几种不同DNA聚合酶比较

合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TaqDNA聚合酶存在于水生嗜热菌(Thermusaquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性，缺少3′→5′的外切酶活性，即具有5’-3’DNA聚合酶活性和对双链DNA特异的5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。使用该产品扩增得到的PCR产物的3’末端附有一个“A”碱基，可直接用于TA克隆。由于不具有3'-5'外切酶活性，因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。TaqDNA聚合酶还具有非模板依赖性活性，可将PCR双链产物的每一条链3'加入单核苷酸尾，故可使PCR产物具有3'突出的单A核苷酸尾；另一方面，在仅有dTTP存在时，它可将平端的质粒的3'端加入单T核苷酸尾，产生3'端突出的单T核苷酸尾。应用这一特性，可实现PCR产物的T-A克隆法。适用于：普通PCR，TA克隆SuperTaqDNA聚合酶SuperTaqDNA聚合酶是由耐热的TaqDNA聚合酶和具有3’-5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶按照最合适的比例混合而成，具有扩增效率高和错配率低的优良性能，使用该产品扩增得到的PCR产物的3’末端附有一个“A”碱基，可直接用于TA克隆。适用于：要求效率高保真性好的PCR反应。UlltraPF™DNA聚合酶UlltraPF™DNAPolymerase是一种耐热的超保真DNA聚合酶，具有5’-3’聚合酶活性和3’-5’外切酶活性，具有比PfuDNAPolymerase更好的保真性能和更快的扩增效率。使用该产品扩增得到的PCR产物为平滑末端，可直接克隆于平滑末端载体中。LATaqDNA聚合酶LATaqDNApolymerase是一种具有5'-3’DNA聚合酶活性和3'-5'校对活性的聚合酶，可用于扩增较长的富含GC的片段。作为具有3'-5'校对活性的且热稳定性最强的DNA聚合酶之一，该酶可在最佳温度（75℃）催化DNA合成，且错配率低（准确率约是标准TaqDNApolymerase的10倍）。该酶可扩增人基因组DNA长达17.5kb的片段和λDNA长达20kb的片段。在较长的PCR扩增中应用LAproTaqDNApolymerase可减少拖尾效应，实际上减少背景影响。LATaqDNApolymerase扩增产物带有A尾可用于T-A克隆。LATaqDNA聚合酶的应用：LATaqDNApolymerase可应用于许多方面：扩增人基因组中长达20kb的片段；高忠实度扩增；比普通Taq聚合酶更稳定；T-A克隆；定点突变；片段分析。TthDNA聚合酶TthDNA聚合酶是一种热稳定性酶，分子量为92kDa，从ThermusthermophilusHB-8中分离。该酶在74℃时可进行DNA复制，在95℃的半衰期为20分钟。TthDNA聚合酶在镁离子存在的条件下可催化核苷酸沿5'—3'方向发生聚合反应，形成双链DNA，也可在镁离子存在的条件下，以RNA为模板沿5'—3'方向发生核苷酸聚合反应。该酶也具有5'－3'外切酶活力。TthDNA聚合酶可用于PCR、RT-PCR、逆转录和较高温度条件下的引物延伸反应。产品特点：1、RT-PCR反应的特异性增加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性2、二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于RNA二级结构引起的问题3、当加入Mg2+后，该酶的聚合活性大大增加，从而使cDNA合成与扩增可用一种酶催化。生产公司：美国promage公司PfuDNA聚合酶该酶在75℃时可进行DNA复制，PfuDNA聚合酶在镁存在的条件下可催化核苷酸沿5’→3’方向发生聚合反应，形成双链DNA，PfuDNA聚合酶具有3’→5’外切酶校正活性。当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。在所有热稳定性聚合酶中PfuDNA聚合酶的错误几率最低，错误率约为1×10-6/每碱基对，缺点是PCR扩增灵敏度较Taq低。建议PfuDNA聚合酶用于要求保真度比较高的PCR反应，引物的延伸反应以及其它的一些应用，包括克隆、DNA表达、突变分析等。