DB36T 1031-2018 水稻二化螟抗药性检测技术规程 饲料浸药法

ICS65.020.20B16DB36江西省地方标准DB36/T1031—2018水稻二化螟抗药性检测技术规程饲料浸药法Technologicalrulesformonitoringinsecticideresistanceinstripedstemborer（ChilosuppressalisWalker）usingartificialdietdippingbioassaymethod2018-03-19发布2018-09-20实施江西省质量技术监督局发布DB36/T1031—2018I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12术语和定义........................................................................13试剂与材料........................................................................14主要仪器设备......................................................................15试验步骤..........................................................................26数据统计与分析....................................................................37抗性水平评估......................................................................38检测报告编写……………………………………………………………………………………………….4附录A（资料性附录）部分杀虫剂对水稻二化螟的敏感毒力基线............................5附录B（资料性附录）二化螟人工饲料的组份及其配比....................................6DB36/T1031—2018II前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由江西省农业厅提出并归口。本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所、江西省农业生态与资源保护站、江西省余江县植保植检站、江西省植保植检局。本标准主要起草人：黄水金、孙杨、秦文婧、熊焕华、刘晖、王惠明、徐样庚、王希、史建苗、盛琦、饶喜。DB36/T1031—20181水稻二化螟抗药性检测技术规程饲料浸药法1范围本标准规定了饲料浸药法检测二化螟（Chilosuppressalis(Walker)）抗药性方法的术语和定义、试剂与材料、主要仪器设备、实验步骤、数据统计与分析、抗性水平评估、检测报告表编写。本标准适用于杀虫剂对二化螟室内毒力测定和抗药性评估。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1抗药性Insecticideresistance昆虫忍耐杀死正常种群大部分个体的药量的能力，并在其种群中发展起来的能力。2.2敏感基线Susceptibilitybaseline在某种农药使用之前，昆虫敏感品系的毒力基线LC50。2.3饲料浸药法Artificialdietdippingbioassaymethod二化螟幼虫接触、取食浸渍农药的人工饲料而中毒死亡的毒力测定方法。3试剂与材料3.1生物试材二化螟：4龄初期幼虫。3.2试验试剂与药剂试剂为分析纯，药剂为农药原药。4主要仪器设备电子天平（感量0.0001g），手持搅拌机，料理机,切片器，毛笔，眼科镊，移液器，平底玻璃管（直径3cm，高5cm），1000ml烧杯（直径13cm，高15cm），恒温培养箱或人工气候箱，高温高压湿热灭菌锅，微波炉。DB36/T1031—201825试验步骤5.1卵块采集、管理及人工饲料配制5.1.1卵块采集在成虫盛发期，从田间诱蛾带回室内产卵或从水稻田直接采集二化螟卵块。5.1.2卵块孵化及幼虫管理在玻璃培养皿（直径9cm）中放入滤纸3片～4片，并加入适量灭菌蒸馏水保湿，将卵块放入其中，保湿培养至卵块黑头时，将黑头卵块放入装有饲料的玻璃管中，每个玻璃管中放入1个～2个卵块，塞上棉花塞。待幼虫从卵块中孵出并爬至饲料上后，将卵块残余部分从玻璃管中挑出来，然后将幼虫放置于温度28±1℃，相对湿度60%～70%，光周期为（白天:黑夜）16h:8h（下光源）的光照培养箱中培至4龄初期。5.1.3药剂配制农药原药用有机溶剂（如丙酮、二甲基甲酰胺等）充分溶解，加入10％（每100ml体积终溶液中含有溶质的质量为10mg）用量的Triton-X100（或吐温80）加工成制剂，并用蒸馏水稀释。根据预备试验结果，按照等比例方法设置5个～7个系列质量浓度，每质量浓度药液量不少于200ml。5.1.4人工饲料配制方法人工饲料按配方进行配制（见附录B）。