GB 5009.97-2016 食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.97—2016食品安全国家标准食品中环己基氨基磺酸钠的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.97—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T5009.97—2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》。本标准与GB/T5009.97—2003相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中环己基氨基磺酸钠的测定”;———气相色谱法改为使用毛细管柱进行分析;———优化了样品处理、衍生化和测定的条件;———增加液相色谱法;———增加液相色谱-质谱/质谱法;———删除GB/T5009.97—2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》中的第二法比色法和第三法薄层色谱法。GB5009.97—20161食品安全国家标准食品中环己基氨基磺酸钠的测定1范围本标准规定了食品中环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)的三种测定方法———气相色谱法、液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法。本标准气相色谱法适用于饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳熟制坚果与籽类、水果罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮品、果冻、复合调味料、腌渍的蔬菜、腐乳食品中环己基氨基磺酸钠的测定。本标准气相色谱法不适用于白酒中该化合物的测定。本标准液相色谱法适用于饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳熟制坚果与籽类、配制酒、水果罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮品、果冻、复合调味料、腌渍的蔬菜、腐乳食品中环己基氨基磺酸钠的测定。本标准液相色谱-质谱/质谱法适用于白酒、葡萄酒、黄酒、料酒中环己基氨基磺酸钠的测定。第一法气相色谱法2原理食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取,在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应,生成环己醇亚硝酸酯,利用气相色谱氢火焰离子化检测器进行分离及分析,保留时间定性,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1正庚烷[CH3(CH2)5CH3]。3.1.2氯化钠(NaCl)。3.1.3石油醚:沸程为30℃~60℃。3.1.4氢氧化钠(NaOH)。3.1.5硫酸(H2SO4)。3.1.6亚铁氰化钾{K4[Fe(CN)6]·3H2O}。3.1.7硫酸锌(ZnSO4·7H2O)。3.1.8亚硝酸钠(NaNO2)。3.2试剂配制3.2.1氢氧化钠溶液(40g/L):称取20g氢氧化钠,溶于水并稀释至500mL,混匀。GB5009.97—201623.2.2硫酸溶液(200g/L):量取54mL硫酸小心缓缓加入400mL水中,后加水至500mL,混匀。3.2.3亚铁氰化钾溶液(150g/L):称取折合15g亚铁氰化钾(3.1.6),溶于水稀释至100mL,混匀。3.2.4硫酸锌溶液(300g/L):称取折合30g硫酸锌的试剂(3.1.7),溶于水并稀释至100mL,混匀。3.2.5亚硝酸钠溶液(50g/L):称取25g亚硝酸钠,溶于水并稀释至500mL,混匀。3.3标准品环己基氨基磺酸钠标准品(C6H12NSO3Na):纯度≥99%。3.4标准溶液的配制3.4.1环己基氨基磺酸标准储备液(5.00mg/mL):精确称取0.5612g环己基氨基磺酸钠标准品,用水溶解并定容至100mL,混匀,此溶液1.00mL相当于环己基氨基磺酸5.00mg(环己基氨基磺酸钠与环己基氨基磺酸的换算系数为0.8909)。