DB61T 1158.3-2018 桑黄标准综合体 第3部分：菌种生产技术规程

ICS65.020.01B39DB61陕西省地方标准DB61/T1158.3—2018桑黄标准综合体第3部分：菌种生产技术规程IntegratedStandardsofPhellinusspp.—Part3：TechnicalRulesforInoculumPreparation2018-05-01发布2018-06-01实施陕西省质量技术监督局发布DB61/T1158.3—2018I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13栽培场地..........................................................................14栽培环境..........................................................................15栽培设施..........................................................................2附录A（规范性附录）食用菌生产场所处理方法..........................................3DB61/T1158.3—2018II前言DB61/T1158—2018《桑黄标准综合体》分为六个部分：——第1部分：生产环境；——第2部分：菌种；——第3部分：菌种生产技术规程；——第4部分：液体菌种生产技术规程；——第5部分：桑黄栽培技术规程；——第6部分：子实体干品质量要求。本部分为DB61/T1158—2018的第3部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由陕西省农业厅提出并归口。本部分起草单位：陕西省微生物研究所、杨凌康宇生物科技有限公司、陕西省园艺蚕桑工作站。本部分主要起草人：雷萍、吴亚召、张文隽、渠敬峰、王周平、霍国琴、杜芳、杜艳、雷丽、王勇。本部分由陕西省微生物研究所负责解释。本部分首次发布。联系信息如下：单位：陕西省微生物研究所地址：西安市雁塔区西影路76号邮编：710043电话：[phone]DB61/T1158.3—20181桑黄标准综合体第3部分：菌种生产技术规程1范围DB61/T1158的本部分规定了桑黄菌种生产的生产技术、质量检验、入库留样和菌种档案的要求。本部分适用于桑黄各级菌种生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4806.7食品接触用塑料材料及制品NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1284食用菌菌种中杂菌及害虫的检验NY/T1731食用菌菌种良好作业规范NY/T1742食用菌菌种通用技术要求DB61/T1158.2桑黄标准综合体第2部分：菌种《食用菌菌种管理办法》中华人民共和国农业部第62号令（2006年3月27日）3生产技术3.1一般要求3.1.1应按《食用菌菌种管理办法》的规定配备菌种生产技术人员和检验人员。3.1.2应按NY/T528要求制定工艺流程，并制定岗位操作规程，明确主要生产环节工序操作要求及岗位职责。3.2生产区的设置与布局3.2.1生产区的设置生产区应设置摊晒场、原材料库、配料分装室（场）、灭菌室、冷却室、接种室、培养室和贮存室、菌种检验室，并应符合NY/T528规定要求。3.2.2生产区的布局生产区按照菌种制种工艺流程布局，各操作环节按顺序形成一条流水线，灭菌前的操作区域与灭菌后的操作区域相隔离，出黄场与菌种生产、培养车间隔离。储料室（库）、晒料场、废物堆积场等带有杂菌的区域应处于场地的下风口。3.3设施、设备3.3.1生产区的设施配套，冷却室、接种室、培养室和贮存室均应具备调温设施。DB61/T1158.3—201823.3.2磅秤、天平、蒸煮设备、母种培养基分装设备、拌料机、装袋机、高压灭菌和常压灭菌设备、接种工具、恒温培养箱、培养架、烘箱、除湿机、电冰箱、质量检测仪器设备及其它工器具。3.4清洁消毒3.4.1保持厂区、车间、走道等清洁干净，每周使用消毒剂拖擦地面一次；每月对冰箱、空调、空气过滤网清洁一次。及时清洗使用完毕的机械设备。3.4.2培养室使用前2d及每批次菌种培养结束后，均需对培养室进行消毒。可使用66％二氧异氰尿酸钠烟剂3g/m3～4g/m3密闭熏蒸24h，然后打开门窗通风换气。3.4.3冷却室、接种室、缓冲室使用前后，均进行消毒。接种箱或无菌操作台每次使用结束，用消毒液擦拭干净。3.4.4接种人员进入接种室前，更换工作服、帽、鞋，并洗手、消毒。3.5菌种来源3.5.1应使用种性清楚或者是经过农作物品种审定委员会登记的桑黄菌种。3.5.2所有生产菌种应每年进行出黄试验，性状稳定的方可投入生产使用。出黄试验最小规模45袋，分三组重复，每组15袋。母种每年在种源扩大生产前应进行纯度、活力、菌丝长势的一致性、菌丝生长速度、菌落外观及出黄试验。出黄试验方法及种源质量要求应符合NY/T1742中5.4的规定。3.6移植扩大母种仅用于移植扩大原种，一支母种移植扩大原种不应超过6瓶（袋）；1瓶（袋）原种移植扩大栽培种不应超过50瓶（袋）。3.7母种生产3.7.1生产工艺流程培养基配制→分装→灭菌→冷却摆斜面→无菌检验→接种→培养→检验→成品。