霍乱诊断统一标准及处理原则GB

霍乱诊断原则及解决原则GB霍乱诊断原则及解决原则GB霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌引起急性肠道传染病，是发病急、传播快、波及面广、危害严重甲类传染病，也是当今三种国际检疫传染病中最严重一种。依照《中华人民共和国传染病防治法》和《中华人民共和国传染病防治法实行办法》规定，制定本病诊断原则及解决原则。1主题内容与合用范畴本原则规定了霍乱诊断原则，对病人、疫点、疫区解决原则等，并推荐了对霍乱病原学检查、血清免疫学检查、霍乱弧菌鉴定和分型办法以及对病人补液疗法等。本原则合用于全国各级卫生防疫、医疗保健机构对由01群和0139群霍乱弧菌引起霍乱诊断和解决。2诊断原则依照夏秋季节霍乱流行期间疫区内，凡有腹泻，伴有呕吐，从粪便或吐泻物检出01群或0139群霍乱弧菌或血清检核对01群或0139群霍乱弧菌抗体有明显升高者予以诊断。病人临床症状可由轻度到重度不等。3诊断原则3.1疑似霍乱诊断原则a.凡有典型临床症状，如激烈腹泻，水样便(黄水样、清水样、米泔样或血水样)，伴有呕吐，迅速浮现严重脱水，循环衰竭及肌肉痉挛(特别是腓肠肌)首发病例，在病原学检查尚未必定前。b.霍乱流行期间有明确接触史(犹如餐、同住或护理者等)，并发生泻吐症状，而无其她因素可查者。具备上述项目之一者诊断为疑似霍乱。3.2拟定诊断原则a.凡有腹泻症状，粪便培养01群或0139群霍乱弧菌阳性；b.霍乱流行期间疫区内，凡有霍乱典型症状(见3.1a)，粪便培养01群和0139群霍乱弧菌阴性，但无其她因素可查者；c.在流行期间疫区内有腹泻症状，作双份血清抗体效价测定，如血清凝集实验呈4倍以上或杀弧菌抗体测定呈8倍以上增长者；d.在疫源检查中，初次粪便培养检出01群或0139群霍乱弧菌先后各5天内有腹泻症状者。临床诊断：具备b。确诊病例：具备a或c或d。4临床分型原则4.1轻型仅有腹泻症状，很少伴呕吐，大便一天少于10次，大便性状为软便、稀便或黄水样便，个别患者粪便带粘液或血，皮肤弹性正常或略差，大多数患者能照常进食及起床活动，脉搏、血压、尿量均正常。4.2中型腹泻次数一日10～20次，精神体现淡漠，有音哑，皮肤干而缺少弹性，眼窝下陷，有肌肉痉挛，脉搏细速，血压(收缩压)小朋友＜9.33kPa(＜70mmHg)，成人12～9.33kPa(90～70mmHg)，尿量每日＜400mL，脱水限度相称体重小朋友为5％～10％，成人为4％～8％。4.3重型腹泻次数一日20次以上，极度烦躁甚至昏迷，皮肤弹性消失，眼窝深凹，明显发绀，严重肌肉痉挛，脉搏薄弱而速，甚或无脉，血压(收缩压)小朋友＜6.67kPa(＜50mmHg)，成人＜9.33kPa(＜70mmHg)或测不到等循环衰竭体现，尿量每日＜50mL或无尿，脱水限度小朋友相称于体重10％以上，成人8％以上。4.4中毒型(干性霍乱)为一较罕见类型，起病后迅速进入休克状态，无泻吐或泻吐较轻，无脱水或仅轻度脱水，但有严重中毒性循环衰竭。5治疗原则5.1按甲类传染病隔离治疗。危重病人应先就地急救，待病情稳定后在医护人员陪伴下送往指定隔离病房。确诊与疑似病例应分开隔离。5.2轻度脱水病人，以口服补液为主。口服补液治疗办法可参照附录DD1章。5.3中、重型脱水病人，须及时进行静脉输液急救，待病情稳定、脱水限度减轻、呕吐停止后改为口服补液。输液治疗办法可参照附录DD2章。5.4在液体疗法同步，予以抗菌药物治疗以减少腹泻量和缩短排菌期。可依照药物来源及引起流行霍乱弧菌对抗菌药物敏感性，选定一种惯用抗菌药物，连服3天。惯用抗菌药物及剂量可参照附录E。6解除隔离原则6.1停服抗菌药物后，持续二天粪便培养(如无粪便，可用肛拭子从直肠取粪便)未检出霍乱弧菌者解除隔离。6.2患者经治疗症状消失后，如无大便培养条件，自发病日起，住院隔离不得少于七天。6.3慢性带菌者，大便培养持续七天阴性，每周培养胆汁一次，持续两次阴性者可解除隔离，但尚需进行流行病学观测。7疫点疫区解决疫点疫区划定及解决目在于及时发现和管理传染源，切断传播途径，迅速控制疫情。