TCCCMHPIE 1.23-2016 植物提取物 虾青素油

ICS11.120C25T中国医药保健品进出口商会团体标准T/CCCMHPIE1.21—2016植物提取物虾青素油Plantextract—AstaxanthinOil2017-06-21发布2017-07-01实施中国医药保健品进出口商会发布前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20004.1-2016给出的规则起草。本标准由中国医药保健品进出口商会提出。本标准由中华人民共和国商务部归口。本标准起草单位：北京绿色金可生物技术股份有限公司。本标准主要起草人：姚军芳、侯翔燕、李艳梅、张培楠、吴启林、李春华。T/CCCMHPIE1.23—20161植物提取物虾青素油1　范围本标准规定了虾青素油的的技术要求、检验方法、检验规则和标签、包装、运输、贮存及保质期要求。本标准适用于以人工培养的红球藻属雨生红球藻（Haematococcuspluvialis）为原料经提取精制后，得到的虾青素油。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GGB9685食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部0832水分测定法《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部0821重金属检查法《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部2321铅、镉、砷、汞、铜测定法《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法3　技术要求3.1　工艺要求3.1.1　植物原料雨生红球藻（Haematococcuspluvialis）为人工养殖，在培养成熟后，收获而得到。3.1.2　工艺过程雨生红球藻→超临界二氧化碳萃取或溶剂提取纯化→产品3.2　产品要求3.2.1　感官要求应符合表1的规定。表1感官要求项目要求色泽深红色气味藻类特殊气味状态油状物3.2.2　理化要求应符合表2的规定。T/CCCMHPIE1.23—20162表2　理化要求项目指标鉴别符合规定虾青素含量/%≥5.0游离虾青素含量(面积归一化法)/%≤5.0水分/%≤0.5重金属（以Pb计）/(mg/kg)≤10铅（Pb）/(mg/kg)≤1.0镉（Cd）/(mg/kg)≤1.0砷（As）/(mg/kg)≤2.0汞（Hg）/(mg/kg)≤1.03.2.3　微生物要求应符合表3规定。表3微生物指标项目指标细菌总数/(cfu/g)＜1000霉菌及酵母菌数/(cfu/g)＜100大肠埃希氏菌不得检出沙门氏菌不得检出3.2.4　其他污染物其他污染物限量要求，依据不同要求，应符合我国相关法规的规定。对于出口产品，应符合出口目的国相关法规的规定。4　检验方法4.1　感官检验启开试样后，立即嗅其气味；另取试样适量置于无色50mL比色管中，在自然光线下，观察其色泽、外观，并检查有无异物。4.2　理化检验4.2.1　鉴别按第A.2章中规定的检验方法进行测定，所得供试品谱图中的三个主要的峰分别与对照品谱图中的13-顺式虾青素，全反式虾青素和9-顺式虾青素的保留时间一致。4.2.2　虾青素含量按第A.2章中规定的检验方法进行测定。4.2.3　游离虾青素含量按第A.3章中规定的检验方法进行测定。4.2.4　水分T/CCCMHPIE1.23—20163按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部0832水分测定法中第一法进行测定。4.2.5　重金属（以Pb计）按《按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部0821重金属检查法中第二法进行测定。4.2.6　铅按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部2321铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.7　镉按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部2321铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.8　砷按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部2321铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.9　汞按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部2321铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.3　微生物检验4.3.1　细菌总数按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中规定的方法检验。4.3.2　霉菌及酵母菌数按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中规定的方法检验4.3.3　大肠埃希氏菌按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中规定的方法检验。4.3.5　沙门氏菌按《中华人民共和国药典（2015年版）》第四部1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中规定的方法检验。5　检验规则5.1　组批同品种、同等级、同一批投料生产的产品，以同一生产日期为一检验批次。5.2　出厂检验5.2.1　产品须逐批检验，检验合格并签发合格证后产品方可出厂。5.2.2　出厂检验项目：外观、水分、虾青素含量、游离虾青素含量、重金属及有害元素、菌落总数、霉菌及酵母菌数、大肠埃希氏菌、沙门氏菌。5.3　型式检验53.1　型式检验项目包括本标准中规定的全部项目。T/CCCMHPIE1.23—201645.3.2　正常生产时每年应进行一次型式检验。5.3.3　有下列情况之一时，应进行型式检验。