动物细胞培养和核移植2huang

动物细胞工程一、动物细胞培养1、过程动物组织胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎单个细胞制成细胞悬液装瓶原代培养接触抑制？分瓶传代培养胰蛋白酶幼龄或动物胚胎细胞株：50代内，遗传物质不变细胞系：50代后，遗传物质改变（癌变）2、原理：动物细胞有丝分裂3、条件：无毒、无菌营养温度和pH气体环境4、应用：•大规模生产蛋白质制品•检测有毒物质•医学上应用于皮肤移植，或病理、药理研究一动物细胞培养比较植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目原理植物组织培养动物细胞培养培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的一动物细胞培养比较植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目原理植物组织培养动物细胞培养培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的细胞的全能性固体培养基蔗糖、植物激素植物体快速繁殖、培育无病毒植株等细胞增殖液体培养基葡萄糖、动物血清细胞群体获得细胞或细胞产物二、动物细胞核移植和克隆动物1、某植物非常具有观赏价值，你采取什么方法来繁殖后代，使它们继承该植物的全部优良性状？２、1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t，创造了世界奶牛产量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有3－4吨。你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量为30.8t吗？问题讨论１、动物的克隆与植物克隆一样吗？２、用动物体细胞进行克隆的过程,其实际操作过程是什么？不卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞动物克隆过程的实际是细胞核移植动物体细胞核移植概念:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植（难度高）受体细胞：MⅡ期的卵母细胞1、过程思考题１、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞2、应用：畜牧业促进优良畜群繁殖保护濒危物种医疗克隆生殖性克隆治疗性克隆优点：解决供体器官不足的问题避免免疫排斥过程反对体细胞核移植技术存在的问题：1、许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。2、成功率低如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！动物细胞也能融合吗？三、动物细胞融合细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合受精作用不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂1、过程思考题1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法思考题4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能还可以利用灭活的病毒进行诱导5、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？2、概念动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程3、原理：细胞膜的流动性4、应用：①利于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等②诱导形成杂交瘤细胞，制造单克隆抗体。主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较抗体分布在哪里？如何得到抗体？四、单克隆抗体抗体的作用？抗体是由何种细胞产生的？1、抗原动物体内刺激浆细胞抗体抗原不纯抗体不纯筛选单一浆细胞不能增殖产生大量抗体2、特点：特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏二、单克隆抗体（一）传统制备抗体的方法设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂种细胞浆细胞不能无限增殖，有没有哪种细胞可以无限增殖？是否有细胞既能产生抗体又能无限增殖？有没有办法可以获得这样的细胞？1、过程注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体（选择性培养基）选择性培养基作用使亲本细胞和具有同种核的杂交细胞不能存活而杂交瘤细胞可存活诱导其融合的方法有哪些？瘤B瘤瘤BBB瘤B瘤B瘤抗体检验阳性B瘤B瘤B瘤B瘤B瘤能产生抗体的杂交瘤细胞细胞系（无限繁殖与常规抗体相比，单克隆抗体2、优点：特异性强灵敏度高产量高纯度高单克隆抗体实质：培养（克隆）单一种细胞产生特定的一种抗体3、应用：（1）、临床诊断：具有_____________________________的优点（2）、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤准确、高效、简易、快速下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______5、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC1.动物细胞工程技术的基础是：（）A．动物细胞融合B．胚胎移植C．动物细胞培养D．核移植Ｃ２．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A．结果是相同的B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同前者产生细胞群，后者产生个体前者用胰蛋白酶分散细胞，后者用酶解法去除细胞壁Ｂ前者还用灭活的病毒作诱导法３.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C