｍＬ，再加入２ｍＬ乙腈饱和后的正己烷混匀３０ｓ后静置，取下层液体，１００００ｒ／ｍｉｎ离心后过０．２μｍ微孔滤膜（３．１４），待测定。６．２　基质混合标准溶液的制备称取５份约５ｇ阴性试样（精确至０．０１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，按照标准曲线最终定容浓度分别加入中间标准溶液（３．１２）或混合标准工作溶液（３．１３），余下操作同６．１。６．３　测定６．３．１　液相色谱条件６．３．１．１　色谱柱：ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＴＭＢＥＨＣ１８，２．１ｍｍ×５０ｍｍ（内径），１．７μｍ，或相当者。６．３．１．２　流动相及洗脱条件（梯度为线性变化）见表１。６．３．１．３　柱温：３０℃。６．３．１．４　流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ。６．３．１．５　进样量：１０μＬ。２犛犖／犜２１９０—２００８６．３．２　质谱条件参见附录Ｂ，其中氮气和氩气纯度均大于等于９９．９９９％。表１　液相色谱洗脱条件时间／ｍｉｎＡ　乙腈／％Ｂ　０．１％甲酸水溶液（含０．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵）／％０～３１０９０３～４．５１０～４０９０～６０４．５～６．５４０６０６．５～９４０～９０６０～１０９～１１９０１０１１～１２９０～１０１０～９０１２～１５１０９０６．３．３　色谱测定根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的混合基质标准溶液，待测样液中非甾体类抗炎药的响应值应在仪器检测的线性范围内。对混合基质标准溶液及样液（６．１）等体积参插进样测定。在上述仪器条件下，２０种非甾体类抗炎药的保留时间参见附录Ｂ表Ｂ．２。液相色谱质谱／质谱色谱图参见附录Ｃ图Ｃ．１。６．３．４　定性测定按照上述条件测定样品和混合基质标准工作液，如果检测的质量色谱峰保留时间与混合基质标准工作液一致，允许偏差小于±２．５％；定性离子对的相对丰度与浓度相当混合基质标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表２的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表２　定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度／％＞５０＞２０～５０＞１０～２０≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０６．４　空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。７　结果计算和表达试样中的残留含量，按式（１）计算，计算结果需将空白值扣除。犡犻＝犃×犮×犞犃ｓ×犿×１０００…………………………（１）　　式中：犡犻———试样中残留药物含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；犃———样液中药物的峰面积；犮———基质标准溶液中药物的浓度，单位为纳克每毫升（ｎｇ／ｍＬ）；犞———样液最终定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犃ｓ———基质标准溶液中药物的峰面积；犿———最终样液所代表的试样质量，单位为克（ｇ）。８　测定低限和回收率８．１　测定低限本标准的测定低限为：———吡罗昔康、托美汀、酮洛芬、氟尼辛：１μｇ／ｋｇ；———对乙酰氨基酚、舒林酸、美洛昔康、氟比洛芬、吲哚美辛、双氯芬酸、苯基丁氮酮、甲芬那酸：３犛犖／犜２１９０—２００８５μｇ／ｋｇ；　　———邻乙酰水杨酸（残留标示物：水杨酸）、二氟尼柳、非诺洛芬、布洛芬、萘丁美酮、托芬那酸：２０μｇ／ｋｇ；———萘普生：２５μｇ／ｋｇ；———卡洛芬：５０μｇ／ｋｇ。８．２　回收率见表３。表３　２０种非甾体类抗炎药添加回收率（狀＝１０）化合物添加浓度／（μｇ／ｋｇ）回收率范围／％猪肝兔肝鸡蛋牛奶牛肉对乙酰氨基酚５８５．７～１０３．４９４．２～１０６．５９１．５～１０５．８８６．５～１０２．５８７．２～１０５．１２０８６．９～１０６．７８７．２～１０２．０９３．５～１０５．４８７．２～１０２．２８６．２～１０７．３１００８６．６～１００．７８２．７～１０６．３８５．９～１０２．８８６．５～１０２．３８２．６～１０４．７水杨酸２０９６．８～１０７．７８８．３～１０５．２８５．９～１０６．５９２．０～１０３．３８２．７～１０１．３８０８９．９～１０４．７８６．４～１０６．７８３．９～９８．６８７．３～９８．７９４．２～１０４．８１５０８９．７～１０６．４８８．５～９８．８８４．５～１０５．３８６．２～１０２．５８７．３～１０５．３吡罗昔康１９５．７～１０７．５８１．３～１０９．０８５．９～１０５．６８８．７～１０６．８８７．６～１０５．７１０８９．７～１０４．６８７．４～１０７．３８７．５～１０５．２８５．９～１０２．８８５．４～１０８．３５０８６．７～１０５．７８６．７～９８．６８４．７～１０５．６８９．５～１０５．５９３．１～９９．６舒林酸５８７．３～１０１．４９１．３～１０４．７８４．２～１０２．３８８．６～１０３．４９６．４～１０５．１２０８６．４～９８．５９１．０～１０７．５８５．９～１０３．５８６．７～１０６．７８６．１～１０７．３１００８５．５～１０４．２８６．７～１０３．２８９．３～１０２．４８６．５～１０４．５８５．３～１０８．４托美汀１９５．６～１０５．４８４．７～１０５．３８８．０～１０４．８９５．４～１０５．８８４．９～１０９．６１０８３．４～１０６．３８２．７～１０３．７８５．８～１０５．８９１．８～１０５．５８６．１～１０５．４５０８７．２～１０２．２８８．３～１０３．２８４．２～１０４．２９１．５～１０３．６８６．７～９８．６酮洛芬１９５．７～１０８．８９６．４～１０７．５８７．２～１０５．７８５．６～１０５．２８７．３～１０８．７１０８５．４～１０２．１８６．４～１０６．３９０．４～１０８．９８７．５～１０６．４８３．７～１０６．８５０８８．３～９８．３８８．７～９８．８８７．５～１０６．４８４．９～１０３．８８３．４～１０７．２萘普生２５８６．５～９８．３８９．１～１０３．６８４．６～９７．５８４．６～９８．１８７．６～１０６．４８０８６．９～９６．７８６．４～１０２．４８７．６～１０８．２９３．２～１０３．３８３．７～１０６．７１５０９３．２～１０２．５８４．９～１０２．３８７．２～１０１．７８６．９～１０１．０８３．４～１０６．６美洛昔康５８３．２～１００．６９７．３～１０８．３８１．８～１０３．２８６．９～１０７．２８３．８～１０６．２２０８６．５～１０２．４８６．７～１０５．４９２．２～１０６．７８７．２～１０６．３９３．０～１０５．６１００８４．７～１０３．７８７．５～１０２．３８９．３～１０６．４８７．９～９８．３８４．７～１０６．４氟尼辛１８５．７～１０５．０９７．１～１０８．２９６．０～１０７．５９４．０～１０６．７８７．１～１０８．３１０８８．３～１０３．６８７．２～１０６．５８１．５～１０５．７８７．０～１０２．７８７．６～１０５．６５０８４．６～１００．８９１．７～１０６．２８５．３～１０６．４８６．９～１０５．４８３．７～１０６．４二氟尼柳２０８５．３～１０４．５８８．３～１０３．５８４．９～１０５．４８