GB 5009.190-2014 食品安全国家标准 食品中指示性多氯联苯含量的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.190—2014食品安全国家标准食品中指示性多氯联苯含量的测定2014-12-01发布2015-05-01实施GB5009.190—2014I前言本标准代替GB/T5009.190—2006《食品中指示性多氯联苯含量的测定》和GB/T22331—2008《水产品中多氯联苯残留量的测定气相色谱法》。本标准与GB/T5009.190—2006相比，主要变化如下：——修改了标准格式。GB5009.190—20141食品安全国家标准食品中指示性多氯联苯含量的测定1范围本标准第一法规定了食品中多氯联苯（polychlorinatedbiphenyls，PCBs）包括全球环境监测系统/食品规划中规定的指示性PCBs（PCB28、PCB52、PCB101、PCB118、PCB138、PCB153和PCB180）及PCB18、PCB33、PCB44、PCB70、PCB105、PCB128、PCB170、PCB187、PCB194、PCB195、PCB199和PCB206含量的测定方法，第二法规定了PCB28、PCB52、PCB101、PCB118、PCB138、PCB153和PCB180的测定方法。本标准适用于鱼类、贝类、蛋类、肉类、奶类及其制品等动物性食品和油脂类试样中指示性PCBs的测定。第一法稳定性同位素稀释的气相色谱-质谱法2原理应用稳定性同位素稀释技术，在试样中加入13C12标记的PCBs作为定量标准，经过索氏提取后的试样溶液经柱色谱层析净化、分离，浓缩后加入回收内标，使用气相色谱-低分辨质谱联用仪，以四极杆质谱选择离子监测（SIM）或离子阱串联质谱多反应监测（MRM）模式进行分析，内标法定量。3试剂和材料3.1试剂3.1.1正己烷（C6H14）：农残级。3.1.2二氯甲烷（CH2Cl2）：农残级。3.1.3丙酮（C3H6O）：农残级。3.1.4甲醇（CH3OH）：农残级。3.1.5异辛烷（C8H18）：农残级。3.1.6无水硫酸钠（Na2SO4）：优级纯。将市售无水硫酸钠装入玻璃色谱柱，依次用正己烷和二氯甲烷淋洗两次，每次使用的溶剂体积约为无水硫酸钠体积的两倍。淋洗后，将无水硫酸钠转移至烧瓶中，在50℃下烘烤至干，然后在225°C烘烤8h～12h，冷却后干燥器中保存。3.1.7硫酸（H2SO4）：含量95%~98%，优级纯。3.1.8氢氧化钠（NaOH）：优级纯。3.1.9硝酸银（AgNO3）：优级纯。GB5009.190—201423.1.10色谱用硅胶（75μm~250μm）：将市售硅胶装入玻璃色谱柱中，依次用正己烷和二氯甲烷淋洗两次，每次使用的溶剂体积约为硅胶体积的两倍。淋洗后，将硅胶转移到烧瓶中，以铝箔盖住瓶口置于烘箱中50℃烘烤至干，然后升温至180℃烘烤8h～12h，冷却后装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.1144%酸化硅胶：称取活化好的硅胶100g，逐滴加入78.6g硫酸，振摇至无块状物后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.1233%碱性硅胶：称取活化好的硅胶100g，逐滴加入49.2g1mol/L的氢氧化钠溶液，振摇至无块状物后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.1310%硝酸银硅胶：将5.6g硝酸银溶解在21.5mL去离子水中，逐滴加入50g活化硅胶中，振摇至无块状物后，装入棕色磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.14碱性氧化铝：色谱层析用碱性氧化铝，660℃烘烤6h后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.2标准溶液3.2.1时间窗口确定标准溶液：由各氯取代数的PCBs在DB-5ms色谱柱上第一个出峰和最后一个出峰的同族化合物组成，见附录A中表A.1。