具体配制方法如下：a)将各组分按配比称重，备用；b)将新鲜的茭白切碎，加入水，放入料理机中磨碎并匀浆，匀浆后将其倒入盛有大豆粉、酵母粉、干酪素和蔗糖的灭菌桶中，将上述5种组分充分搅拌均匀后，置于高压蒸汽灭菌锅中，于125℃下灭菌30min，灭菌完毕后，取出备用；c)琼脂中加入纯净水，用微波炉加热并煮至完全溶解后，将其倒入步骤（2）中已灭菌好的饲料中，用手持搅拌机搅拌混匀，并冷却至60℃左右备用；d)将称好的抗坏血酸钠、尼泊金酯、山梨酸、胆固醇、氯化胆碱、威氏盐、复合维生素放入烧杯中，用少量温开水溶解，然后将其倒入步骤（3）中的饲料中，再加入40%的甲醛，搅拌直至完全均匀；e)将搅拌好的饲料倒入无菌的保鲜盒中，完全冷却凝固后存放于4℃冰箱中备用。5.2处理方法用切片器将饲料切成1.2mm薄片，然后将饲料薄片挑入至药液中浸渍10s，将浸渍药液后的饲料薄片放置于呈45度角的纱网平面上晾干30min后挑入至平底玻璃管中（6片/管）。再将4龄初期二化螟幼虫挑入（10头/管）。将其置于温度28±1℃，相对湿度60%～70%，光周期为（白天:黑夜）16h:8h（下光照）的培养箱中。每个浓度4次重复，每个重复处理10头试虫。5.3结果检查根据杀虫剂的杀虫特性分别于接虫后的48h～96h检查。沙蚕毒素类、菊酯类、有机磷类、大环内酯类药剂在药后48h检查；昆虫生长调节剂类和双酰胺类药剂在药后96h检查。死亡标准为：以小毛笔或尖锐镊子轻触虫体，不能正常爬行者视作为死亡个体。DB36/T1031—201836数据统计与分析6.1计算方法根据调查数据，计算各处理的校正死亡率。按公式（1）和（2）计算，计算结果均保留到小数点后两位：P1=NK×100%………………………………………（1）式中：P1——死亡率，单位为百分率（%）；K——表示死亡虫数，单位为头；N——表示处理总虫数，单位为头。P2=100100×−−PPPt%……………………………………（2）式中：P2——校正死亡率，单位为百分率（%）；Pt——处理死亡率，单位为百分率（%）；P0——空白对照死亡率，单位为百分率（%）。若对照死亡率5％，无需校正；对照死亡率在5％～20％之间，应按公式（2）进行校正；对照死亡率20％，试验需重做。6.2统计分析采用SAS、EPA、POLO、BA、DPS等统计分析系统软件的机率值分析法进行统计分析，求出每个药剂的毒力回归方程式、LC50值及其95％置信限、b值及其标准误。7抗性水平评估7.1二化螟敏感毒力基线的制定二化螟抗性监测的敏感毒力基线见附录A。7.2抗性水平的分级标准抗性水平的分级标准见表1。表1二化螟抗性水平的分级标准抗性水平分级抗性倍数敏感RR≤5.0低水平抗性5.0＜RR≤10.0中等水平抗性10.0＜RR≤100.0高水平抗性RR＞100.07.3抗性水平的计算与评估DB36/T1031—201847.3.1根据敏感品系的LC50值和测试种群的LC50值，计算测试种群的抗性倍数。按下式计算，计算结果均保留到小数点后一位：抗性倍数=测试种群的LC50/敏感品系的LC50。7.3.2按照抗性水平的分级标准，对测试种群的抗性水平作出评估。8检测报告编写根据统计结果和抗性水平评估，写出正式抗性检测报告，并列出原始数据。DB36/T1031—20185附录A（资料性附录）部分杀虫剂对水稻二化螟的敏感毒力基线部分杀虫剂对二化螟的敏感毒力基线见表A.1表A.1部分杀虫剂对二化螟敏感品系的毒力基线药剂LD-P线(Y=)LC50（mga.i./L)95%置信限甲氨基阿维菌素苯甲酸盐7.9997+2.2221x0.04470.0366-0.0545阿维菌素6.9889+1.8571x0.08490.0663-0.1088杀虫环5.8204+1.5219x0.2890.2203-0.3792杀虫单4.863+1.614x1.21590.9687-1.5262氯虫苯甲酰胺5.0842+1.9065x0.90330.7250-1.1255氟苯虫酰胺3.5468+3.2260x2.82152.4410-3.2613甲氧虫酰肼3.9067+2.0171x3.48372.7819-4.3625三唑磷3.2009+3.0551x3.88053.2819-4.5883水胺硫磷2.3008+3.7383x5.27274.742-5.8629丙溴磷2.9981+2.0839x9.13377.4329-11.2237稻丰散2.1207+2.4647x14.731112.4526-17.4265二嗪磷-0.6914+4.8369x15.0213.6779-16.4939DB36/T1031—20186AB附录B（资料性附录）二化螟人工饲料的组份及其配比二化螟人工饲料各组份含量见表B.1，复合维生素B各组份含量见表B.2。表B.1二化螟人工饲料各组份含量(1000g饲料)饲料组份重量（g）饲料组份重量（g）大豆粉45抗坏血酸4.35酵母粉30胆固醇0.30干酪素15氯化胆碱0.44蔗糖15威氏盐0.15鲜茭白145复合维生素B0.03水375山梨酸1.45琼脂粉16泥泊金甲酯1.45水30040%甲醛1.00蒸馏水50表B.2复合维生素B各组份含量成份每500mg混合物中含量（mg）成份每500mg混合物中含量（mg）烟酰胺152叶酸38盐酸硫胺素38泛酸钙153核黄素76生物素4盐酸吡哆醇38氰钴胺素1_________________________________