新手指南——荧光免疫印迹(Western-Blot)实验服务步骤原理

新手指南——荧光免疫印迹（WesternBlot）实验服务步骤原理一，实验原理WB（Westernblot），即免疫印迹（immunoblotting），是一项在分子生物学、生物化学、免疫学等领域中应用非常广泛的技术。这一技术利用抗体与组织或细胞样品中特定蛋白的特异性结合作用，根据条带的位置和强弱实现蛋白鉴定和表达分析。常用的WB显色方法是ECL化学发光法。而随着荧光检测的普及，许多科研人员将westernblot的检测方法从化学发光转到多重荧光。这是因为荧光检测能够实现多重westernblot分析，并生成可定量的精准数据满足期刊杂志对于数据发表的要求。荧光检测解决了化学发光检测所面临的一些局限性，例如：数据的重现性，半定量，动态范围等问题。所以荧光Westernblot变得越来越流行。对于需要更复杂的信号线性分析和蛋白丰度相关性的研究人员来说，荧光方法是一个很好的选择。二、荧光WB的优势：可以同时检测多个目的蛋白：可以区分分子量相近的蛋白：可准确定量：低背景，高信噪比：线性范围更广，适合检测低丰度蛋白：三、荧光WB技术操作步骤蛋白样本制备及含量检测；SDS-PAGE凝胶电泳；转膜及抗体结合反应；LI-COROdyssey红外激光扫描成像系扫描四、客户提供及送样要求需检测的样品；一抗（可自行提供，或在本公司购买相应指标）；内参抗体由安赛思提供。送样要求：离体后迅速超低温处理并-80℃冻存的组织样品，干冰运输；组织：动物组织应不少于100mg，植物组织不少于500mg；细胞：大于5×106个细胞；煮沸变性后的蛋白样本，冰袋运输。五、最终交付WB检测结果图片和完整实验报告七、安赛思案例展示红色：GAPDH-Dylight680;绿色：AKTDylight800