a）原料来源变动较大时；b）正式投产后，如配方、生产工艺有较大变化，可能影响产品质量时；c）出厂检验与上一次型式检验结果有较大差异时；d）产品停产6个月以上,恢复生产时；e）食品安全监督部门提出进行型式检验的要求时。5.4　判定规则5.4.1　检验结果全部项目符合本标准规定时，判该批产品为合格品。5.4.2　检验结果不符合本标准要求时，可以在原批次产品中双倍抽样复检一次，判定以复检结果为准。复检后仍有一项或一项以上不符合标准时，判该批产品为不合格品。6　包装、标签、运输、贮存和保质期6.1　包装包装材料应符合GB9685食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准的要求。6.2　标签包装标签上应标注：产品名称、产品批号、产品规格、净含量、生产日期、保质期、生产厂名、厂址、产地。标签内容清晰可见，标签应粘贴牢固。6.3　运输运输时必须轻装轻卸，不得与有毒、有害和易污染物品混装载运，严防雨淋、暴晒。6.4　贮存产品应存放在干燥、通风、阴凉、避光、清洁的地方，堆码距墙壁和地面20cm以上、并有垫隔物。避免与有毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。6.5　保质期在符合规定的贮运条件、包装完整、未经开启封口的情况下，保质期为24个月。T/CCCMHPIE1.23—20165A.1　一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2　虾青素含量测定A.2.1　方法提要虾青素油主要含有虾青素单酯、虾青素二酯和游离虾青素。虾青素酯经胆固醇酯酶酶解后，都转化成游离虾青素。虾青素含量以游离虾青素计。A.2.2　仪器和用具A.2.2.1　分析天平，感量为0.01mg。A.2.2.2　超声波清洗仪。A.2.2.3　高效液相色谱仪（附紫外检测器）。A.2.2.4　0.45μm微孔滤膜，有机相。A.2.2.5　棕色容量瓶（100mL）。A.2.2.6　离心机。A.2.2.7　涡旋混合器。A.2.2.8　恒温箱。A.2.2.9　氮吹仪。A.2.3　试剂和溶液A.2.3.1　甲醇，色谱纯。A.2.3.2　叔丁基甲醚，色谱纯。A.2.3.3　磷酸，优级纯。A.2.3.4　三羟甲基氨基甲烷。A.2.3.5　石油醚（60-90℃）。A.2.3.6　丙酮。A.2.3.7　纯水，GB/T6682规定的二级水。A.2.3.8　十水硫酸钠。A.2.3.9　无水硫酸钠。A.2.3.10　盐酸A.2.3.11　内标：反式-β-阿朴-8'-胡萝卜醛（Trans-beta-apo-8'-carotenal），Sigma货号10829或其他等同品。A.2.3.12　对照品：USPAstaxanthinEstersfromHaematococcuspluvialisRS（注：该对照品为雨生红球藻来源的虾青素酯混合物，含有13-顺式虾青素、全反式虾青素和9-顺式虾青素的脂肪酸酯，标示的总虾青素含量以酶解后游离虾青素计约10%）。A.2.3.13　胆固醇酯酶（Cholesterolesterase），WakoPureChemicals货号037-11221，Sigma货号C9281或其他等同品。A.2.3.14　0.05mol/LTris-HCl（pH7.0）缓冲液的配制：精确称取三羟甲基氨基甲烷0.606g，用75mL去离子附录A（规范性附录）检验方法T/CCCMHPIE1.23—20166水溶解，用1mol/L盐酸调pH7.0，用水稀释至100mL。A.2.3.15　胆固醇酯酶溶液的配制：精确称取胆固醇酯酶适量到25mL容量瓶中，用0.05mol/LTris-HCL（pH）缓冲液溶解，配成浓度为4个酶活单位/mL的酶溶液，现用现配。A.2.4　色谱条件及系统适用性A.2.4.1　色谱条件a)色谱柱：YMCTMCarotenoidS-5（4.6×250mm，5μm）或同类型色谱柱。b)流动相：A相为甲醇，B相为甲基叔丁基醚，C相为1%磷酸水。梯度条件见表A.1。表A.1　梯度条件时间/minA/%B/%C/%0-1581→6615→30415-2366→1630→80423-271680427-2816→8180→15428-3581154c)检测波长：474nm。d)柱温：25℃e)流速：1.0mL/minf)进样量：20μLA.2.4.2　系统适用性理论塔板数按全反式虾青素计应不低于5000，13-顺式虾青素与全反式虾青素的分离度应不小于2.0。A.2.5　操作方法A.2.5.1　内标溶液的制备：取反式-β-阿朴-8'-胡萝卜醛适量，精密称定，用丙酮溶解并配制成0.18mg/mL的溶液。A.2.5.2　对照品储备溶液的制备：取虾青素酯对照品约30mg，精密称定，到10mL干燥小烧杯中，用丙酮溶解并转移到100mL容量瓶中，丙酮定容，摇匀，即得（每1mL含全反式虾青素对照品27μg）。A.2.5.3　对照品溶液的制备：准确吸取2.0mL对照品贮备液、1.0mL内标溶液和3.0mL胆固醇酯酶溶液于10mL玻璃具塞离心管中，倒置混合均匀。将离心管置于37℃的恒温箱中反应45min，每10min缓慢倒置混合一次。反应后，向管中加入1g十水硫酸钠、2mL石油醚，涡旋混合30秒，然后置于离心机中在3000rpm下离心3min。吸取石油醚层于另一只10mL玻璃离心管（管中事先加入1g无水硫酸钠）。在室温下用氮气吹干石油醚，加入3mL丙酮，超声溶解，过滤，滤液即为对照品溶液。A.2.5.4　供试品储备溶液的制备：将供试品置于50-60℃水浴中避光保温30min，每隔10分钟摇一次。称取供试品约60mg，精密称定，于10mL干燥小烧杯中，丙酮溶解并完全转移至100mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，摇匀。可根据供试品的含量适当调节称样量，如供试品含量为10%，则称样量为30mg。A.2.5.5　供试品溶液的制备：准确吸取2.0mL供试品贮备液和1.0mL内标溶液于10mL玻璃具塞离心管中，按“对照品溶液”项下操作，即得。A.2.5.6　测定方法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液20μL，依次注入高效液相色谱仪，测定，计算含量。A.2.6　结果计算虾青素油中虾青素含量以游离虾青素的质量分数计，数值以%表示，按公式（A.1）计算：T/CCCMHPIE1.23—20167……(A.1)式中：w1——供试品中虾青素的含量（以游离虾青素计）/%；m1——对