脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)

脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)简介：脑脊液(Cerebro-SpinalFluid，CSF)是存在于脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内的无色透明液体，由脑室中的脉络丛产生，与血浆和淋巴液的性质相似。正常成年人的脑脊液，弱碱性，不含红细胞。正常脑脊液具有一定的化学成分和压力，对维持颅压的相对稳定有重要作用，当中枢神经系统受损时，脑脊液的检测成为重要的辅助诊断手段。总蛋白(TotalProtein，TP)由白蛋白和球蛋白组成。对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。Leagene脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)其检测原理是在酸性条件下，伊红解离成阴离子型，染料瞌颜色逐渐褪去，使试剂空白吸光度降低；蛋白质多肽中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸、色氨酸残基解离成带有-NH3+基团，与伊红结合成红色蛋白复合物，其吸光度与蛋白浓度呈比例，与同样处理的标准液比较，测得样本中蛋白质的含量。本试剂盒专门用于人或动物脑脊液样本中的总蛋白含量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：自备材料：1、离心管、小试管2、比色杯3、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成蛋白标准溶液，配制编号名称TC060350TTC0603100TStorage试剂(A):TP显色液A1:Eosinsolution1ml2mlRT避光A2:Acidicbuffer1ml2mlRTA3:Eosinbuffer100ml200mlRT临用前，A1：A2：A3混合，即为TP显色液。试剂(B):TPacidicbuffer3.5ml7mlRT试剂(C):蛋白标准20mg20mgRT试剂(D):蛋白标准配制液5ml5mlRT使用说明书1份后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。取适量蛋白标准溶液用蛋白标准配制液或稀释液继续进行稀释。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。一般也可以用NaCl或PBS作为稀释液。2、TP测定操作，按下表依次加入试剂：3、漩涡混匀,室温孵育。4、分光光度计测定波长处的吸光度。以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。计算：脑脊液总蛋白(mg/L)=(待测管吸光度/标准管吸光度)×700注意事项：1、蛋白标准粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。使用酶标仪测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著增加。3、相同浓度的蛋白质，白蛋白呈色稍强，球蛋白稍低。4、本方法线性范围可达1000mg/L，若CSF中蛋白含量过高，常规检查时潘氏实验达(2+)者，测定时CSF用量应适量减少，计算时应相应修正。5、本方法加入试剂后1~5min内呈进行性缓慢下降，10~30min趋于平稳，可稳定2h。6、TPacidicbuffer加入量应准确，边加边混匀，否则影响结果。有效期：6个月有效。蛋白标准配制成溶液后应-20℃冻存。加入物(ml)空白管标准管待测管蛋白标准配制液0.0325蛋白标准溶液(0.7mg/ml)0.0325待检样品(脑脊液)0.0325TPacidicbuffer0.650.0650.65TP显色液1.951.951.95