置于1℃~4℃冰箱保存,可保存12个月。3.4.2环己基氨基磺酸标准使用液(1.00mg/mL):准确移取20.0mL环己基氨基磺酸标准储备液用水稀释并定容至100mL,混匀。置于1℃~4℃冰箱保存,可保存6个月。4仪器与设备4.1气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(FID)。4.2涡旋混合器。4.3离心机:转速≥4000r/min。4.4超声波振荡器。4.5样品粉碎机。4.610μL微量注射器。4.7恒温水浴锅。4.8天平:感量1mg、0.1mg。5分析步骤5.1试样溶液的制备5.1.1液体试样处理5.1.1.1普通液体试样摇匀后称取25.0g试样(如需要可过滤),用水定容至50mL备用。5.1.1.2含二氧化碳的试样:称取25.0g试样于烧杯中,60℃水浴加热30min以除二氧化碳,放冷,用水定容至50mL备用。5.1.1.3含酒精的试样:称取25.0g试样于烧杯中,用氢氧化钠溶液(3.2.1)调至弱碱性pH7~8,60℃水浴加热30min以除酒精,放冷,用水定容至50mL备用。5.1.2固体、半固体试样处理5.1.2.1低脂、低蛋白样品(果酱、果冻、水果罐头、果丹类、蜜饯凉果、浓缩果汁、面包、糕点、饼干、复合调味料、带壳熟制坚果和籽类、腌渍的蔬菜等):称取打碎、混匀的样品3.00g~5.00g于50mL离心管中,加30mL水,振摇,超声提取20min,混匀,离心(3000r/min)10min,过滤,用水分次洗涤残渣,收集滤液并定容至50mL,混匀备用。5.1.2.2高蛋白样品(酸乳、雪糕、冰淇淋等奶制品及豆制品、腐乳等):冰棒、雪糕、冰淇淋等分别放置于GB5009.97—20163250mL烧杯中,待融化后搅匀称取;称取样品3.00g~5.00g于50mL离心管中,加30mL水,超声提取20min,加2mL亚铁氰化钾溶液,混匀,再加入2mL硫酸锌溶液,混匀,离心(3000r/min)10min,过滤,用水分次洗涤残渣,收集滤液并定容至50mL,混匀备用。5.1.2.3高脂样品(奶油制品、海鱼罐头、熟肉制品等):称取打碎、混匀的样品3.00g~5.00g于50mL离心管中,加入25mL石油醚,振摇,超声提取3min,再混匀,离心(1000r/min以上)10min,弃石油醚,再用25mL石油醚提取一次,弃石油醚,60℃水浴挥发去除石油醚,残渣加30mL水,混匀,超声提取20min,加2mL亚铁氰化钾溶液,混匀,再加入2mL硫酸锌溶液,混匀,离心(3000r/min)10min,过滤,用水洗涤残渣,收集滤液并定容至50mL,混匀备用。5.1.3衍生化准确移取液体试样溶液(5.1.1)、固体、半固体试样溶液(5.1.2)10.0mL于50mL带盖离心管中。离心管置试管架上冰浴中5min后,准确加入5.00mL正庚烷,加入2.5mL亚硝酸钠溶液,2.5mL硫酸溶液,盖紧离心管盖,摇匀,在冰浴中放置30min,其间振摇3次~5次;加入2.5g氯化钠,盖上盖后置旋涡混合器上振动1min(或振摇60次~80次),低温离心(3000r/min)10min分层或低温静置20min至澄清分层后取上清液放置1℃~4℃冰箱冷藏保存以备进样用。5.2标准溶液系列的制备及衍生化准确移取1.00mg/mL环己基氨基磺酸标准溶液0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、10.0mL、25.0mL于50mL容量瓶中,加水定容。配成标准溶液系列浓度为:0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.50mg/mL。临用时配制以备衍生化用。准确移取标准系列溶液10.0mL同(5.1.3)衍生化。5.3测定5.3.1色谱条件5.3.1.1色谱柱:弱极性石英毛细管柱(内涂5%苯基甲基聚硅氧烷,30m×0.53mm×1.0μm)或等效柱。5.3.1.2柱温升温程序:初温55℃保持3min,10℃/min升温至90℃保持0.5min,20℃/min升温至200℃保持3min。5.3.1.3进样口:温度230℃;进样量1μL,不分流/分流进样,分流比1∶5(分流比及方式可根据色谱仪器条件调整)。5.3.1.4检测器:氢火焰离子化检测器(FID),温度260℃。