动物细胞融合与单克隆抗体04029

蛇身马首鹿角兽脚鬣尾鹰爪鱼鳞虎须植物体细胞杂交过程：植物细胞A植物细胞B去除细胞壁去除细胞壁原生质体A原生质体B诱导融合融合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂（脱分化）分化发育（再分化）愈伤组织杂种植株原生质体的制备原生质体的融合筛选组织培养1、如果让动物细胞进行融合/杂交，应注意动、植物之间的哪些区别？•无细胞壁•全能性受限制，不能发育成杂种动物2、请设计动物细胞融合的流程。动物细胞融合与植物细胞杂交的不同：•无需去除细胞壁•不能培养成新的动物个体动物细胞融合过程不同DNA的两个细胞灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞1、为什么可以用灭活的病毒？2、病毒不灭活可以吗？不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。一、动物细胞融合（细胞杂交）（P52）1.概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2.结果：形成含有2或多个细胞遗传物质的单核杂交细胞3.融合原理：细胞膜的流动性4.诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒5.意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能广泛应用多个领域重要用途：制备单克隆抗体植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较(随堂P30)比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞膜的流动性细胞融合的方法去处细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合诱导方法物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒（P52）用途获得杂种植株制备单克隆抗体阅读课本P52最后一段至P53第一段，回答以下问题：1.抗体是由何种细胞产生的？2.一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗？3.动物机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？4.简述获得抗体的传统途径？这种方法获得的抗体有什么缺陷？1.抗体是由何种细胞产生的？B淋巴细胞——浆细胞（效应B细胞）2.一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗？每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.动物免疫反应产生的抗体只有一种吗？针对不同抗原，B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。传统血清抗体的制备方法：向动物体内反复注射某种抗原，使之产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。缺陷：产量低、纯度低、特异性差4.简述获得抗体的传统途径？这种方法获得的抗体有什么缺陷？科学家的设想：克隆（无性繁殖）单一的B淋巴细胞，形成细胞群，产生大量高纯度抗体。存在的困难：体外培养的B淋巴细胞不可无限增殖问题1：哪种细胞可以无限增殖呢？骨髓瘤细胞问题2：怎样让细胞既能大量繁殖，又能产生专一抗体呢？B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备单克隆抗体怎样获得大量高纯度抗体呢？单克隆抗体的制备过程二、单克隆抗体的制备问题1：怎样让动物产生特异性针对某种抗原的B淋巴细胞（浆细胞）？对动物注射这种抗原，产生免疫反应问题2：诱导融合后，培养液中会有几种细胞？如何处理？5种（B-B;B-瘤;瘤-瘤;B细胞;瘤细胞），筛选问题3：从动物体内提取B淋巴细胞时，能否确保B淋巴细胞的单一性？杂交的细胞是否都是符合要求的？不能，可能存在多种B淋巴细胞，融合为多种杂交瘤细胞，所以需多次检验、筛选后，才能大规模培养，获得专一抗体。B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合筛选（选择性培养基）杂交瘤细胞细胞培养克隆培养、抗体检测、多次筛选足够数量、能分泌单一抗体的细胞群单克隆抗体制备过程注射抗原体内培养体外培养单克隆抗体杂交瘤细胞特点：既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体。诱导融合筛选培养杂交瘤细胞(B-瘤细胞)克隆化培养抗体检测多次筛选足量单一类型杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔体内培养单克隆抗体单克隆抗体制备流程图B淋巴细胞骨髓瘤细胞小鼠免疫B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞未融合细胞(B细胞、瘤细胞)单克隆抗体的优点：纯度高,特异性强,灵敏度高,产量大选择性培养基三、单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂——最广泛的用途优点：准确、高效、简易、快速如：同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、并可大量制备（2）治疗疾病：运载药物：生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤(“生物导弹”——单抗制导瞄准，药物为弹药)主要用于癌症治疗——瞄准癌细胞的生物导弹优势：既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。动物细胞融合单克隆抗体制备过程：原理：细胞膜的流动性意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能应用：主要用于制备单克隆抗体制备过程：特点：特异性强,灵敏度高,产量大应用：用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物1．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A．结果是相同的B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同Ｂ练习：2.用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，科学家得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.经过免疫的T淋巴细胞C.不经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞A３.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C4、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合DB体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC5.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有注射抗原，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1)该实验方案的目的是：(2)该方案能达到预期效果吗？为什么？(3)A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4).图中B为________________过程，常用_________________诱导，该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能__________,又能___________。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒分泌专一抗体迅速大量增殖