DB22T 1896-2013 北虫草工厂化生产技术规程

ICS65.020.99B05备案号：40071-2014DB22吉林省地方标准DB22/T1896—2013北虫草工厂化生产技术规程TheTechniqueRulesofCordycepsmilitarisIndustrialProduction2013-12-04发布2013-12-31实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1896—2013I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。本标准主要起草人：温嘉伟、李启云、路杨、任金平、王继春、刘国文、李长昆。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1896—20131北虫草工厂化生产技术规程1范围本标准规定了北虫草工厂化生产的术语和定义、生产要求、技术要求、采收、包装、运输和贮存。本标准适用于北虫草工厂化生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6543运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱GB/T12728-2006食用菌术语NY/T391绿色食品产地环境技术条件NY/T528-2010食用菌菌种生产技术规程3术语和定义GB/T12728-2006界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了GB/T12728-2006中的一些术语和定义。3.1北虫草scarletcaterpillarfungus蛹虫草的子座，即子实体，由已组织化的菌丝体组成。3.2工厂化生产industrialproduction在可控的环境条件下,利用成套设施和综合技术实现周年性的规模化生产。3.3母种stockculture经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物。也称一级种，试管种。[GB/T12728-2006,定义2.5.7]3.4原种motherspawn由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1896—20132[GB/T12728-2006,定义2.5.8]3.5液体栽培种liquidspawn由固体原种移植、扩大培养而成的纯菌丝液体培养物，培养容器为玻璃瓶或发酵罐，只用于生产不能用于菌种扩繁。3.6杂菌weedmould食（药）用菌培养中引起污染的微生物。[GB/T12728-2006,定义2.7.1]3.7子实体fruitbody产生孢子的真菌组织器官。[GB/T12728-2006,定义2.2.16]4生产要求4.1环境4.1.1选址应选在远离污染源(如牲畜养殖场、垃圾场、污水排放区等）和人口密集300m以上的地方，其他按NY/T391执行。4.1.2厂房应设原料处理室、拌料室、分装室、灭菌室、冷却室、接菌室、发菌室、培养室、贮藏室、包装室。4.1.3内部环境厂房内部环境分为有菌区和无菌区。无菌区设置紫外灯，用于每天定时进行物理消毒灭菌。每天早晚用消毒液消毒各一次。4.2设备、设施4.2.1设备天平、高压灭菌锅、超净工作台或接种箱、恒温箱、显微镜及酒精灯等。高压灭菌锅应符合特种设备要求。4.2.2设施4.2.2.1控温生产车间外部采用保暖设施，内部采用空调等控温设施，保证室内温度控制到18℃～22℃之间。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1896—201334.2.2.2光照培养架上设有满足于培养子实体的光源，光照强度控制在500LUX～1000LUX之间。4.2.2.3通风每间培养室内有专用的通风口，通风口处需安装过滤风装置，室内CO2浓度不高于1000PPM。4.3人员要求经专业培训并获证的技术人员。工作人员需穿着经消毒的工作服进入。5技术要求5.1生产工艺流程生产工艺流程见图1。引进分离母种出草试验母种扩繁制作原种制作液体栽培种配制培养基接种生产管理采收包装运输贮存图1生产工艺流程图5.2操作要点5.2.1引进分离母种5.2.1.1引进引进国家或省级以上品种审定委员会通过认定的品种。5.2.1.2分离母种分离的质量要求应符合表1和表2的规定。表1母种感官要求项目要求培养基灌入量为试管总长度的五分之一到四分之一之间斜面长度顶端距棉塞或无棉塑料盖40mm～50mm菌丝生长量长满斜面接种量（接种块大小）(6～8)mm×(6～8)mm菌丝正面外观洁白、纤细、均匀、平整，菌落边缘整齐，无杂菌菌丝背面外观培养基不干缩，有菌丝体分泌的淡黄色或橘黄色色素于培养基中棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净，松紧适度，能满足透气及滤菌要求本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1896—20134表2母种微生物要求项目要求菌丝形态均匀、丝状杂菌无5.2.2出草试验引进有菌种生产资质的单位及企业所供母种或分离母种，需经过栽培试验证明其出草及农艺性状合格后方可用于繁殖。