GB 5009.191-2016 食品安全国家标准 食品中氯丙醇及其脂肪酸酯含量的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.191—2016食品安全国家标准食品中氯丙醇及其脂肪酸酯含量的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.191—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T5009.191—2006《食品中氯丙醇含量的测定》、GB/T18782—2002《调味品中3-氯-1,2-丙二醇的测定》、SN/T0548.1—2002《出口酱油中1,3-二氯-2-丙醇和2,3-二氯-1-丙醇的检验方法》。本标准与GB/T5009.191—2006相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中氯丙醇及其脂肪酸酯含量的测定”;———第二法增加D5-2-MCPD、D5-2,3-DCP作为内标物质,将净化步骤由手填硅藻土层析柱净化改为硅藻土小柱净化;———删除第三法;———增加气相色谱-质谱法测定食品中氯丙醇脂肪酸酯含量的检测方法。GB5009.191—20161食品安全国家标准食品中氯丙醇及其脂肪酸酯含量的测定1范围本标准规定了食品中氯丙醇和氯丙醇脂肪酸酯的测定方法。本标准适用于食品中氯丙醇和氯丙醇脂肪酸酯含量的测定。本标准包括食品中3-氯-1,2-丙二醇含量的测定、食品中氯丙醇多组分含量的测定、食品中氯丙醇脂肪酸酯含量的测定共3个检测方法。第一法食品中3-氯-1,2-丙二醇含量的测定同位素稀释-气相色谱-质谱法2原理本标准采用同位素稀释技术,以D5-3-氯-1,2-丙二醇(D5-3-MCPD)为内标。试样中加入内标,以硅藻土为吸附剂,进行固相支持液-液萃取,用正己烷-无水乙醚溶液(9+1)淋洗去除非极性脂质成分,用无水乙醚洗脱3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)。以七氟丁酰基咪唑衍生,采用气相色谱-质谱仪测定,内标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。3.1.2正己烷(C6H14):色谱纯。3.1.3无水乙醚(C4H10O):使用前需重蒸,重蒸时加少量还原铁粉。3.1.4氯化钠(NaCl)。3.1.5无水硫酸钠(Na2SO4):使用前于120℃烘烤4h。3.1.6七氟丁酰基咪唑(C7H3F7N2O,CAS号32477-35-3):纯度≥98%。3.2试剂配制3.2.1氯化钠溶液(20%):称取氯化钠20g,加入80mL水,搅拌使氯化钠充分溶解。3.2.2正己烷-无水乙醚溶液(9+1):将450mL正己烷与50mL无水乙醚混合均匀。3.3标准品3.3.13-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)标准品(C3H7ClO2,CAS号96-24-2):纯度≥98%。3.3.2D5-3-氯-1,2-丙二醇(D5-3-MCPD)标准品(C3D5H2ClO2):纯度≥98%。GB5009.191—201623.4标准溶液配制注:标准溶液配制好后均需转移至密闭性非常好的棕色玻璃容器中,于-20℃贮存。3.4.13-MCPD和D5-3-MCPD标准储备液(1000mg/L):分别准确称取3-MCPD和D5-3-MCPD各10mg(精确至0.01mg),用乙酸乙酯溶解,分别转移至2个10mL容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,混匀。保存期为2年。3.4.23-MCPD标准中间液(10mg/L):准确移取3-MCPD标准储备液(1000mg/L)0.1mL于10mL容量瓶中,用正己烷稀释至刻度,混匀。保存期为1年。3.4.33-MCPD标准工作液(1mg/L):准确移取3-MCPD标准中间液(10mg/L)1mL于10mL容量瓶中,用正己烷稀释至刻度,混匀。保存期为6个月。