动物细胞培养和核移植技术新课

动物细胞工程动物细胞工程的技术手段动物细胞工程技术的基础动物细胞培养常用技术手段动物细胞工程动物细胞培养动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植一、动物细胞培养过程阅读“动物细胞培养过程”并思考：1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？特点是什么？2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？6、简述动物细胞培养的操作过程从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。一、动物细胞培养1、动物细胞培养的概念2.动物细胞培养的原理：细胞增殖下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是。动物胚胎或幼龄动物剪碎胰蛋白防止细胞间接触抑制现象，使细胞与培养液充分接触，便于培养（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基特有成分有__________。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第代，到这时的培养称为__。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。动物血清10原代培养胰蛋白酶细胞悬液定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。胰蛋白酶处理取出组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎单个细胞细胞悬液转入培养瓶内培养（贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。①原代培养过程图示原代培养细胞悬液CO2培养箱细胞贴壁过程■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。接触抑制原代培养：传代培养：原代培养与传代培养的区别分装之前，10代以前分装后继续培养，10代以后3.动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）保证细胞顺利的生长增殖动物细胞培养液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。与植物培养基相比其特点是：（1）液体培养基（2）含有动物血清动物体细胞大都生活在液体的环境2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、较植物组培培养基有何独特之处？独特1、液体培养基之处2、成分中有动物血清等这些组织或器官上的细胞分裂能力强3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？防止细胞间接触抑制现象，使细胞与培养液更充分接触4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，而不能发育成个体5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能6、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近4.动物细胞培养应用大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据二.动物细胞核移植技术和克隆动物将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。分类胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易；细胞分化程度高，恢复全能性不容易1.动物细胞核移植概念：2.体细胞核移植的过程：（难度高）去核注核重组细胞◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（MⅡ中期）◆激活方法：◆激活目的：◆促融方法：电刺激◆胚胎移植至代孕受体内妊娠、分娩供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。有人说它三个母亲，对吗？卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫（代孕母体）胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程重组细胞1、卵母细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞2、原因？细胞比较大，易操作细胞质中含有使体细胞核全能性表达出来的物质3、克隆过程运用的技术手段？动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植4、结论？高度分化的体细胞核具有全能性5、体现细胞核的什么功能？3.体细胞核移植技术的应用前景：1.加速家畜遗传改良的进程2.保护濒危物种3.生产医用蛋白质及组织器官的移植4.了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病3、体细胞核移植技术存在的问题P50（1）成功率非常低（2）克隆动物以表现早衰、生理缺陷等健康问题成功率低，绝大多数克隆动物存在健康问题并表现出遗传和生理缺陷：如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。小结：动物体细胞核移植技术和克隆动物过程应用前景存在问题动物细胞工程动物细胞培养培养过程培养条件应用1、在动物细胞培养过程中，下列哪种现象是不可能的（）A．细胞一直在细胞悬液中分裂生长B．有少部分细胞可能在培养条件下无限地传代下去C．有部分细胞核型会发生变化D.个别细胞会发生基因突变2、下列过程与细胞培养无关的是------------------（）A.检测有毒物质B.生产单克隆抗体C.筛选抗癌药物D.杂交育种AD练习：