DB13T 2196-2015 猪链球菌病防治技术规程

ICS11.220B41DB13河北省地方标准DB13/T2196—2015代替DB13/T693-2005猪链球菌病防治技术规程2015-05-11发布2015-07-01实施河北省质量技术监督局发布DB13/T2196—2015I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准是对DB13/T693-2005《猪链球菌病防治技术规程》的修订。本标准与DB13/T693-2005标准的主要差异如下：——删除了4.5.3“动物试验”和4.5.4“耐胆汁水解七叶苷试验”两部分；——删除了4.6.1“免疫荧光抗体技术”和4.6.2“SP^协同凝集试验”两部分；——增加了4.5.1“样品采集”，见4.5.1；——增加了4.5.4“生化反应”，见4.5.4；——增加了4.5.5“猪链球菌2型定型PCR检测”，见4.5.5；——增加了4.5.6“猪链球菌2型相关毒力因子PCR检测”，见4.5.6；——增加了4.6.2“玻片凝集试验”，见4.6.2；——增加了相关消毒措施，见5.1.1；——对5.1.3中“用猪链球菌氢氧化铝菌苗或猪链球菌弱毒苗进行免疫注射”，改为“用猪链球菌病多价灭活疫苗或猪链球菌病活疫苗进行免疫注射”，见5.1.3；——对5.1.5中“用20%的磺胺嘧啶钠30mL/50kg肌注”改为“用阿莫西林10～15mg/kg体重或环丙沙星5～15mg/kg体重拌料”，见5.1.5；——将5.2中治疗效果较差的庆大霉素改用头孢噻呋钠。另外，增加了针对脑膜炎型链球菌病的治疗措施，见5.2.1和5.2.2。本标准由河北科技师范学院提出。本标准起草单位：河北科技师范学院、河北农业大学。本标准主要起草人:马增军、史万玉、芮萍、刘谢荣、杨彩然、王秋悦、吴建华、宋勤叶、张铁、袁万哲。DB13/T2196—20151猪链球菌病防治技术规程1范围本标准规定了链球菌病的诊断方法和防治措施。本标准适用于猪链球菌病的防治。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB16548畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程GB/T17823中、小型集约化养猪场兽医防疫工作规程GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T19915.3猪链球菌2型PCR定型检测技术GB/T19915.4猪链球菌2型三重PCR检测方法GB/T19915.5猪链球菌2型多重PCR检测方法GB/T19915.7猪链球菌2型荧光PCR检测方法GB/T19915.8猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法GB/T19915.9猪链球菌2型溶血素基因PCR检测方法NY5030无公害食品生猪饲养兽药使用准则NY5031无公害食品生猪饲养兽医防疫准则中华人民共和国兽药典2010年版第一部中华人民共和国兽药规范3术语和定义下列定义和术语适用于本文件。3.1猪链球菌病由多种致病性链球菌感染引起的一种人畜共患病，为法定二类动物疫病。其主要特征是败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎以及关节炎。3.2猪链球菌2型属于链球菌属的一种细菌，根据其荚膜多糖抗原的差异，可分为1～34及1/2共35个血清型。猪链球菌2型是猪链球菌的一个血清型，不仅对猪致病性很强，而且可以感染特定的人群，是一种重要的人畜共患病病原菌。DB13/T2196—201524诊断4.1病原根据群特异性抗原（C抗原）不同，用兰氏(LanceFeld)血清学分类，可将链球菌分成A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U等19个血清群。引起猪链球菌病的病原，C群中以兽疫链球菌(S．zooepidemicus)和类马链球菌(S．