3.4.4D5-3-MCPD标准工作液(10mg/L):准确移取D5-3-MCPD标准储备液(1000mg/L)0.25mL于25mL容量瓶中,用正己烷稀释至刻度,混匀。保存期为1年。3.4.53-MCPD系列标准工作液:分别吸取3-MCPD标准工作液(1mg/L)0.01mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.6mL和3-MCPD标准中间液(10mg/L)0.32mL于密闭性很好的适当体积(5mL或10mL)的透明具塞(盖)玻璃管中,分别加入D5-3-MCPD标准工作液(10mg/L)20μL,加正己烷至2mL,配制成含3-MCPD质量分别为10ng、50ng、100ng、200ng、400ng、800ng、1600ng、3200ng的系列标准工作液,其中D5-3-MCPD的质量均为200ng。临用现配。3.5材料3.5.1硅藻土。3.5.2气密针:1mL。3.5.3玻璃层析柱:柱长40cm,柱内径2cm。4仪器和设备4.1气相色谱-质谱仪。4.2电子天平:感量分别为1mg和0.01mg。4.3超声振荡器。4.4旋转蒸发仪。4.5恒温箱或其他恒温加热器。4.6涡旋振荡器。4.7离心机。5分析步骤5.1试样制备液态样品摇匀;基质均匀的半固态样品和粉状固态样品直接测定;其他样品需匀浆粉碎均匀。制备好的试样于0℃~5℃保存。5.2试样提取5.2.1液态试样称取试样4g(精确至0.001g)于50mL烧杯中,加入D5-3-MCPD标准工作液(10mg/L)20μL,加GB5009.191—20163入氯化钠溶液(20%)4g,超声混匀5min,待净化。5.2.2半固态及固态试样(提取后无明显残渣的半固态及固态试样)称取试样4g(精确至0.001g)于50mL烧杯中,加入D5-3-MCPD标准工作液(10mg/L)20μL,加入氯化钠溶液(20%)6g,超声10min,待净化。5.2.3半固态及固态试样(提取后有明显残渣的半固态及固态试样)称取试样4g(精确至0.001g)于15mL离心管中,加入D5-3-MCPD标准工作液(10mg/L)20μL,加入氯化钠溶液(20%)15g,超声提取10min,以5000r/min离心10min,移取上清液,待净化。5.3试样净化取硅藻土5g,加入提取液,充分混匀,放置10min。取5g硅藻土装入层析柱中(层析柱下端填充少量玻璃棉)。将提取液与硅藻土的混合物装入层析柱中,上层加1cm高度的无水硫酸钠。用40mL正己烷-无水乙醚溶液(9+1)淋洗,弃去流出液。用150mL无水乙醚洗脱3-MCPD(流速约为8mL/min),收集流出液,加入15g无水硫酸钠,混匀以吸收水分,放置10min后以漏斗过滤。滤液于35℃下旋转蒸发至近干(约0.5mL),用2mL正己烷溶解残渣,并转移至密闭性很好的适当体积(5mL或10mL)的透明具塞(盖)玻璃管中,待衍生化。5.4衍生化用气密针向正己烷复溶液中加入0.04mL七氟丁酰基咪唑,立即密塞,涡旋混合30s,于70℃保温20min。取出放至室温,加入2mL氯化钠溶液(20%),涡旋1min,静置,使水相和正己烷相分层,且水相澄清。移出正己烷相,加入约0.3g无水硫酸钠进行干燥,将溶液转移至进样小瓶中,供气相色谱-质谱测定。同时做3-MCPD系列标准工作液的衍生化。5.5空白试样溶液制备称取与试样相同质量的氯化钠溶液(20%)或空白试样,以下步骤按5.2、5.3和5.4与试样同时处理,以考察在试样测定过程中是否存在系统污染。5.6仪器参考条件5.6.1气相色谱参考条件5.6.1.1色谱柱:含5%苯基亚芳基聚合物或5%苯基-甲基聚硅氧烷的弱极性毛细管气相色谱-质谱柱(柱长30m,内径0.25μm,膜厚0.25μm),或性能相当者。5.6.1.2载气:氦气,流速为1mL/min。5.6.1.3进样口温度:250℃。5.6.1.4进样体积:1μL,不分流进样,不分流时间为0.5min,溶剂延迟时间为5min。。5.6.1.5程序升温:50℃保持1min,以2℃/min升至90℃,再以40℃/min升至270℃,并保持5min。5.6.2质谱参考条件5.6.2.1离子源:电子轰击源(EI)。5.6.2.2电离能量:70eV。5.6.2.3离子源温度:250℃。