吖啶橙溴化乙锭双荧光染色试剂盒

吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒简介：细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。MTT法是测定线粒体中特有酶的活性，反映细胞数目的变化，其结果与细胞死亡的数目未必完全一致。吖啶橙(AcridineOrange,AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料，AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光。溴化乙锭(EthidiumBromide,EB)嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。吖啶橙可透过活细胞膜，EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。组成：自备材料：1、荧光显微镜2、PBS3、细胞计数板4、载玻片、盖玻片操作步骤(仅供参考)：1、AO/EB工作液的配制：取试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，试剂(A):试剂(B):试剂(C)按照一编号名称DA0039100TStorage试剂(A):AOsolution200μl4℃避光试剂(B):EBsolution200μlRT试剂(C):AO/EBDilutionBuffer50ml4℃避光使用说明书1份定的比例稀释成AO/EB工作液。2、每份细胞样品中加入AO/EB工作液，混合均匀。3、低速离心：离心，弃上清。4、用AO/EBDilutionBuffer重悬细胞，细胞计数，将细胞密度调整。5、细胞悬液中，加入AO/EB工作液，充分混匀。6、取洁净载玻片，滴加上细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。7、在荧光显微镜B域进行观察。染色结果：注意事项：1、用能通过活细胞膜与DNA结合后发蓝色荧光的Hoechist33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的碘化吡啶(propidiumiodide，PI)对细胞进行双染的方法也比较常用。2、如有低温离心机进行离心效果更佳。3、操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。4、EBsolution有一定毒性，请小心操作。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：6个月有效。相关：活细胞绿色荧光死细胞橙色荧光编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CC0130胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)DA0001DAPI染色液(5ug/ml)DA0020Hoechst33342/PI细胞凋亡染色试剂盒DA0065台盼蓝染色液(0.4%)DC0035Pollak三色染色液NH0043SSC缓冲液(20×,pH7.0)TC0713葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)