DB32∕T 1737-2011 嗜麦芽寡养单胞菌检验

7ICS65.150B50备案号：江苏省地方标准DB32/T1737—2011DB32DB32DB32DB32嗜麦芽寡养单胞菌检验ExaminationofStenotrophomnasmaltophilia2011-04-15发布2011-06-15实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T1737-2011I前言嗜麦芽寡养单胞菌是水产养殖中危害较严重的病原菌之一，目前没有该菌的检验标准，特制定本地方标准。本标准按GB/T1.1–2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》编制。本标准由江苏省海洋与渔业局提出。本标准主要起草单位：江苏省水生动物疫病预防控制中心。本标准起草单位：江苏省水生动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：陈辉、黄春贵、邹勇、方苹、段翠兰、郭闯、王习达、陈静、郭立新、刘训猛。DB32/T1737-20111嗜麦芽寡养单细胞检验1范围本标准规定了嗜麦芽寡养单胞菌检验的设备和材料、培养基和试剂、检验程序、操作步骤。本标准适用于鱼类中嗜麦芽寡养单胞菌的检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T4789.28—2003食品卫生微生物学检验、染色法、培养基和试剂GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088—2000出入境动物检疫采样3仪器和材料3.1冰箱：0℃～4℃。3.2恒温培养箱：37℃±1℃。3.3显微镜：10×～100×。3.4均质器或灭菌乳钵。3.5电子天平：0.0g～500.0g,精度0.1g。3.6试管：16mm×160mm、15mm×100mm及相应的试管架。3.7刻度吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。3.8锥形瓶：500mL、250mL。3.9培养皿：直径90mm。3.10接种灯和接种环。3.11手术剪、镊子等。4培养基和试剂4.1营养肉汤：按GB/T4789.28-2003中4.8规定。4.2营养琼脂：按GB/T4789.28-2003中4.7规定。4.3血琼脂：按GB/T4789.28-2003中4.6规定。4.4革兰氏染色液：按GB/T4789.28-2003中2.2规定。4.5鞭毛染色法：按GB/T4789.28-2003中2.7规定。4.6实验室用水要求：按GB/T6682—2008中三级水的规格。5样品的采集与处理DB32/T1737-201125.1采样数量对有症状的水生动物，挑选3～5条，至少不低于2条濒死的个体；对无症状的水生动物，按GB/T18088—2000的规定，随机取一定数量的个体。5.2采样要求活体或刚死不久的水生动物。5.3采集部位已知或怀疑有病原存在的组织或器官。对于特殊样品如较大个体，无法采集水生动物整体时，在有条件的地方可作一定处理，但必须由具有资质的上岗人员根据检测项目的不同要求而对水生动物作适当的处理，按照检测项目的检测依据采取合适的水生动物组织。并作好样品的封存。6检验程序嗜麦芽寡养单胞菌检验程序见图1。图1嗜麦芽寡养单胞菌检验程序7操作步骤待检样品25g（mL）＋225mL灭菌营养肉汤营养琼脂37℃，18h～24h涂片革兰氏染色检验挑取典型菌落血琼脂涂片鞭毛染色检验37℃，18h～24h生化试验报告37℃，18h～24hDB32/T1737-201137.1增菌以无菌操作取检样25g（mL），加225mL灭菌营养肉汤，用均质器打碎或用乳钵磨碎，于37℃培养18h～24h后取出观察。7.2分离取增菌液1环，划线接种于营养琼脂平板一个，于37℃培养18h～24h，嗜麦芽寡养单胞菌在营养琼脂平板上容易生长，菌落呈针尖状，淡黄或浅黄色菌落。7.3涂片镜检将营养琼脂平板上典型的菌落进行革兰氏染色和鞭毛染色，镜检细菌形态和鞭毛着生情况。嗜麦芽寡养单胞菌是革兰氏阴性菌，鞭毛染色为极生多鞭毛。7.4纯培养挑取平板上的典型菌落，接种血琼脂平板，经37℃培养18h～24h，观察结果，嗜麦芽寡养单胞菌在血琼脂平板上呈淡紫绿色溶血。7.5生化试验分别接种各类生化培养基，置37℃培养24h后观察（具体内容见表1）。表1嗜麦芽寡养单胞菌的生化性状8结果判定嗜麦芽寡养单胞菌的检出，可依据以下性状报告：在营养琼脂平板上37℃培养18h～24h后，菌落呈针尖状，淡黄或浅黄色。革兰氏染色阴性，极生多鞭毛。在血琼脂平板上呈淡紫绿色溶血。氧化酶阴性，发酵麦芽糖、蔗糖和甘露糖，赖氨酸脱酸酶阳性，精氨酸阴性，还原硝酸盐为亚硝酸盐，明胶和七叶苷阳性，甘露醇和靛基质阴性。麦芽糖＋赖氨酸＋蔗糖＋精氨酸－明胶＋七叶苷＋甘露糖＋溶血＋硝酸盐还原＋靛基质－甘露醇－氧化酶－