DB41T 769-2012 红掌组培苗繁育技术

河南省地方标准DB41DB41/T769—2012红掌组培苗繁育技术2012-12-18发布2013-02-18实施河南省质量技术监督局发布DB41/T769-20121前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由河南省花卉协会提出并归口。本标准起草单位：济源市农业科学研究所。本标准主要起草人：王梅、陈丽、刘星明、李铭、尹国红、牛立平、郝浩浩。本标准参加起草人：成东梅、张庆社、牛小沛、李冰、汤曙光、田瑞昌、原维梓。DB41/T769-20121红掌组培苗繁育技术1范围本标准规定了红掌组培苗的培养基准备、外植体选择、接种与培养、炼苗、移栽及成苗标准内容。本标准适用于河南省境内红掌组培苗繁育技术。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4285农药安全使用标准GB17323-1998瓶装饮用纯净水中华人民共和国农业部公告第199号（2002）3培养基准备3.1培养容器准备3.1.1培养容器的清洗3.1.1.1新的培养容器直接放入洗洁精或洗衣粉溶液中浸泡；用过且无污染培养容器先倒掉容器中的残留物再浸泡；污染的培养容器先按照4.3的要求灭菌后倒掉污染物再浸泡；浸泡时间不低于6h。3.1.1.2洗刷瓶内外残留物，用清水再冲洗3遍～5遍，放入专用框中晾干。3.1.2接种器械的清洗3.1.2.1清除接种器械上的残留物，在洗洁精溶液中浸泡数分钟。3.1.2.2洗刷干净后用清水冲洗3遍～5遍并晾干。3.1.2.3用棉布或纸包好，按3.3的要求灭菌。3.2培养基配制3.2.1母液配制3.2.1.1MS培养基母液的配制见附录A。3.2.1.2植物生长物质KT、6-BA用少量0.1mol/L的HCI溶解后用蒸馏水定容，IBA、NAA用少量的95%的酒精或0.1mol/LNaOH溶解后用蒸馏水定容。3.2.2培养基制作3.2.2.1依据培养基成分准备好蒸馏水、蔗糖、琼脂和各类母液。3.2.2.2加定容总量2/3左右的水（水符合GB17323-1998），再加琼脂粉放入锅中加热搅拌使其融化。DB41/T769-201223.2.2.3琼脂粉融化后，加入蔗糖，搅拌使蔗糖溶解。3.2.2.4蔗糖溶解后，停止加热，放入吸取的各类母液，并充分搅拌。3.2.2.5搅拌均匀后，加入蒸馏水混合定容并搅拌均匀。3.2.2.6定容后，用pH计或pH试纸测pH值，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调节pH值至5.8～6.0。3.2.2.7根据不同定量分装，每瓶30ml～40ml，盖好瓶盖或用封口膜封口，3.3灭菌将分装好的培养基、蒸馏水、接种器械、无菌纸、工作服、口罩、帽子等放入高压蒸汽灭菌锅内，采用湿热空气灭菌法（灭菌压力0.11MPa～0.14MPa、温度120℃～126℃、时间15min～20min）进行灭菌。培养基高压灭菌取出后，置于室温至培养基凝固后即可使用。4外植体的选择与处理4.1外植体的选择选择观赏性状好、生长健壮、无病虫害、花期长的优良盆栽红掌品种，并选用带芽茎段为外植体。4.2外植体处理选择生长健壮的带芽茎段，在自来水下冲洗20min。在无菌室内把嫩茎放入75％的酒精中浸泡20s，用无菌水冲洗一遍，再用10％的次氯酸钠浸泡8min～10min，然后用无菌水冲洗6遍～7遍。5接种与培养5.1培养条件光照强度2000Lx,光照时间每天12h，温度25℃±2℃。5.2接种5.2.1初代培养在无菌纸上，将带芽茎段切成1cm～2cm小段，转接到初代培养基上诱导：MS+KT2.0mg/L+IBA5mg/L+蔗糖30mg/L+琼脂7mg/L。5.2.2继代培养初代培养55d～65d后，可将诱导形成的幼芽转接到MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L增殖培养基上，35d～45d转接1次，继代次数为10次～12次。5.2.3生根培养具有3片～4片叶，高2cm～3cm的无根幼苗转接到生根培养基1/2MS+IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L。DB41/T769-201236炼苗6.1环境消毒炼苗半月前，用4g～6g/m³硫磺对温室进行熏蒸消毒，用高锰酸钾800～1000倍溶液对工具浸泡30分钟后，晾干备用。6.2环境条件白天温度以25℃～32℃，夜温以21℃～24℃为宜，昀高温度不能高于32℃，昀低温度不能低于15℃，空气湿度为75％～85％，光照以1000lux～4000lux为宜。6.3方法幼苗基部长出3条以上长1.5cm～3cm的新根即可进行炼苗。炼苗时将瓶苗从培养室移到炼苗温室中，放置7d～10d后，然后打开瓶口放置2d～3d，然后再出瓶。7移栽与管理7.1环境条件昀适温度为20℃～26℃，昀高温度不能高于33℃，昀低温度不能低于15℃，空气湿度为75％～85％，遮光率为50％～60％，光照逐步提高到10000lux。7.2基质要求7.2.1要求排水透气、保水保肥、不易分解、不含有害物质、能固定植物，主要成分是草炭。7.2.2消毒基质符合GB4285标准。用前用40％甲醛稀释50倍液均匀洒于基质上充分搅拌后用薄膜密封，堆置5d后揭开薄膜摊开基质，每日翻动1次，让甲醛气体充分发挥，7d后使用。7.3移栽方法移栽前用镊子小心从瓶中取出苗，放入清水中把琼脂洗净，用800倍～100倍的50％多菌灵药液浸苗5min后移栽，移栽时用小木棍将穴盘的基质挖个小洞，然后轻轻地把苗放入，再覆上基质将根部盖住。7.4管理7.4.1幼苗阶段基质含水量70％～80％，用水符合GB17323-1998。7.4.2当新根开始生长、新叶出现时进行首次施肥，以后每隔2～3周追肥1次，施用N：P:K=20:10:20的复合肥速溶液态肥。7.4.3隔15d～25d喷洒杀菌、杀虫剂一次，施用50％多菌灵1000倍或50％甲维盐1000倍。预防为主综合防治为原则。按照GB4285和中华人民共和国农业部第199号（2002）公告规定，优先采用物理防治、生物防治，科学合理的结合化学防治，农药使用采用合理混用、轮换、交替使用。8成苗标准小苗规格为5cm～14cm，中苗规格为15cm～20cm，大苗规格为21cm～27cm。DB41/T769-20124附录A（资料性附录）MS培养基母液配制用量表表A.1给出了MS培养基母液配制用量。表A.1种类成分配1L母液称取量(mg)使用浓度(mg/L)配1L培养基吸取母液量（ml）大量元素硝酸钾KNO3190001900100硝酸铵NH4NO3165001650磷酸二氢钾KH2PO41700170硫酸镁MgSO4.7H2O3700370氯化钙CaCl2.2H2O4400440微量元素碘化钾KI830.8310硼酸H3BO36206.2硫酸锰MnSO4.4H2O223022.3硫酸锌ZnSO4.7H2O8608.6钼酸钠Na2MoO4.2H2O250.25硫酸铜CuSO4.5H2O2.50.025氯化钴CoCl22.50.025铁盐乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA.2H2O373037.310硫酸亚铁FeSO4.7H2O278027.8有机物肌醇1000010010甘氨酸2002盐酸硫胺素/VB1400.4盐酸吡哆醇/VB6500.5烟酸VB5或VPP500.5