5.2.3母种扩繁无菌条件下，将分离的母种斜面培养物切割成切6mm～8mm小块，转接到PDA斜面培养基（见附录A.1）上，18℃～22℃下暗培养，待菌丝长满试管后4℃保存。5.2.4制作原种5.2.4.1容器规格应符合NY/T528-2010中的4.7.1.2的规定。5.2.4.2质量要求质量要求应符合表3的规定。表3原种质量要求项目要求培养基灌入量为试管总长度的四分之一或五分之一斜面长度顶端距棉塞或无棉塑料盖40mm～50mm菌丝生长量长满斜面接种量（接种块大小）(10～12)mm×(10～12)mm菌丝正面外观洁白、纤细、均匀、平整，菌落边缘整齐，无杂菌菌丝背面外观培养基不干缩，有菌丝体分泌的淡黄色色素于培养基中棉塞或无棉塑料盖干燥、洁净，松紧适度，能满足透气及滤菌要求5.2.5制作液体栽培种5.2.5.1容器使用规格一致的耐高温容器，容器无破损。5.2.5.2质量要求质量要求应符合表4的规定。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1896—20135表4液体栽培种的感官要求项目要求菌丝菌丝絮状或小球状，均匀一致，淡黄色杂质无培养液菌液澄清透明，菌球在菌液中分散均匀、无上浮、无沉淀气味有北虫草独有的菌香味、无异味镜检菌丝直径与分枝均匀一致，无其它真菌和细菌5.2.6配制培养基5.2.6.1配料配料比例见附录A.3。5.2.6.2灭菌高压灭菌温度达到121℃～126℃后，保持1h。常压灭菌温度达到100℃～105℃，不低于8h。5.2.6.3冷却当灭菌锅内培养基温度降至40℃～50℃时出锅，移入接种室内,冷却至25℃以下接种。5.2.7接种先将接种工具用酒精灯火焰灼烧灭菌，然后将液体生产种覆盖到冷却的固体培养基（见附录A.3）中，每瓶（35g固体培养基）接种5ml液体栽培种。5.3生产管理5.3.1发菌接种后的培养基于培养瓶中，用托盘乘放置于发菌室，可2层～5层叠放，温度控制在18℃～22℃之间，空气相对湿度控制在60%～70%之间，黑暗培养，通风换气，保持空气新鲜。5.3.2见光培养将暗培养条件下长满菌丝的培养瓶上架见光，人工控制室内温、湿度及光照强度，温度保持在18℃-22℃，湿度保持在60%～75%。5.3.3通风保持室内空气新鲜，每日定时开窗通风。5.3.4杂菌、虫害防治5.3.4.1物理防治5.3.4.1.1生产过程中调节好培养室内温湿度，避免过分干燥或潮湿，加强通风换气。5.3.4.1.2通风口安装纱网及紫灯外灭菌装置，防治螨类、虫类及杂菌进入。5.3.4.1.3生产车间内发现污染源后立即清除并高压灭菌，防治二次污染。5.3.4.1.4在无培养物的条件下采用紫外光对整个培养室内进行消毒。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1896—201365.3.4.2化学防治在无培养物的条件下采用高效、低毒化学药剂进行彻底消毒。6采收6.1标准子实体长5cm以上，顶部形成孢子囊且无孢子飞散时采收6.2方法用手按住子实体基部采下，盛器以小盘为宜，以免挤压。6.3采后管理将采收后的培养瓶清空、洗刷灭菌，可重复利用。7包装产品外包装应符合GB/T6543的规定。8运输运输时避免日晒、雨淋、防止摔撞、重压，严禁与有毒、有害、有异味物品混运。9贮存9.1烘干采收后的北虫草可在烘干箱内50℃烘干，含水量低于10%的情况下10℃～25℃下可保存12个月。9.2贮存场所贮存场所应满足防雨、防鼠、防虫、通风、干燥、清洁、阴凉、无阳光直射的要求，严禁与有毒、有害、有腐蚀性、有异味、易污染的物品混放。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1896—20137AA附录A（规范性附录）培养基配方A.1母种及原种培养基配方（马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基）马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾7.0g，硫酸镁3.5g，维生素B10.1g，琼脂粉20g，水1000mL，pH6.0～7.0。A.2液体栽培种培养基配方（马铃薯、葡萄糖培养液）马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾7.0g，硫酸镁3.5g，维生素B10.1g，水1000mL，pH6.0～7.0。A.3用于生产的培养基(每个培养瓶的标准)小麦35g，液体栽培种PDA培养液（见附录A.2）50mL，pH6.0～7.0。动物蛋白（蚕蛹或鸡蛋）20g。_________________________________本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印