动物细胞工程-上课课件

动物细胞工程专题动物细胞培养10代细胞细胞悬浮液动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎细胞贴壁部分细胞“癌变”，遗传物质改变，无限传代50代细胞传代培养剥离、分瓶细胞1、过程：胰蛋白酶、分瓶原代培养细胞株细胞系几个有关概念：•原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。•传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。1）无菌、无毒：2）全部的营养物质：3）适宜的温度和PH值：4）必要的气体条件：（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）保证细胞顺利的生长增殖36.5+（-）0.5度,7.2-7.4O2和CO2（95%空气和5%CO2）2、条件：维持培养液的PH3、应用：•大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）•作为基因工程中的受体细胞•培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性•用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据核移植技术和克隆动物黑面绵羊B去核卵母细胞白面绵羊A乳腺细胞核细胞核移植重组细胞电脉冲刺激早期重组胚胎胚胎移植绵羊C的子宫妊娠、出生克隆羊多利供体取核受体去核1.概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物原理：动物体细胞核的全能性。2.体细胞核移植过程电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎卵母细胞采集、培养MⅡ期卵母细胞供体牛供体细胞注入去核卵母细胞代孕母牛体细胞培养去核卵母细胞去核胚胎移植克隆牛生出与供体遗传物质基本相同的个体1、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？提示：为使克隆动物的遗传物质全部来自优良性状的供体动物提供的体细胞。2、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？提示：10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。3、你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？提示：克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但还有少量的DNA来自于受体卵母细胞。此外，动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系。3.克隆动物的研究意义：1）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2）改良动物品种3）治疗人类疾病，作为供体4）保护濒危动物4．体细胞核移植技术存在的问题：1）许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷。2）成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。动物细胞融合1.过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、质融合）（核融合）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。2.意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。3.应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段，特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。植物体细胞杂交和动物细胞融合比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理法:离心、振动、电激化学法：聚乙二醇物理法:离心、振动、电激化学法：聚乙二醇生物法：灭活的病毒用途和意义克服远缘杂交的不亲和障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围应用：白菜-甘蓝杂种植株（1）制备单克隆抗体（2）诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症单克隆抗体1.单克隆抗体制备过程诱导其融合的方法有哪些？融合后培养液中有几种细胞怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点注射抗原的目的是什么为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选大量增殖杂交瘤细胞获得单克隆抗体的方法2.单克隆抗体的应用：１）作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与抗原特异性结合2）用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗优点：准确、高效、简易、快速单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备。优点:疗效高、毒副作用小C课堂练习1、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）①诱导融合的方法完全相同②所用的技术手段不相同③所采用的原理完全相同④都能形成杂种细胞A.①②B.①③C.②④D.③④课堂练习2、下图是单克隆抗体制备过程图，1过程注射的物质和A细胞的名称为()A、抗体、T淋巴细胞B、抗原、T淋巴细胞C、抗体、B淋巴细胞D、抗原、B淋巴细胞D3.下列哪—项属于克隆（）A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内C．将鼠骨髓瘤细胞与经免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞D．将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系D课堂练习类型比较基因工程育种细胞工程育种植物组织培养育种植物体细胞杂交育种动物细胞核移植育种优点目的性强，可以按照人们的意愿定向改造生物；育种周期短。快速繁殖、培育无病毒植株等克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出作物新品种。快速繁殖优良品种，保存濒危物种，有选择地繁殖某性别的动物。缺点技术复杂，存在安全性问题。技术要求高、培养条件严格。技术复杂，不能按人们的需要表现出亲代的优良性状。导致生物品系减少，个体生存能力下降。举例抗软化番茄、转基因鲤鱼等。制备人工种子、试管苗的培育、培养转基因植物等。白菜—甘蓝的培育、“番茄—马铃薯”的培育。“多利”羊等克隆动物的培育。