对从首例病人检出埃尔托型霍乱弧菌应及时做噬菌体－生物分型。如为流行株要及时划定疫点、疫区，并按下列规定解决。如为非流行株，按普通腹泻病菌解决。7.1疫点、疫区划定a.疫点：指与病人、疑似病人或带菌者同一门出入住户或与其生活有密切关系若干户为范畴。b.疫区：依照疫点地理位置、水系分布、交通状况、自然村落等特点来划定。普通在农村以一种村或几种村、一种乡或毗邻乡，在都市以一种或几种居委会或一种街道为范畴。7.2疫点解决a.疫情报告：责任疫情报告人发现病人、疑似病人或带菌者时，城乡于6h内，农村于12h内，以最快通讯方式向发病地卫生防疫机构报告，并同步报出传染病卡。b.隔离治疗传染源：病人、疑似病人和带菌者要及时就地隔离治疗。转送病人时对途中污染物品、地面和运送病人工具要随时消毒解决。c.疫点消毒：做好随时消毒和终末消毒。对病人、疑似病人和带菌者吐泻物和污染过环境、物品、饮用水进行消毒。d.验便：对疫点内所有人员，自开始解决之日起每日验便一次。第一次采便应在服药迈进行。e.病家和密切接触者防止服药：可依照药敏实验状况和药物来源选取一种抗菌药物，连服2天。惯用抗菌药物及服用剂量参照附录E。7.3疫点解除：在传染源隔离后，疫点内所有人员验便持续两次阴性，无续发病人或带菌者浮现时可予以解除。如无粪检条件，自疫点解决后5日内无新病例浮现时亦可解除。7.4疫区解决：加强饮用水消毒和水源管理、饮食卫生和集市贸易管理、做好粪便管理、改进环境卫生。及时发现传染源，按7.2规定解决，防止传播。附录A病原学检查(补充件)A1标本收集标本以病人粪便为主，水样便采用1～3mL，成形便采用指甲大小粪量，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm处采用。A2标本送检采得标本应及时接种于培养基。不能及时检查，要放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固体保存培养基中。标本与保存液比例约为1∶5。A3分离培养A3.1直接分离培养：急性期病人水样大便标本在增菌培养同步可取其粘液絮片或用棉拭子直接接种在选取性培养基上。目前惯用强选取性培养基有庆大霉素琼脂、4号琼脂和TCBS琼脂等。A3.2增菌后分离培养：所有粪便标本都应接种碱性蛋白胨水培养基，放37℃增菌6～8h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于强选取性琼脂平皿。A3.3鉴定：自分离培养基上挑取可疑菌落与01群霍乱弧菌多价诊断血清及0139群霍乱弧菌诊断血清做玻片凝集实验。玻片凝集用血清效价普通应为1∶40～1∶50。如可疑菌落在血清中不久(普通在10s内)浮现肉眼可见明显凝集，在生理盐水中不凝集者判为阳性。可疑菌落较多时，应挑选5个以上菌落逐个进行玻片凝集检查，必要时，取原划线菌落边沿透明某些再做玻片凝集，均为阴性时方可报告未检出01群及0139群霍乱弧菌。对首发病例菌株需送上一级实验室做进一步鉴定或复查。附录B血清学检查(参照件)B1血清学检查有助于流行病学追溯诊断，检查抗体成分为抗菌抗体。为进行血清学诊断，需要采用病人双份血清，在发病第1～3天采第一份血清，第15～20天采第二份血清。检查血清中抗菌抗体惯用凝集实验和杀弧菌实验，杀弧菌实验比凝集实验敏感。B2试管凝集实验：用生理盐水对倍持续稀释待检血清，每管含稀释血清0.5mL。将原则菌在营养琼脂上16～18h培养物用0.2％福尔马林生理盐水制成约含18亿菌/mL(相称于细菌原则比浊管浓度)悬液，每稀释血清管加0.5mL；另将菌悬液加入0.5mL生理盐水中作对照。摇匀，置37C3h观测初步成果，再放冰箱(4℃)或室温过夜，观测最后成果。生理盐水对照不浮现自然凝集，能使菌凝于管底成伞状，上清半透明者判为＋＋，以能使菌呈＋＋凝集血清最高稀释度判为血清凝集效价。第二份血清效价比第一份血清增长4倍或以上者有诊断意义。B3杀弧菌抗体检测：可采用改良微量法，检测程序如下：a.2，3，5－氯化三苯四氮唑溶液(TTC)配制：用无菌蒸馏水配制0.5％(W/V)溶液，加热溶解，置灭菌棕色瓶中，4℃保存备用。