动物细胞融合与单克隆抗体04579

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体复习:1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，以及动物细胞融合后还有什么用途呢？一动物细胞融合•动物细胞融合的概念:一用灭活的病毒诱导的动物细胞融合过程示原理:动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是相同的(细胞膜的流动性)方法:诱导融合的方法类似(不同之处是用到灭活的病毒作为诱导剂)用途:是制备单克隆抗体。•为什么灭活的病毒能作为诱导剂？•因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。•不灭活的病毒能作为诱导剂吗？•不能，因为不灭活的病毒会感染细胞，而不能诱导细胞融合。动物细胞融合的具体过程是否也和植物原生质体融合的过程一样呢？比较：细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较(两项技术都有细胞融合过程)比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途相同植物体细胞杂交细胞的全能性形成植株去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、显微操作、聚乙二醇等试剂诱导克服远源杂交不亲和，获得杂种植株都有杂种细胞形成动物细胞融合细胞膜的流动性杂种细胞使细胞分散后诱导细胞融合同上，再加灭活的病毒诱导制备单克隆抗体的技术之一【例】•动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是•(D)•A.诱导融合的方法完全相同•B.所用的技术手段完全相同•C.所采用的原理完全相同•D.都能形成杂种细胞二.单克隆抗体复习•抗体（1）概念：•机体受抗原刺激后产生的，并且能与之发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。起源：起源于造血干细胞。一部分造血干细胞在骨髓分化成B淋巴细胞。免疫的过程抗原B淋巴细胞抗体记忆B细胞抗原刺激产生与相应的抗原特异性结合杀死结论：？B淋巴细胞遇到了抗原会产生抗体•B淋巴细胞有什么特点？•B淋巴细胞能产生抗体，•每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。•传统的抗体生产方法及缺陷是什么？•传统的抗体生产方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。这种生产抗体的方法产量和纯度都很低，而且制备的抗体特异性差。•骨髓瘤细胞的特点是：•在体外大量增殖•B淋巴细胞特点是：•抗体生产•在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的，那么，科学家是怎样解决这一问题的呢？•如果把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起时•能利用细胞融合技术来制备单克隆抗体吗？科学家的发现•阿根廷科学家米尔斯坦（CesarMilstein，1926—）和德国科学家柯勒（GeorgesKih1er，1946—）在前人工作的基础上，继续探索和尝试，并且充分发挥想象力，设计了一个极富创造性的实验方案。他们想到，如果用一种能在体外培养条件下大量增殖的细胞，如小鼠骨髓瘤细胞，与某一种B淋巴细胞融合，所得到的融合细胞就能大量增殖，产生足够数量的特定抗体，根据这个设想，他们首先将抗原注射入小鼠体内，然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的B淋巴细胞，与小鼠骨髓瘤细胞在灭活的仙台病毒或聚乙二醇的诱导下融合，再在特定的选择性培养基中筛选出杂交瘤细胞。由于杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传物质，因此，它不仅具有B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力，还有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的本领。他们培养杂交瘤细胞，从中挑选出能够产生所需抗体的细胞群，继续培养，以获得足够数量的细胞，在体外条件下做大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖。这样，从细胞培养液或小鼠的腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体了。单克隆抗体制备过程目的是为了得到产生抗体的B淋巴细胞B淋巴细胞的融合细胞２获得专一的杂交细胞B淋巴细胞和瘤细胞和杂交细胞瘤细胞的融合细胞１细胞融合（得到了）培养基筛选３杂交细胞细胞培养４得到产生抗体过程分４步3.单克隆抗体•制备过程归纳•单克隆抗体制备需要的条件：•一是能产生单一抗体的效应B细胞。•二是能够无限增殖的骨髓瘤细胞。（2）应用•１可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点•２可用于疾病治疗•３可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹“。）•“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物••1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？•提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。•2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？•提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体