3.2.2定量内标标准溶液：见附录A中表A.2。3.2.3回收率内标标准溶液：见附录A中表A.3。3.2.4校正标准溶液：见附录A中表A.4。3.2.5精密度和准确度实验标准溶液：见附录A中表A.5。4仪器和设备4.1气相色谱-四极杆质谱联用仪(GC-MS)或气相色谱-离子阱串联质谱联用仪(GC-MS/MS)。4.2色谱柱：DB-5ms柱，30m×0.25mm×0.25μm，或等效色谱柱。4.3组织匀浆器。4.4绞肉机。4.5旋转蒸发仪。4.6氮气浓缩器。4.7超声波清洗器。4.8振荡器。4.9分析天平：感量为0.1g。4.10玻璃仪器的准备：所有需重复使用的玻璃器皿应在使用后尽快认真清洗，清洗过程如下：a）用该器皿最后接触的溶剂洗涤；b）依次用正己烷和丙酮洗涤；c）用含碱性洗涤剂的热水清洗；d）依次用热水和去离子水冲洗；e）依次用丙酮、正己烷和二氯甲烷洗涤。采用超声波清洗设备，加入碱性洗涤剂的热水有很好的清洗效果。如果使用刷子清洗，需特别注意不要划损玻璃器皿的内表面。5分析步骤5.1试样制备5.1.1预处理GB5009.190—201435.1.1.1用避光材料如铝箔、棕色玻璃瓶等包装现场采集的试样，并放入小型冷冻箱中运输到实验室，-10℃以下低温冰箱保存。5.1.1.2固体试样如鱼、肉等可使用冷冻干燥或使用无水硫酸钠干燥并充分混匀。油脂类可直接溶于正己烷中进行净化处理。5.1.2提取5.1.2.1提取前，将一空纤维素或玻璃纤维提取套筒装入索氏提取器中，以正己烷＋二氯甲烷（50＋50）为提取溶剂，预提取8h后取出晾干。5.1.2.2将预处理试样5.0g~10.0g装入上述5.1.2.1处理的提取套筒中，加入13C12标记的定量内标（3.2.2），用玻璃棉盖住试样，平衡30min后装入索氏提取器，以适量正己烷＋二氯甲烷（50＋50）为提取溶剂，提取18h～24h，回流速度控制在3次/h～4次/h。5.1.2.3提取完成后，将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。如分析结果以脂肪计则需要测定试样的脂肪含量。5.1.2.4脂肪含量的测定：浓缩前准确称重茄形瓶，将溶剂浓缩至干后准确称重茄形瓶，两次称重结果的差值为试样的脂肪量。测定脂肪量后，加入少量正己烷溶解瓶中残渣。5.1.3净化5.1.3.1酸性硅胶柱净化净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依次填入4g活化硅胶、10g酸化硅胶、2g活化硅胶、4g无水硫酸钠（见附录D中的图D.1）。然后用100mL正己烷预淋洗。净化：将浓缩的提取液全部转移至柱上，用约5mL正己烷冲洗茄形瓶3次~4次，洗液转移至柱上。待液面降至无水硫酸钠层时加入180mL正己烷洗脱，洗脱液浓缩至约1mL。如果酸化硅胶层全部变色，表明试样中脂肪量超过了柱子的负载极限。洗脱液浓缩后，制备一根新的酸性硅胶净化柱，重复上述操作，直至硫酸硅胶层不再全部变色。5.1.3.2复合硅胶柱净化净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依填入1.5g硝酸银硅胶、1g活化硅胶、2g碱性硅胶、1g活化硅胶、4g酸化硅胶、2g活化硅胶、2g无水硫酸钠（见附录D中的图D.1）。然后用30mL正己烷＋二氯甲烷（97＋3）预淋洗。净化：将经过5.1.3.1净化后浓缩洗脱液全部转移至柱上，用约5mL正己烷冲洗茄形瓶3次～4次，洗液转移至柱上。待液面降至无水硫酸钠层时加入50mL正己烷＋二氯甲烷（97＋3）洗脱，洗脱液浓缩至约1mL。5.1.3.3碱性氧化铝柱净化净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依填入2.5g经过烘烤的碱性氧化铝、2g无水硫酸钠（见附录D中的图D.1）。15mL正己烷预淋洗。净化：将经过5.1.3.2净化后浓缩洗脱液全部转移至柱上，用约5mL正己烷冲洗茄形瓶3次~4次，洗液转移至柱上。当液面降至无水硫酸钠层时加入30mL正己烷（2×15mL）洗脱柱子，待液面降至无水硫酸钠层时加入25mL二氯甲烷+正己烷（5+95）洗脱。洗脱液浓缩至近干。