3.7.2容器使用18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃试管。试管塞采用棉塞（梳棉或化纤棉）或硅胶塞。3.7.3培养基按照DB61/T1158.2附录A规定配制。3.7.4分装将配制好的培养基立即分装，装量为试管长度的1/4～1/5。试管口应保持干净，随后塞入棉塞或硅胶塞，并用牛皮纸包扎。3.7.5灭菌将分装和包扎好的试管直立放在高压灭菌锅内加热灭菌，打开排气阀，放气15min，关闭排气阀。当压力升到0.14MPa（温度为121℃）时，恒压30min。3.7.6斜面培养基摆放DB61/T1158.3—20183灭菌结束后，自然降压至指针回到零点，打开放气阀，自然降温20min～30min，并利用余热烘干棉塞。从灭菌锅内取出试管倾斜摆放在操作台面上，斜面长度为试管长度的2/3。3.7.7灭菌效果检查按2%随机抽取母种培养基置于25℃±2℃恒温培养48h，检查有无细菌或霉菌感染。3.7.8接种3.7.8.1接种室（箱）或净化工作台的消毒按照NY/T528的规定，进行接种箱（室）或无菌操作台及其内部的接种用具消毒。3.7.8.2接种操作检查、核对菌种。严格按照无菌操作接种。接完种后及时贴好标签。3.7.8.3培养接种后将试管置于27℃±2℃培养箱或培养室中培养9d～15d，当菌丝长满试管斜面，即可用于生产原种。3.8原种生产3.8.1容器使用13cm×23cm或15cm×28cm规格、耐126℃高温的玻璃瓶或聚乙（丙）烯塑料袋。使用满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。3.8.2生产工艺流程按培养基配方备料→配制培养基→预湿和拌料→装瓶（袋）→高压灭菌→冷却至室温→接种→培养、检查→成品。3.8.3培养基按照DB61/T1158.2附录B规定配制。3.8.4培养基配制棉籽壳、木屑使用前进行预湿处理。按照配方量取各种原材料，严格按料水比加水进行人工或机械搅拌，混合均匀。3.8.5装瓶（袋）培养料分装在玻璃瓶或聚乙（丙）烯塑料袋内，松紧适度。将袋口和袋外壁擦干净后塞棉塞，牛皮纸包扎袋口。也可以用无棉塑料盖封口。3.8.6灭菌将分装好的原种培养料移入高压锅内，升压至0.15MPa，温度121℃～125℃灭菌2h。3.8.7冷却DB61/T1158.3—20184灭菌结束后，自然降压至指针回到零点，打开放气阀，自然降温20min～30min，取出菌种瓶（袋），移入冷却室，袋内温度冷却至28℃以下准备接种。3.8.8接种3.8.8.1接种室（箱）或净化工作台的消毒按照NY/T528的规定，进行接种箱（室）或无菌操作台及其内部的接种用具消毒。3.8.8.2接种操作接种前一天将母种检查准备好，接种时再核对确保无误。严格按照无菌操作接种。接种结束及时贴好标签。每支母种接原种4瓶（袋）～6瓶（袋）。3.8.8.3培养接种后将原种瓶（袋）置于27℃±2℃培养室内培养30d～35d，当菌丝长满瓶（袋）时结束培养，即可用于生产栽培种。3.9栽培种生产3.9.1容器使用15cm×28cm×0.005cm或17cm×35cm×0.005cm规格、耐126℃高温，并符合GB4806.7规定的聚乙（丙）烯塑料袋。用无棉塑料盖封口。3.9.2培养基按照DB61/T1158.2附录B规定配制。3.9.3培养基配制按照本部分3.8.4规定执行。3.9.4装袋按照本部分3.8.5规定执行。3.9.5灭菌高压灭菌：将分装好的栽培种培养料移入高压锅内，温度升至121℃～126℃灭菌3.5h。常压灭菌：100℃保持20h～30h。3.9.6冷却按照本部分4.8.7规定执行。3.9.7接种3.9.7.1接种室（箱）或净化工作台的消毒按照NY/T528的规定，进行接种箱（室）或无菌操作台及其内部的接种用具消毒。3.9.7.2接种操作DB61/T1158.3—20185提前一天将所需原种检查准备好，接种时再对原种检查核对确保无误。接种人员用75％酒精棉球对手擦拭消毒。用消毒后的接种匙挖取原种迅速转接于栽培种菌袋内，封好袋口，每袋原种接种30袋～50袋栽培种。接种结束及时贴好标签。3.9.7.3培养接种后将栽培种置于27℃±2℃培养室内培养35d～45d，当菌丝长满袋时结束培养，即可用于生产栽培袋。4质量检验4.1原料检验4.1.1原料入库前应经专人检验，确认合格后方可入库。各生产工序阶段产品都要经检验合格后才能转入下一个生产流程。4.1.2原辅材料的来源、运输、储存与使用等按照NY/T1731要求执行。4.2菌种检查4.2.1母种检查接种36h后应做首次检查，检出未萌发或受污染者。母种菌落长至直径约2cm左右时，进行第二次检查，长满前再检查一次，检出污染或生长不良的菌种。按照NY/T1284的规定进行检查。4.2.2原种及栽培种检查原种及栽培种在菌丝封口前，隔日例行检查。原种菌丝封口后应每周检查一次，直至长满瓶（袋）。栽培种封口后，满袋前每周检查两次，满袋后每周检查一次。按照NY/T1284的规定进行检查。4.2.3使用种检查所有菌种使用前应逐个检查。发现标签与菌种不符或可疑者以及排放错误，应及时报告，逐批追溯检查，提出分析意见，并记录。检查应做详细记录。5菌种档案5.1应建立记录菌种来源、主要性状、保藏方法、保藏条件、转管次数、生产试验结果、出黄试验情况的保藏档案，并长期保存。5.2建立母种、原种、栽培种三级菌种的生产档案，保存期限2年。应记录菌种来源、生产时间、基质、培养条件、数量、质量、技术负责人、检验记录等内容。_________________________________