5.6.2.4传输线温度:280℃。GB5009.191—201645.6.2.5扫描方式:选择离子监测模式(SIM)。5.6.2.6监测离子:3-MCPD衍生物定量离子m/z253,定性离子m/z275、m/z289、m/z291;D5-3-MCPD衍生物定量离子m/z257,定性离子m/z278、m/z294、m/z296。5.7标准曲线的制作将1μL3-MCPD系列标准工作液的衍生液按浓度由低到高依次注入气相色谱-质谱仪中,测得3-MCPD和D5-3-MCPD的衍生物的峰面积,以3-MCPD系列标准工作溶液中的3-MCPD和D5-3-MCPD的质量比为横坐标,以3-MCPD和D5-3-MCPD的衍生物的峰面积比为纵坐标,绘制标准曲线。5.8试样溶液的测定将1μL试样溶液注入气相色谱-质谱仪中,测得峰面积,根据标准曲线得到试样溶液中3-MCPD的质量。6分析结果的表述试样中3-MCPD的含量按式(1)计算:X=A×fm×1000…………………………(1)式中:X———试样中3-MCPD的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);A———试样溶液中3-MCPD的质量,单位为纳克(ng);f———称取试样后进行分析测定前的稀释倍数;m———试样的质量,单位为克(g);1000———换算系数。计算结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。8其他食品中3-氯-1,2-丙二醇的检出限为0.005mg/kg,定量限为0.01mg/kg。第二法食品中氯丙醇多组分含量的测定同位素稀释-气相色谱-质谱法9原理本标准采用同位素稀释技术,以D5-3-氯-1,2-丙二醇(D5-3-MCPD)、D5-2-氯-1,3-丙二醇(D5-2-MCPD)、D5-1,3-二氯-2-丙醇(D5-1,3-DCP)和D5-2,3-二氯-2-丙醇(D5-2,3-DCP)为内标。试样中加入内标,以氯化钠溶液提取,采用硅藻土小柱进行净化,用正己烷淋洗,用乙酸乙酯洗脱氯丙醇,经七氟丁酰基咪唑衍生,以气相色谱-质谱测定,内标法定量。GB5009.191—2016510试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。10.1试剂10.1.1乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。10.1.2正己烷(C6H14):色谱纯。10.1.3氯化钠(NaCl)。10.1.4无水硫酸钠(Na2SO4):使用前于120℃烘烤4h。10.1.5七氟丁酰基咪唑(C7H3F7N2O,CAS号32477-35-3):纯度≥98%。10.2试剂配制氯化钠溶液(20%):称取氯化钠20g,加入80mL水,搅拌使氯化钠充分溶解。10.3标准品10.3.13-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)标准品(C3H7ClO2,CAS号96-24-2):纯度≥98%。10.3.2D5-3-氯-1,2-丙二醇(D5-3-MCPD)标准品(C3D5H2ClO2):纯度≥98%。10.3.32-氯-1,3-丙二醇(2-MCPD)标准品(C3H7ClO2,CAS号497-04-1):纯度≥98%。10.3.4D5-2-氯-1,3-丙二醇(D5-2-MCPD)标准品(C3D5H2ClO2):纯度≥98%。10.3.51,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)标准品(C3H6Cl2O,CAS号96-23-1):纯度≥98%。10.3.6D5-1,3-二氯-2-丙醇(D5-1,3-DCP)标准品(C3D5HCl2O):纯度≥98%。10.3.72,3-二氯-1-丙醇(2,3-DCP)标准品(C3H6Cl2O,CAS号616-23-9):纯度≥98%。10.3.8D5-2,3-二氯-1-丙醇(D5-2,3-DCP)标准品(C3D5HCl2O):纯度≥97%。10.4标准溶液配制注:标准溶液配制好后均需转移至密闭性非常好的棕色玻璃容器中,于-2