5.1.4上机分析前的处理GB5009.190—20144将净化后的试样溶液转移至进样小管中，在氮气流下浓缩，用少量正己烷洗涤茄形瓶3次～4次，洗涤液也转移至进样内插管中，氮气浓缩至约50μL，加入适量回收率内标（3.2.3），然后封盖待上机分析。5.2仪器参考条件5.2.1色谱条件5.2.1.1色谱柱：采用30m的DB-5ms（或相当于DB-5ms的其他类型）石英毛细管柱进行色谱分离，膜厚为0.25μm，内径为0.25mm。5.2.1.2采用不分流方式进样时，进样口温度为300℃。5.2.1.3色谱柱升温程序如下：初始温度为100℃，保持2min；15℃/min升温至180℃；3℃/min升温至240℃；10℃/min升温至285℃并保持10min。5.2.1.4使用高纯氦气（纯度99.999%）作为载气。5.2.2质谱参数5.2.2.1四极杆质谱仪电离模式：电子轰击源（EI），能量为70eV。离子检测方式：选择离子监测（SIM），检测PCBs时选择的特征离子为分子离子，见附录B中的表B.1。离子源温度为250℃，传输线温度为280℃，溶剂延迟为10min。5.2.2.2离子阱质谱仪电离模式：电子轰击源（EI），能量为70eV。离子检测方式：多反应监测（MRM），检测PCBs时选择的母离子为分子离子(M+2或M+4)，子离子为分子离子丢掉两个氯原子后形成的碎片离子（M-2Cl），见附录B中的表B.2。离子阱温度为220℃，传输线温度280℃，歧盒（manifold）温度40℃。5.3灵敏度检查进样1μL（20pg）CS1溶液，检查GC-MS灵敏度。要求3至7氯取代的各化合物检测离子的信噪比应达到3以上；否则，应重新进行仪器调谐，直至符合规定。5.4PCBs的定性和定量5.4.1PCBs色谱峰的确认要求:所检测的色谱峰信噪比应在3以上(参见附录C中的图C.1或图C.3)。5.4.2监测的两个特征离子的丰度比应在理论范围之内，分别见附录B中的表B.1和表B.2。5.4.3检查色谱峰对应的质谱图(参见附录C中的图C.2或图C.4)，当浓度足够大时，应存在丢掉两个氯原子的碎片离子（M-70），见附录B中的表B.1。5.4.4检查色谱峰对应的质谱图(参见附录C中的图C.2或图C.4)，对于三氯联苯至七氯联苯色谱峰中，不能存在分子离子加两个氯原子的碎片离子（M+70），见附录B中的表B.1。5.4.5被确认的PCBs保留时间应处在通过分析窗口确定标准溶液预先确定的时间窗口内。时间窗口确定标准溶液由各氯取代数的PCBs在DB-5ms色谱柱上第一个出峰和最后一个出峰的同族化合物组成。使用确定的色谱条件、采用全扫描质谱采集模式对窗口确定标准溶液进行分析（1μL），根据各族PCBs所在的保留时间段确定时间窗口。由于在DB-5ms色谱柱上存在三族PCBs的保留时间段重叠的现象，因GB5009.190—20145此在单一时间窗口内需要对不同族PCBs的特征离子进行检测。为保证分析的选择性和灵敏度要求，在确定时间窗口时应使一个窗口中检测的特征离子尽可能少。5.5分析结果的表述5.5.1本标准中对于PCB28、PCB52、PCB118、PCB153、PCB180、PCB206和PCB209使用同位素稀释技术进行定量，对其他目标化合物采用内标法定量；对于定量内标的回收率计算使用内标法。本标准所测定的20种目标化合物包括了PCBs工业产品中的大部分种类。从三氯联苯到八氯联苯每族三个化合物，九氯联苯和十氯联苯各一个，见附录A中的表A.4。每族使用一个13C12标记化合物作为定量内标，见附录A中表A.2。计算定量内标回收率的回收内标为两个，见附录A中的表A.3。在计算定量内标的回收率时，13C12-PCB101作为13C12-PCB28、13C12-PCB52、13C12-1PCB18和13C12-PCB153的回收率内标，13C12-PCB194为13C12-PCB180、13C12-PCB202、13C12-PCB206和13C12-PCB209的回收率内标。5.5.2相对响应因子（RRF）：本标准采用RRF进行定量计算，使用校正标准溶液计算RRF值，计算公式见式（1）和式（2）。nssncAcARRFn…………………………………………（1）srrrcA