equisimilis)为主，D群中为猪链球菌(S．suis)，以及E、L、S、R等群。猪败血型链球菌病病原主要为C群马链球菌兽疫亚种及类马链球菌，D群、L群链球菌也能引发本病。猪脑膜炎型链球菌病主要由C群链球菌所引起，猪链球菌也可引起。猪淋巴结脓肿型链球菌病多由E群链球菌引起，又称化脓性淋巴结炎。此外C、D、E、L群β型溶血性链球菌也可经呼吸道感染，引起肺炎或胸膜肺炎，经生殖道感染引起不育和流产。猪链球菌2型也是近几年引发猪链球菌病的主要病原菌。4.2流行特点4.2.1本病一年四季均可发生，但以10月至次年3月份较多。各种年龄猪对致病性链球菌株均有易感性，常常是断奶前后仔猪多发，但败血症型和脑膜炎型多见于仔猪，而淋巴结炎型多发于中猪。本病的流行大多呈地方性流行，也有个别呈现流行性，甚至暴发性。4.2.2病猪和病愈带菌猪是本病自然流行的主要传染源。从病猪的鼻液、尿、粪、唾液、内脏及肿胀的关节内均可检出病原体。未经无害化处理的病、死猪及其肉和内脏等废弃物是散播本病的主要原因。4.2.3本病多经呼吸道和消化道感染，病猪与健康猪接触，或由病猪排泄物（尿、粪、唾液等）污染的饲料、饮水以及器物等可引起猪只大批发病而造成流行。4.3临床症状4.3.1败血型猪链球菌病根据病程长短败血型猪链球菌病分为最急性型、急性型和慢性型三种类型。最急性型：在流行初期多见，有时未见任何症状即死亡；多见食欲不振或废绝，体温升高达40.5℃～43℃，精神萎顿、呼吸困难、便秘、粪干硬、结膜发绀，突然倒地，从口、鼻流出淡红色泡沫样液体。多在6h～24h内迅速死亡。急性型：常见精神沉郁，体温40.5℃～42℃，呈稽留热，精神沉郁、呆立、嗜卧、食欲减退或废绝、喜饮水。眼结膜潮红，流泪，有浆液性或脓性鼻汁，呼吸促迫。少数病猪在后期于耳尖、四肢下端以及腹下出现紫红色或出血性红斑。有的猪出现运动失调、磨牙、空嚼或昏睡等神经症状，病猪常在2～5d内因心力衰竭死亡，病死率高达80％～90％。慢性型：多由急性型转来，主要表现多发性关节炎，表现一肢或多肢关节肿胀、疼痛、高度跛行，甚至不能站立，严重者后肢瘫痪。病程较长，可达2～3周，病猪因心力衰竭、麻痹死亡，或逐渐好转而恢复。4.3.2脑膜炎型猪链球菌病主要由C群链球菌所引起，以脑膜炎为主症。多见于哺乳仔猪和断奶后小猪，病初体温升高至40.5℃～42.5℃，便秘，有浆液性或黏液性鼻汁，继而病猪很快表现出神经症状，盲目走动，步态不稳，作转圈运动、空嚼、磨牙、仰卧、直至后躯麻痹，侧卧于地，四肢呈游泳状运动，触及躯体时，发出尖叫或抽搐。急性者几小时或1d～2d内死亡。病程稍长者，主要表现为多发性关节炎，逐渐消瘦衰竭死亡或转愈。DB13/T2196—201534.3.3淋巴结脓肿型猪链球菌病多见于颌下淋巴结，发生化脓性炎症，其次是咽部、耳下和颈部淋巴结。病变淋巴结首先出现小脓肿，逐渐肿大，感染后3周达5cm以上，局部显著隆起，触诊坚硬、发炎肿胀、有热痛，可影响采食、咀嚼、吞咽，甚至呼吸障碍，体温升高。有的表现咳嗽、流鼻汁。之后，脓肿中央逐渐变软，成熟后自行破溃，流出带黄绿色稠厚、无臭味的脓汁。此时全身症状显著减轻，脓汁排净后，化脓部位肉芽组织新生，逐渐结痂愈合后康复。病程3～5周，一般不引起死亡。4.4病理剖检变化4.4.1败血型急性败血型病猪可见如下剖检变化：a)颈下、腹下及四肢末端等处皮肤有紫红色出血斑点，急性死亡猪可从天然孔流出暗红色血液，凝固不良；b)鼻黏膜肿胀，充血及出血，呈紫红色，表面附有浆液或黏液，喉头、气管树枝状充血，常见大量泡沫，肺充血肿胀；c)全身淋巴结有不同程度的肿大、充血和出血，甚至发生坏死；d)胸腔有大量黄色或混浊液体，含微黄色纤维素絮片样物质；e)右心室扩张，心耳、心冠沟和心室内膜有出血斑点，少数可见轻度纤维素性心包炎，心肌外膜与心包膜黏连，心包液增多，心肌柔软，色淡呈煮肉样；f)多数病例脾脏肿大，少数可见增大1～3倍，呈暗红色或紫蓝色，柔软而易脆裂，包膜下有小点出血，少数病例脾边缘有黑红色的出血性梗死区，切面隆起，结构模糊；g)肝脏边缘钝厚，质硬，切面结构模糊。