DB41T 1902-2019 饲料添加剂 凝结芽孢杆菌

ICS65.120B46DB41河南省地方标准DB41/T1902—2019饲料添加剂凝结芽孢杆菌2019-09-30发布2019-12-30实施河南省市场监督管理局发布DB41/T1902—2019I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13要求..............................................................................14试验方法..........................................................................25检验规则..........................................................................36标签、包装、运输与贮存............................................................47保质期............................................................................4附录A（规范性附录）凝结芽孢杆菌的测定..............................................5DB41/T1902—2019II前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省农业农村厅提出并归口。本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所、河南省乘风动物保健技术研究所、洛阳希望生物科技有限公司、河南智盛优品生物科技有限公司。本标准主要起草人：郭芙蓉、杨灵杰、谢二伟、段伟凯、田艳飞、吴贺伟、王伟伟、杨顺强。DB41/T1902—20191饲料添加剂凝结芽孢杆菌1范围本标准规定了饲料添加剂凝结芽孢杆菌（Bacilluscoagulans）的技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输与贮存。本标准适用于以凝结芽孢杆菌为菌种，经液态发酵、过滤、浓缩、干燥制成的饲料添加剂凝结芽孢杆菌。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.3食品微生物学检验大肠菌群计数GB4789.5食品微生物学检验志贺氏菌检验GB4789.10食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T6435饲料中水分的测定GB10648饲料标签GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T13081饲料中汞的测定GB/T13082饲料中镉的测定方法GB/T13091饲料中沙门氏菌的检验方法GB/T13092饲料中霉菌总数的测定GB/T14699.1饲料采样GB/T17480饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法GB/T18823饲料检测结果判定的允许误差NY/T1444微生物饲料添加剂技术通则GB/T20195动物饲料试样的制备《定量包装商品计量监督管理办法》中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号《饲料原料目录》中华人民共和国农业部公告第1773号《饲料添加剂品种目录（2013）》中华人民共和国农业部公告第2045号3技术要求3.1原料应符合《饲料添加剂品种目录（2013）》和《饲料原料目录》的规定。DB41/T1902—201923.2感官粉状或颗粒状，色泽一致，无霉变和结块，有特殊的发酵气味。3.3成品粒度全部通过2.00mm编织筛，1.50mm分析筛筛上物不大于10%。3.4水分水分应不大于12.0%。3.5理化指标理化指标应符合表1的规定。表1理化指标项目指标凝结芽孢杆菌活菌数/CFU/g≥1.00×109砷（以总砷计）的允许量/mg/kg≤2铅（以Pb计）的允许量/mg/kg≤20汞（以Hg计）的允许量/mg/kg≤0.1镉（以Cd计）的允许量/mg/kg≤1大肠菌群的允许量/个/kg≤1×105霉菌总数的允许量/个/kg＜2×107黄曲霉毒素B1/µg/kg≤30沙门氏菌的允许量/（25g中）不得检出志贺氏菌不得检出金黄色葡萄球菌不得检出4试验方法4.1感官取适量样品，在非阳光直射条件下，观其色泽、形态，嗅其气味。4.2成品粒度按GB/T5917.1的规定执行。4.3水分按GB/T6435的规定执行。4.4凝结芽孢杆菌活菌数按附录A的规定执行。4.5砷DB41/T1902—20193按GB/T13079的规定执行。4.6铅按GB/T13080的规定执行。4.7汞按GB/T13081的规定执行。4.8镉按GB/T13082的规定执行。4.9大肠菌群按GB4789.3的规定执行。4.10霉菌总数按GB/T13092的规定执行。4.11黄曲霉毒素B1按GB/T17480的规定执行。4.12沙门氏菌按GB/T13091的规定执行。4.13志贺氏菌按GB4789.5的规定执行。4.14金黄色葡萄球菌按GB4789.10的规定执行。5检验规则5.1检验批次同一配方、同一发酵周期生产的产品为一个检验批次。5.2采样按GB/T14699.1的规定执行。