b.补体批示菌混悬液制备：选用原则01群及0139群霍乱弧菌为批示菌，分别持续在营养琼脂平板上分离2次，选用光滑型菌落2～3个，挑取小量接种于5mL营养肉汤中，37℃培养6h，取0.1mL转种于5mL营养肉汤，37℃培养2h，用分光光度计测定492nm吸光度(OD)值，调节OD值至0.1为原液。将原液作1∶50稀释后与1∶10补体等量混合，即为补体批示菌混悬液。c.待检血清稀释：于经洗涤解决、无水乙醇浸泡5min和紫外灯照射灭菌1h微量培养板或410孔聚苯乙烯塑料板用微量加液滴管每孔加入一滴(0.025mL)灭菌磷酸盐缓冲盐水PBS或生理盐水，再将待测灭活血清一滴(0.025mL)加入每排第1孔，自第1孔开始作持续对倍稀释至第10孔。d.加补体批示菌悬液：于每孔稀释血清加入补体批示菌悬液一滴，加盖，在微型振荡器上振荡1～2min，置37℃水浴箱孵育30min。e.加TTC营养肉汤：每孔加入含0.01％TTC营养肉汤0.15mL(2大滴)，混匀后，继续置37℃水浴箱孵育4h。f.观测成果：以孔内无颜色变化血清最高稀释度为被检测标本杀弧菌抗体滴度，第二份血清效价比第一份血清升高8倍或以上者有诊断意义。附录C01群霍乱弧菌鉴定和分型(参照件)C1血清分型用普通琼脂或碱性琼脂培养基上菌苔进行血清分型。分型使用小川型及稻叶型单价血清作玻片凝集反映。C1.1在小川型单价血清凝集，在稻叶型单价血清不凝集者为小川型。C1.2在小川型单价血清不凝集，在稻叶型单价血清凝集者为稻叶型。C1.3在小川型、稻叶型单价血清均呈明显凝集者为彦岛型。C2试管凝集实验用生理盐水自1∶20开始对倍持续稀释01群霍乱多价血清，每管含稀释血清0.5mL。将被检菌在营养琼脂16～18h培养物用0.2％福尔马林生理盐水制成每毫升约含18亿菌体(相称于细菌原则比浊管浓度)悬液，每稀释血清管加入0.5mL；另将菌悬液0.5mL加入0.5mL生理盐水中作对照。摇匀，置37℃3h观测初步成果。再放4℃或室温过夜，观测最后成果。生理盐水对照不浮现自然凝集，能使实验菌浮现＋＋凝集血清最高稀释倍数为凝集滴度，凝集滴度达到或超过血清原效价一半即可拟定为01群霍乱弧菌。对一次流行首批病例菌株和玻片凝集反映不典型菌株应做本实验。C3古典型和埃尔托型鉴别C3.1按表C1所列实验鉴别01群霍乱弧菌两个生物型。表C101群霍乱弧菌两个生物型鉴别注：括弧内为少数菌株成果。C3.2实验办法：a.第Ⅳ组霍乱噬菌体裂解实验：本项实验与噬菌体分型在同一平皿上进行，办法见C4.1.2。b.多粘菌素B敏感实验：将1.5％普通琼脂加热溶化，待冷却至50℃左右，按每毫升培养基加入50单位多粘菌素B，摇匀后倾注平皿，凝固后备用。在平皿背面用玻璃笔划出若干方格。将被检菌2～3h肉汤培养物一接种环点在培养基表面，待干后放37℃培养过夜，观测成果。被检菌不生长或生长局限性10个菌落为敏感，记录为＋号。c.鸡血球凝集实验：在清洁平皿内划出方格，用直径4mm接种环取一滴生理盐水滴在每个方格内，取被检菌18h琼脂培养物少量，在生理盐水中制成浓厚菌悬液。再用接种环各加一滴经洗涤三次2.5％鸡血球生理盐水悬液，充分摇匀，肉眼观测成果。1min内浮现血球凝集者为阳性，血球呈均匀分散状态者为阴性。埃尔托型为阳性，古典型普通为阴性。d.V－P实验：将被检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水，37℃培养2～3天。然后取出1mL培养物加5％－萘酚乙醇溶液0.6mL，振荡5s，加入40％氢氧化钾液0.2mL，再振荡5s，去掉棉塞置室温。在1h内浮现红色反映者为阳性。阴性者在试剂加入后逐渐浮现浅褐色。古典型为阴性，而埃尔托型多为阳性。e.溶血实验：取被检菌24h普通肉汤(中试管装8～10mL)培养物1mL，1％绵羊红血球(生理盐水洗3次，最后1次离心速度为r/min，离心10min)1mL，混匀后放37℃，2h观测初步成果，再放4℃冰箱过夜观测最后成果。