SNT 2061-2008 进出口蜂王浆中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２０６１—２００８进出口蜂王浆中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狀犻狋狉狅犳狌狉犪狀犿犲狋犪犫狅犾犻狋犲狊狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狉狅狔犪犾犼犲犾犾狔犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犎犘犔犆犕犛／犕犛２００８０４２９发布２００８１１０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前!!言!!本标准的附录!!附录为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位#中华人民共和国浙江出入境检验检疫局本标准主要起草人#陈笑梅!刘海山!谢文!单慧君!俞春燕!杨磊!钱艳!吴娟本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准!!!#!#$!%进出口蜂王浆中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱$质谱!质谱法$!范围本标准规定了蜂王浆中呋喃唑酮代谢物#$氨基$%$嗯唑烷酮$#$!&’()$)*+,)-’.’($%$)(/%!01&!呋喃它酮代谢物#$氨基$2$吗啉代甲基$%$嗯唑烷酮$#$!&’()$2$&)345)-’()&/657-$)*+,)-’.’($%$)(/%!801&!呋喃西林代谢物氨基脲$9/&’:+3;+,’./%=8&和呋喃妥因代谢物$氨基乙内酰脲$$+&’()57$.+(6)’(%!?@&质谱’质谱测定方法本标准适用于蜂王浆中!01!!801!=8和!?@残留的定性确证和定量测定!!方法提要样品经稀盐酸水解蛋白结合态中的硝基呋喃代谢物%用%$硝基苯甲醛$%$A!&衍生化%三氯乙酸沉淀去除蛋白质%调4?值BC2后%清液过?D小柱净化%分析物采用液相色谱$串联质谱测定%内标法定量&!试剂和材料除另有规定外%试剂均为分析纯%水为超纯水&C$!甲醇#色谱纯&C!!乙腈#色谱纯&C&!乙酸乙酯#色谱纯&C’!邻硝基苯甲醛$%$A!&&C(!二甲亚砜#色谱纯&C#!乙酸铵#色谱纯&C)!2&&)-’D乙酸铵水溶液#称取ECFG乙酸铵溶于适量水中%再定容到2EE&D&C%!2EH三氯乙酸#称2EG三氯乙酸%加2EG水溶解&C*!&)-’D氢氧化钠溶液#称取IEG氢氧化钠%用水溶解定容至EEE&D&C$!%$A!衍生剂$2E&&)-’D&#称取ECE#BJG邻硝基苯甲醛到烧杯中%加入2&D二甲亚砜溶解%该溶液的浓度为2E&&)-’D%现配&C$$!EC&)-’D磷酸氢二钾#称取JCBG无水磷酸氢二钾%加入2EE&D水溶解&C$!!EC%&)-’D盐酸溶液#量取B&D浓盐酸用水定容至EEE&D&C$&!EC%H乙酸$乙腈$BK#%体积比&#EC%H乙酸BE&D与#E&D乙腈混匀&C$’!标准溶液配制&C$’C$!硝基呋喃类代谢物标准品#!01!=8(?L-!!?@(?L-!!801纯度均大于FFH&C$’C!!硝基呋喃类代谢物同位素标准品#!01$@I纯度大于FJH%L!$2A%$#L(?L-纯度大于FFH%!?@$#L#纯度大于FJH%!801$@2纯度大于FJH&C$’C&!标准储备液#分别称取适量!01!!801!=8(?L-和!?@(?L-硝基呋喃代谢物标准%用甲醇溶解并定容CE&G’&D%EMIM保存%有效期N个月&C$’C’!混合标准溶液#分别准确移取适量CE&G’&D!01!=8!!?@!!801标准储备液$#CN&%!!#!#$!%用甲醇稀释定容至E(G’&D%EMIM保存%有效期B.&C$’C(!同位素内标储备液#分别称取适量!01$@I!!?@$#L#!!801$@2和L!