PfuDNA聚合酶产生的PCR产物为平端，无末端磷酸化。若要进行“T-A”克隆，可在PCR反应完了之后，加入TaqDNA聚合酶，于72℃反应1-2小时，以便在DNA3’端附加一个“A”。GenStarPfuDNAPolymerase是将克隆有Pyrococcusfuriosis的DNA聚合酶基因在大肠杆菌中重组表达，经多次柱层析纯化而获得的高纯度、高效率耐热DNA聚合酶。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’的外切酶活性(即校读活性)，能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象，适用于对保真性要求较高的DNA片段的扩增，如基因克隆、定点突变、SNP分析等，也可用于DNA片段的末端补平。本产品扩增得到的PCR产物无3’端突出碱基，不可直接用于T载体克隆。用途：基因克隆、测序；定点突变。特点：高保真性：高纯度的酶带来优于其它品牌的保真性。VentRDNA聚合酶该酶是从Litoralis栖热球菌中分离出的，不具有5'-3'外切酶活性，但具有3'-5'外切酶活性，可以去除错配的碱基，具有校对功能。生产公司：美国NEB公司PhusionDNA聚合酶特的Phusion™DNA聚合酶是Finnzymes公司的拳头产品，其合成准确率和合成速度无与伦比。PhusionDNA聚合酶的独特的分子结构和特性使其成为基因克隆的最佳选择，为PCR扩增树立了新的标准。PhusionDNA聚合酶（以及PhusionHotStartDNA聚合酶）的出错率是4.4x10-7，比TaqDNA聚合酶低50倍、比Pfu酶低6倍，是目前市场上准确性最高的DNA聚合酶；此外其扩增速率比Pfu快10倍，比Taq酶快2倍。PhusionDNA聚合酶的应用：高保真PCR：扩增错误率只有4.4x10-7，是目前保真性最好的DNA聚合酶克隆：PhusionDNA扩增保真性最好，基因克隆的最佳选择长片段扩增：最高的核苷酸渗入率，在短时间内可以扩增更长的DNA片段DHPLC分析芯片分析生产公司：Finnzymes公司KODDNA聚合酶1、最适合于克隆反应，具备超群的准确性KODDNA多聚酶的特点是具有很高水准的准确性，而KODPlus的准确性则有了更大的提高，具有TaqDNA多聚酶82倍左右的PCR可信度，最适合于克隆。2、通过热启动PCR，提高了PCR的性能。通过采用两种抗kod单克隆抗体，抑制了PCR反应前常温状态下的多聚酶活性和3`→5`核酸外切酶活性。不需其他特殊操作即可进行热启动PCR。抗体的阻断作用在94℃、2分钟预热下即发生失活，不需要冗长的变性步骤，实现了高特异性的PCR反应。3、伸长性、扩增效果的提高对PCR反应缓冲液的组成进行了最优化重组，使之较以往的KODDNA多聚酶相比伸长性及扩增效果均有所提高，可对更多种类的目标物进行PCR反应。4、超群的耐热性因来源于超嗜热原始菌，其耐热性比TaqDNA多聚酶还要高，在100℃、1小时的热处理候仍可保持约70%的活性。故可以将热变性步骤的温度设定提高，对gc含量高的模板等具有特异性高级结构的样品非常有利。用途因准确性高，特别适用于pcr产物的克隆。另外，由于通过抗体法实现热启动反应，所以能够轻松简便地实施高特异性的pcr反应。伸长性、扩增效率也很高，可以进行更多种类目标物的pcr反应。生产公司：toyobo公司最高扩增性能的PCR酶---KOD-FX-货号：KFX-101规格：200U优势:长片断扩增效率,(λDNA40kb,基因组DNA24kb,cDNA13.5kb)高扩增效率，（1ng的模板量即可扩增）对高GC含量的模版也有很高扩增效率（70%以上GC含量也能扩增）KOD-PLUS---KOD-Plus-ver2.0货号：KOD-211规格：200U优势:世界最高水平保真度的PCR酶，是Taq酶的可信度的８２倍，pfu酶的7倍.用途:特别适合PCR产物的克隆；进行热启动PCR,实现高特异反应。高效率高速度PCR酶---KODDash货号：LDP-101规格：250U优势:世界合成速度最快的PCR酶，是Taq酶的２倍,pfu酶的6倍。用途:长距离PCR／菌落直接法PCR／病毒或细菌的快速检测／特异结构模板的PCR。IproofDNA聚合酶iProof高保真DNA聚合酶是从炽热球菌中提取所得，具有3'–5'校对功能，特别适合于长距离PCR，iProof有三种规格，既可以做一个单独酶组分，也可以配入试剂中，有如下优点：高保真：比Taq酶错配率低52倍高速度：15s能扩1kb长距离PCR能力强：只需要很少的酶0.25U即可扩37kb的产物