GB 5009.277-2016 食品安全国家标准 食品中双乙酸钠的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.277—2016食品安全国家标准食品中双乙酸钠的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.277—2016Ⅰ前言本标准代替GB/T23383—2009《食品中双乙酸钠的测定高效液相色谱法》。本标准与GB/T23383—2009相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中双乙酸钠的测定”;———修改了标准的适用范围。GB5009.277—20161食品安全国家标准食品中双乙酸钠的测定1范围本标准规定了食品中双乙酸钠的液相色谱测定方法。本标准适用于豆干类、豆干再制品、原粮、粉圆、糕点、预制肉制品、熟肉制品、熟制水产品(可直接食用)、固体复合调味料、膨化食品中双乙酸钠的测定。本标准不适用于调味品、液体复合调味料及添加过乙酸的食品的测定。2原理试样中双乙酸钠酸化后转化为乙酸,经超声波水浴提取或水蒸气蒸馏,收集后调pH,经高效液相色谱测定,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,色谱用水为GB/T6682规定的一级水,其他用水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂3.1.1磷酸(H3PO4)。3.1.2磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]。3.1.3硅油[(C2H6OSi)n]。3.2试剂配制3.2.1磷酸溶液(1mol/L):在500mL水中加入53.5mL磷酸,混匀后加水定容至1000mL。3.2.2磷酸氢二铵溶液(1.5g/L):称取磷酸氢二铵1.5g,加水溶解定容至1000mL。3.3标准品双乙酸钠标准品[(CH3COO)2HNa,CAS号:126-96-5]:纯度≥99%。3.4标准溶液配制3.4.1标准储备液(10mg/mL):准确称取双乙酸钠标准品1g(精确至0.0001g),用水定容至100mL。该标准储备液置于0℃~4℃冰箱内保存,保存期为3个月。3.4.2标准工作液:准确吸取5.0mL标准储备液于50mL容量瓶中,用水稀释至刻度,配制成浓度为1.0mg/mL标准工作液。该标准工作液置于0℃~4℃冰箱内保存,保存期为1个月。4仪器和设备4.1高效液相色谱(HPLC)仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。GB5009.277—201624.2分析天平:感量为0.0001g和0.01g。4.3组织捣碎机。4.4水蒸气蒸馏装置:500mL。4.5离心机:转速≥4000r/min。4.6具塞塑料离心管:50mL。4.7超声波清洗器。4.8pH计。4.90.45μm水相微孔滤膜。4.10精密pH试纸:pH0.5~5.0。5分析步骤5.1试样制备固体样品取500g,经组织捣碎机捣碎混匀后备用;液体样品摇匀后备用。5.2试样处理5.2.1蒸馏法准确称取25g(精确至0.01g)试样,置于500mL蒸馏瓶中,加入100mL水,再用50mL水冲洗容器,转移到蒸馏瓶中,加磷酸溶液(1mol/L)20mL,2滴~3滴硅油,进行水蒸气蒸馏,将250mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液接收装置,待蒸馏约240mL时取出,在室温下放置30min,用1mol/L磷酸溶液调pH为3左右,加水定容,摇匀,经0.45μm水相微孔滤膜过滤后,供液相色谱测定。5.2.2直接浸提法(仅适用于馒头、花卷)准确称取5g(精确至0.01g)试样至100mL烧杯中,加水20mL,加入1mol/L磷酸溶液0.5mL,混匀,经超声浸提10min后,用磷酸溶液(1mol/L)调pH为3左右,转移试样至50mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。将试样全部转移至50mL具塞塑料离心管中,以不低于4000r/min离心10min,取上清液,经0.45μm水相微孔滤膜过滤后,供液相色谱测定。5.3仪器参考条件a)色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效色谱柱;b)柱温:25℃;c)流动相:用磷酸溶液(1mol/L)调节磷酸氢二铵溶液(1.5g/L)pH为2.7~3.5(临用现配),经0.45μm水相微孔滤膜过滤;d)流速:1.0mL/min;e)波长:214nm;f)进样量:20μL;g)色谱柱清洗参考条件:试验结束后,用10%甲醇清洗1h,再用100%甲醇清洗1h。5.4标准曲线的制作5.4.1蒸馏法准确吸取双乙酸钠标准储备液1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL、12.5mL置于500mLGB5009.277—20163蒸馏瓶中,其他操作同5.2.1,其双乙酸钠标准溶液最终浓度分别为0.04mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL,经0.45μm水相微孔滤膜过滤后分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。5.4.2直接浸提法准确吸取标准工作液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL至10mL容量瓶中,分别加入磷酸溶液(1mol/L)0.2mL,用水定容至10mL。其双乙酸钠标准溶液浓度分别为0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL,经0.45μm水相微孔滤膜过滤后分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。5.5试样溶液的测定将试样溶液注入液相色谱仪中,得到峰面积,根据标准曲线得到待测液中双乙酸钠的浓度。双乙酸钠标准溶液液相色谱图参见图A.1。6分析结果的表述试样中双乙酸钠含量按式(1)计算:X=ρ×V×1000m×1000×f…………………………(1)式中:X———试样中双乙酸钠的含量,单位为克每千克(g/kg);ρ———由标准曲线求出样液中双乙酸钠的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);V———样液最终定容体积,单位为毫升(mL);1000———换算系数;m———样品质量,单位为克(g);f———稀释倍数。计算结果保留三位有效数字。注:若在GB2760中未规定添加双乙酸钠的食品中检出双乙酸钠时或在GB2760中规定允许添加双乙酸钠的食品中检出值超出限量范围时,则需要对该食品样品中乙酸的本底值进行测定,具体按附录B操作。在计算该食品中双乙酸钠的含量时,应扣减乙酸本底的含量。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他8.1蒸馏法检出限当样品称样量为25.0g,定容体积为250mL时,方法检出限为:0.030g/kg;方法定量限为:0.100g/kg。8.2直接浸提法当样品称样量为5.0g,定容体积为50mL时,方法检出限为:0.015g/kg;方法定量限为:0.05g/kg。GB5009.277—20164附录A双乙酸钠标准溶液液相色谱图双乙酸钠标准溶液液相色谱图见图A.1。图A.1双乙酸钠标准溶液液相色谱图GB5009.277—20165附录B食品中乙酸本底的测定方法B.1分析步骤B.1.1试样制备见5.1。B.1.2试样处理(蒸馏法)准确称取25g(精确至0.01g)试样,置于500mL蒸馏瓶中,加入100mL水,再用50mL水冲洗容器,转移到蒸馏瓶中,加2滴~3滴硅油,进行水蒸气蒸馏,将250mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液接收装置,待蒸馏约240mL时取出,在室温下放置30min,用磷酸溶液(1mol/L)调pH为3左右,加水定容,摇匀,经0.45μm水相微孔滤膜过滤后,供液相色谱测定。B.1.3仪器参考条件见5.3。B.1.4标准曲线的制作见5.4.1。B.1.5试样溶液的测定见5.5。B.2分析结果的表述试样中乙酸本底的含量按式(2)计算:X1=ρ1×V1×1000m1×1000×f1…………………………(B.1)式中:X1———试样中乙酸本底的含量,单位为克每千克(g/kg);ρ1———由标准曲线求出样液中乙酸的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);V1———试样溶液最终定容体积,单位为毫升(mL);1000———换算系数;m1———试样质量,单位为克(g);f1———稀释倍数。B.3精密度见第7章。