$2A%$#L(?L-硝基呋喃代谢物同位素标准品%用甲醇溶解并定容到%2&D棕色容量瓶中%该溶液浓度为CE&G’&D%EMIM保存&C$’C#!混合同位素内标溶液#分别准确移取适量&G’&D!01$@I!L!$2A%$#L!!?@$#L#!!801$@2储备液$#CIC#&%用甲醇稀释定容为E(G’&D%EMIM保存&C$’C)!混合标准工作溶液#分别取混合标准溶液$#CICI&E#D%NE#D%EE#D%%EE#D%IEE#D%EEE#D加入混合同位素内标溶液$#CICN&%EE#D%#&DEC%&)-’D稀盐酸和EE#D%$A!衍生剂%混匀后#BM放置过夜用&)-’D氢氧化钠溶液调节4?BC2OEC%%2&D乙酸乙酯液液萃取%将有机相在IEM氮吹至干后%用CE&DEC%H乙酸$乙腈$BK#%体积比&$#C#&溶解残渣%该混合标准工作溶液相当于样品中含有E#G’PG%EC##G’PG%EC2#G’PG%CE#G’PG%%CE#G’PG%2CE#G’PG的硝基呋喃代谢物残留&C$(!?D小柱#0!Q?D小柱%NE&G%#&D或相当者使用前用2&D甲醇和2&D水预淋洗’!仪器和设备’C$!液相色谱$质谱’质谱联用仪#配有电喷雾源$=Q&’C!!旋转浓缩器’C&!混匀器’C’!真空固相萃取装置’C(!4?计#测量精度OECE%’C#!浓缩瓶#EE&D’C)!具盖塑料离心管#2E&D’C%!离心机#IEEE3’&’(’C*!烘箱(!试样制备与保存取2EEG代表性蜂王浆样品%在室温下解冻%等样品全部融化后搅匀%将试样均分成两份%分别装入样品瓶中%密封%并标明标记一份作为试验样%另一份在RJM保存在制样的操作过程中%应防止样品污染或发生残留物含量的变化#!测定步骤#%$!提取和净化称取混匀的蜂王浆样品%G$精确至ECEG&于2E&D具盖塑料离心管中%分别加入%EE#D混合同位素内标溶液$#CICN&%%2&DEC%&)-’D盐酸溶液和EE#D%$A!衍生剂$#CE&%混匀后放入#BMO%M烘箱内%避光放置过夜加CE&D2EH三氯乙酸%轻轻混匀后%IEEE3’&’(离心2&’(%将上清液过滤滤液用&)-’D氢氧化钠溶液调节4?BC2OEC%%过经预淋洗的?D小柱$#C2&%再加E&D水清洗?D小柱%用E&D乙酸乙酯洗脱%收集洗脱液%IEM以下真空浓缩至干后%用CE&DEC%H乙酸$乙腈$BK#%体积比&$#C#&溶解残渣%过ECI2#&的滤膜%滤液供液相色谱串联质谱测定#%!!测定#%!%$!液相色谱串联质谱条件+&!色谱柱#LJ2E&&S2&&%2#&或相当者);&!流动相梯度洗脱条件见表):&!流速#EE#D’&’()%!!#!#$!%.&!进样量##E#D)!!/&!离子源#电喷雾离子源)T&!扫描方式#正离子扫描)G&!检测方式#多反应监测$8U8&)5&!分辨率#单位分辨)’&!其他参考条件参见附录!表$!梯度洗脱条件时间’&’(乙腈’H2&&)-’D醋酸铵水溶液’HECE#EBEBFEE%FEE%C#EBEB#EBE#%!%!!液相色谱!串联质谱测定根据试样中被测样液的含量情况%选取响应值相近的标准工作液进行色谱分析标准工作液和样液中待测物的响应值均应在校正曲线线性响应范围内%如果超出%应稀释在上述色谱条件下=8!!?@!!801和!10的参考保留时间分别约为FCJ&’(!EC&’(!ECB&’(和C%&’(%四种硝基呋喃代谢物标准品多反应监测$8U8&色谱图参见附录中图C#%!%&!定性测定按照上述条件测定样品和标准工作溶液%如果样品的质量色谱峰保留时间与标准品一致%允许偏差小于O%C2H)定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致%相对丰度允许偏差不超过表%规定的范围%则可判断样品中存在相应的被测物表!!定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度’H2E#2E%E#%EE$E允许的相对偏差’HO%EO%2O#EO2E#%!%’!定量测定按照内标法进行定量计算#%!%(!