5.3试样制备按GB/T20195的规定执行。5.4出厂检验5.4.1检验项目DB41/T1902—20194感官、成品粒度、水分、凝结芽孢杆菌活菌数。5.4.2判定规则以本标准的有关试验方法要求为依据，对抽取样品按出厂检验项目进行检验，检验结果中如有一项指标不符合标准要求时，应重新加倍抽样进行复检，复检结果如仍有一项指标不符合本标准要求，则该批产品不合格。各项成分指标判定合格或验收的界限按GB/T18823规定执行，微生物指标凝结芽孢杆菌不低于5%。5.5型式检验5.5.1检验条件有下列情况之一，应进行型式检验：a)改变生产工艺；b)正常生产每年至少进行一次；c)停产半年后再恢复生产时。5.5.2检验项目第3章规定的全部内容5.5.3判定规则以本标准的有关试验方法和要求为依据。检验结果中如有一项指标不符合标准要求时，应重新加倍抽样进行复检，复检结果如仍有一项指标不符合本标准要求，则该周期产品不合格。各项成分指标判定合格或验收的界限依据GB/T18823执行。微生物指标不得复检。如型式检验不合格，应停止生产至查明原因。6标签、包装、运输与贮存6.1标签按GB10648的规定执行。6.2包装包装材料应符合国家有关安全卫生要求。净含量的允许短缺量应符合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。6.3运输与贮存运输途中应有遮盖物，并防止雨淋。不应与有毒、有害、有辐射等物品混装、混运。应贮存在通风、干燥、阴凉、无污染的库房内，避免阳光直晒。7保质期在6.2、6.3规定的包装贮存条件下，自生产之日起，原包装产品的保质期12个月。DB41/T1902—20195A附录A（规范性附录）凝结芽孢杆菌的测定A.1原理每个活菌在适宜的培养基和良好的生长条件下，经过合适的培养时间可繁殖成一个肉眼可见的菌落，通过对菌落数量的统计，便可计算出相应的单位或活菌数。A.2菌种鉴别A.2.1菌落特征凝结芽孢杆菌在MRS培养基（A.3.1）上菌落生长形态特征见表2。表2凝结芽孢杆菌在MRS培养基上的菌落特征菌种类型菌落特征芽孢杆菌单菌落成圆形，不透明，凸起边缘整齐，少数呈短链。A.2.2培养特征单菌落成圆形，不透明，凸起边缘整齐，少数呈短链。革兰氏染色成阳性，细胞呈杆状且可形成端生椭圆形芽孢，芽孢囊不明显膨大。A.2.3生理生化特征对凝结芽孢杆菌进行接触酶检测，厌氧生长检测，50℃生长检测和7%氯化钠生长检测，再进行验证检测，包括糖、醇发酵、运动性检测、淀粉水解实验和酪素水解生长温度检测。凝结芽孢杆菌的生理生化特征见表3。表3凝结芽孢杆菌生理生化特征项目凝结芽孢杆菌革兰氏染色＋7%氯化钠生长＋运动性＋接触酶＋50℃生长＋木糖产酸＋淀粉水解＋厌氧生长＋葡萄糖产酸＋酪素水解＋注：＋：阳性反应；－：阴性反应DB41/T1902—20196A.3凝结芽孢杆菌活菌数培养与计数A.3.1MRS培养基的配制分别称取蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母浸粉5.0g、葡萄糖20.0g、醋酸钠5.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、柠檬酸三铵2.0g、TW-801.0mL、琼脂15g加入1000ml蒸馏水中，加热至溶解，pH6.6±0.2，分装，121℃高压灭菌15min备用。A.3.2样品制备与稀释以无菌操作称取被检样品25g，加入装有225mL无菌生理盐水的三角瓶中（瓶内先放置约二十粒玻璃珠），充分振动30min。制成1:10（即10-1）的均匀稀释液。用1mL吸管吸取10-1稀释液1mL，慢慢注入含有9mL无菌生理盐水的小三角瓶或试管，并振动三角瓶或试管，制成10-2的均匀稀释液。上述操作继续稀释，每次10倍，分别制成10-3，10-4……10-n的均匀稀释液。A.3.3培养倾注法：先对被检样品所含菌体数进行估计，选择三个稀释度，每个稀释度分别取1mL，注入三个平皿中。每个平皿1mL，每个稀释度做三个平皿。及时将保温至45℃～50℃的培养基倒入平皿（每个平皿约15mL），并轻轻摇动平皿使培养基和菌液混合均匀，待琼脂凝固后，将平皿倒置于37℃培养箱24h，即可计算平皿内菌落总数。涂布法：先对被检样品所含菌体数进行估计，选择三个稀释度，预先准备好可用的MRS培养基平板9块，吸取三个梯度稀释液各100μL至平板中涂布均匀，每个梯度3块平板，倒置平板于37℃培养箱培养24~36h，即可计算平皿内的菌落总数。A.3.4菌落计数以平板上出现30个～300个菌落数的稀释度平板为计数标准。当只有一个稀释度，其平均菌落数在30～300时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。若有连个稀释度，其平均菌落数在30～300时，应按两者菌落总数比值来定。若其比例小于2,应计数两者的平均数，若大于2则计数其中稀释度较小的菌落总数。若三个稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。若三个稀释度的平均菌落数均小于300，则应按稀释度最低的菌落平均数乘以稀释倍数。若三个稀释度的平均菌落数均不在30～300，则应以最接近的平均菌落数乘稀释倍数。A.3.5计算公式统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数。目标菌落数按照下列公式计算：样品的活菌数（CFU/g）＝菌落平均数×稀释倍数。_________________________________