胆囊水肿，胆囊壁增厚；h)肾脏多为轻度肿大，充血和出血，皮质髓质界限不清，颜色黑红；i)胃肠黏膜和浆膜散在点状出血；j)脑脊髓液增多，脑膜和脊髓软膜充血、出血。个别病例脑膜下水肿，脑切面可见白质与灰质有小点状出血；k)肿大的关节囊内外有黄色胶样液体或纤维性脓性物质，关节囊膜面充血、粗糙、滑液混浊，并含有黄白色奶酪样块状物。4.4.2脑膜炎型脑膜炎型病猪可见如下剖检变化：a)脑膜充血、出血。少数脑膜下充满积液。脑切面可见白质和灰质有明显的小点出血，脊髓也有类似变化；b)心包膜有不同程度的纤维素性炎症，心包增厚，部分病例出现心包周围炎，甚至整个胸腔充满纤维素性覆盖物，腹腔有不同程度的纤维性腹膜炎；c)全身淋巴结有不同程度的肿大，充血或出血；d)其他的脏器病变不规则，类似败血性的内脏病变，部分病例内脏病变不明显；e)部分病例有多发性关节炎，关节肿大，关节囊内有黄色胶样液体，但很少见到脓性渗出物；f)部分病猪在头、颈、背、胃壁、肠系膜及胆囊壁有胶样水肿。4.4.3淋巴结脓肿型可见淋巴结出现化脓灶；当出现脓毒败血症时，肺可见转移型脓肿。DB13/T2196—201544.5病原学诊断4.5.1样品采集对病猪根据不同病型采取不同的病料，最急性和急性败血症型病例可无菌采集死亡猪的心、肝、肺、肾、脾脏、淋巴结等组织；淋巴结脓肿病猪可用无菌的注射器吸取未破溃淋巴结脓肿内的脓汁；慢性病例如关节炎型一般采取关节液及周围组织；脑膜炎型病猪，则以无菌操作采取脑膜、脊髓液及少量脑组织。对活猪可采取扁桃体拭子、鼻腔拭子。4.5.2分离培养4.5.2.1病料的分离和触片检查用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织或脓汁划线接种于普通琼脂绵羊血平板（见附录A中A.1），于36℃±1℃培养24h±2h，如菌落生长缓慢，可延长至48h±2h后观察。同时取病料做组织触片，姬姆萨染色（按GB/T4789.28的方法进行染色）后镜检，如见球菌则表明病料中可能含有链球菌。4.5.2.2扁桃体和鼻腔拭子的分离扁桃体和鼻腔拭子样品加入到含有5mL灭菌的选择性THB增菌液（见附录A中A.4）的试管中，于36℃±1℃培养24h±2h后，划线接种于选择性普通琼脂绵羊血平板（见附录A中A.2）。4.5.3初步鉴定链球菌在37℃培养24h后，在普通琼脂绵羊血平板和选择性普通琼脂绵羊血平板上形成圆形、隆起、边缘整齐、表面光滑、湿润、半透明的菌落，直径约0.3mm～lmm，菌落周围有完全透明的β溶血环，部分菌落呈现绿色α溶血环。可进一步做涂片镜检和纯培养以及生化特性检查。将可疑菌落做革兰氏染色和过氧化氢酶试验。固体培养物以双球菌或3～5个排列的短链为主，液体培养物以链状为主，无芽孢，有时可见到带荚膜的革兰氏阳性球菌（按GB/T4789.28的方法进行染色），可作初步诊断。本菌过氧化氢酶试验均为阴性。根据以上菌落生长特征、革兰氏染色、菌体形态和过氧化氢酶试验符合者，可初步确定为链球菌。4.5.4生化反应应用细菌生化鉴定分析系统进行生化鉴定，可直接鉴定到种。或重点选择做5%乳糖、海藻糖、七叶苷、甘露醇、山梨醇、马尿酸钠等糖发酵试验。猪链球菌2型发酵5%乳糖、海藻糖产酸，发酵七叶苷，不发酵甘露醇和山梨醇，不水解马尿酸钠。4.5.5猪链球菌2型定型PCR检测见GB/T19915.3中的规定。4.5.6猪链球菌2型毒力因子PCR检测必要时进行猪链球菌2型毒力因子PCR检测。PCR检测方法见GB/T19915.4，GB/T19915.5，GB/T19915.7，GB/T19915.8，GB/T19915.9。4.6血清学诊断4.6.1乳胶凝集试验DB13/T2196—20155用链球菌群或型特异血清致敏的乳胶颗粒来检测相应的链球菌特异抗原，可在数分钟内出现肉眼可见的凝集现象。4.6.2玻片凝集试验将可疑菌落接种THB肉汤（见附录A中A.3），于36℃±1℃培养18h±2h，取1.5mL培养物，经10000r/min离心3min，弃上清，用100μL生理盐水将沉淀悬浮，取25μL菌体悬浮液分别和等体积的25μL生理盐水、猪