空白试验除不加试样外%均按上述操作步骤进行)!结果计算和表述用色谱数据处理机或用式$&计算试样中硝基呋喃代谢物残留含量#!#$E%&’%#’9%&E%(&$E%#E%&’9%)’%EEH**********$&!!式中#!+++试样中被测组分的残留量)#VE+++样品溶液中内标物的浓度)&’+++样品溶液中待测组分的峰面积)&VE+++样品溶液中内标物峰面积)#’9+++标准溶液的浓度)#E+++标准溶液中内标物的浓度)&’9+++标准溶液峰面积)&E+++标准溶液中内标物峰面积)#!!#!#$!%(+++样品溶液最终定容的体积))’+++样品溶液所代表的试样质量%单位为克$G&%!测定低限!回收率%%$!测定低限硝基呋喃类代谢物残留测定低限均为EC2#G’PG%%!!回收率在蜂王浆样品中添加硝基呋喃类代谢物浓度在EC2#G’PG!CE#G’PG!%CE#G’PG时%回收率见表#表&!蜂王浆中硝基呋喃类代谢物测定回收率范围添加浓度EC2#G’PGCE#G’PG%CE#G’PG=8JBCNHEICEHJFCHENCEHFCEHENCEH!?@JBC%HEECIHJBCNHE%CEHJICEHFBCEH!801FCNHE#C%HFECBHEICEHJBC2HEICEH!01FCNHEIC%HJFCNHE2CEHJJCEHECEHI!!#!#$!%附!录!&$资料性附录&&’(’)*$+!!+!系统电喷雾离子源参考条件$&!!监测离子对及电压!气压参数#+&!气帘气压力$LWU&#B%C#B2PX+$%2X9’&);&!雾化气压力$Y&#%JFC2FPX+$I%X9’&):&!辅助气压力$Y%&##EC%B2PX+$I2X9’&).&!电喷雾电压$Q&#IJEEZ)/&!离子源温度$[=8&[=8#2IEM)T&!碰撞气压力$L!@&##ICIB2PX+$2X9’&)G&!=X电压#FZ)5&!离子对!@X!L=和L\X见表!C表&C$!离子对!,’!*-和*.’名!!称定性离子对&’,保留时间’&’(去簇电压$@X&’Z碰撞气能量$L=&’Z碰撞室出口电压$L\X&’Z=8$A!%EFC%’NNC%+FCJNE2%EFC%’F%C%FCJNEBL!$2A%$#L$A!%%C%’NJC%FCJNE2!?@$A!%IFC%’#IC+ECNNJ%IFC%’EICECNN#%!?@$#L#$A!%2%C%’#IC%ECNNJ!801$A!##2C%’%N%C#+ECBNN%2J##2C%’%FC#ECBNNBCBJ!801$@2$A!#IEC#’%FNCIECBNNJ!01$A!%#NC%’#IC%+C%NNJC#%%#NC%’EICC%NN#%J!01$@I$A!%IEC%’#IC%C%NNJ+为定量离子对&!非商业性声明#附录!所列参数是在!XQIEEE质谱仪完成的%此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考%并不涉及商业目的%鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器2!!#!#$!%附!录!/$资料性附录&硝基呋喃类代谢物标准品多反应监测$+0+&色谱图图/C$!硝基呋喃类代谢物标准品$!%!1!21&和同位素内标$$%!1!21&多反应监测$+0+&色谱图N!!#!#$!%!#$%#&’(($)’!*(($)+,-./00-*(&*#&*#$1-./(,#2*-/3$*(($)$045./00-*(&*#&/06#60$&17*(&/08(&$#-.$9.*#:$,;$#-/,/9*-/(*(&’99#$&/-*-/(’&2/(/0-#*-/(,-.$=$6$,0?$681/9,;./(*C5./00-*(&*#&/0&#*,-$&17@.$A/*(:B(-#7B)/-C(06$9-/(*(&D8*#*(-/($+8#$*8,-.$=$6$,0?$681/9,;./(*C5.$2*/(&#*,-$#0,-./00-*(&*#&*#$;.$(E/*2$/%F/8G*/0.*(%E