5.3.1.5载气:高纯氮气,流量12.0mL/min,尾吹20mL/min。5.3.1.6氢气:30mL/min;空气330mL/min(载气、氢气、空气流量大小可根据仪器条件进行调整)。5.3.2色谱分析分别吸取1μL经衍生化处理的标准系列各浓度溶液上清液(5.2),注入气相色谱仪中,可测得不同浓度被测物的响应值峰面积,以浓度为横坐标,以环己醇亚硝酸酯和环己醇两峰面积之和为纵坐标,绘制标准曲线。在完全相同的条件下进样1μL经衍生化处理的试样待测液上清液(5.1.3),保留时间定性,测得峰面积,根据标准曲线得到样液中的组分浓度;试样上清液响应值若超出线性范围,应用正庚烷稀释后再进样分析。平行测定次数不少于两次。GB5009.97—201646分析结果的表述试样中环己基氨基磺酸含量按式(1)计算:X1=cm×V…………………………(1)式中:X1———试样中环己基氨基磺酸的含量,单位为克每千克(g/kg);c———由标准曲线计算出定容样液中环己基氨基磺酸的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);m———试样质量,单位为克(g);V———试样的最后定容体积,单位为毫升(mL)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他取样量5g时,本方法检出限为0.010g/kg,定量限0.030g/kg。第二法高效液相色谱法9原理食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取后,在强酸性溶液中与次氯酸钠反应,生成N,N-二氯环己胺,用正庚烷萃取后,利用高效液相色谱法检测,保留时间定性,外标法定量。10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。10.1试剂10.1.1正庚烷[CH3(CH2)5CH3]:色谱纯。10.1.2乙腈(CH3CN):色谱纯。10.1.3硫酸(H2SO4)。10.1.4次氯酸钠(NaClO)。10.1.5碳酸氢钠(NaHCO3)。10.1.6硫酸锌(ZnSO4·7H2O)。10.1.7亚铁氰化钾{K4[Fe(CN)6]·3H2O}。10.1.8石油醚:沸程为30℃~60℃。10.2试剂配制10.2.1硫酸溶液(1+1):50mL硫酸小心缓缓加入50mL水中,混匀。GB5009.97—2016510.2.2次氯酸钠溶液:用次氯酸钠(10.1.4)稀释,保存于棕色瓶中,保持有效氯含量50g/L以上,混匀,市售产品需及时标定,临用时配制。10.2.3碳酸氢钠溶液(50g/L):称取5g碳酸氢钠,用水溶解并稀释至100mL,混匀。10.2.4硫酸锌溶液(300g/L):称取折合30g硫酸锌(10.1.6),溶于水并稀释至100mL,混匀。10.2.5亚铁氰化钾溶液(150g/L):称取折合15g亚铁氰化钾(10.1.7),溶于水并稀释至100mL,混匀。10.3标准品环己基氨基磺酸钠标准品(C6H12NSO3Na):纯度≥99%。10.4标准溶液配制10.4.1环己基氨基磺酸标准储备液(5.00mg/mL):按第一法3.4.1配制。10.4.2环己基氨基磺酸标准中间液(1.00mg/mL):按第一法3.4.2配制。10.4.3环己基氨基磺酸标准曲线系列工作液:分别吸取标准中间液(10.4.2)0.50mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL至50mL容量瓶中,用水定容。该标准系列浓度分别为10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL。临用现配。11仪器和设备11.1液相色谱仪,配有紫外检测器或二极管阵列检测器。11.2超声波振荡器。11.3离心机:转速≥4000r/min。11.4样品粉碎机。11.5恒温水浴锅。11.6天平:感量1mg、0.1mg。12分析步骤12.1试样溶液的制备12.1.1固体类和半固体类试样处理称取均质后试样5.00g于50mL离心管中,加入30mL水,混匀,超声提取20min,离心(3000r/min)20min,将上清液转出,用水洗涤残渣并定容至50mL备用。含高蛋白类样品可在超声提取时加入2.0mL硫酸锌溶液(10.2.4)和2.0mL亚铁氰化钾溶液(10