DB22T 1826-2013 饲料中非诺特罗的测定 气相色谱-质谱法

ICS65.040C53备案号：37945-2013DB22吉林省地方标准DB22/T1826—2013饲料中非诺特罗的测定气相色谱-质谱法DeterminationofFenoterolinfeed-GCMS2013-05-15发布2013-09-01实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1826—2013I前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。本标准主要起草人：李宁、邴炜、华蕾、刘斌、石金娥等。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1826—20131饲料中非诺特罗的测定气相色谱-质谱法1范围本标准规定了预混料、配合料和浓缩料中非诺特罗含量的气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于预混料、配合料和浓缩料中非诺特罗的测定。本方法中非诺特罗的检出限为2.0μg/kg，定量限为10.0μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理样品用乙酸钠缓冲溶液提取后,依次经液-液萃取、阳离子交换柱净化，再经双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷(BSTFA-TMCS)衍生，气相色谱-质谱检测，内标法定量。4试剂与材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。4.1甲醇（CH3OH，CAS：67-56-1）：色谱纯。4.2乙酸乙酯（C2H5OH，CAS：141-78-6）：色谱纯。4.3异丙醇（C4H9OH，CAS：67-63-0）：色谱纯。4.4盐酸（HCL，CAS：7647-01-0）：优级纯。4.5氨水（NH3OH，CAS：1336-21-6）。4.6无水氯化钠（NaCL，CAS：7647-14-5）。4.7乙酸钠（C2H5Na，CAS：127-09-3）：优级纯。4.8冰乙酸（CH3COOH，CAS：64-19-7）：优级纯。4.9甲苯（C6H5CH3，CAS：108-88-3）：优级纯。4.10氦气，纯度99.999%以上。4.11衍生试剂：双（三甲基硅烷基）氟乙酰胺（BSTFA）-三甲基氯硅烷（TMCS）=99：1，-20℃以下冷冻保存。4.122mol/L盐酸溶液：取盐酸（4.4）18mL，用水定容至100mL，摇匀。4.1330mmol/L盐酸：用水稀释适量盐酸（4.4）并定容。4.140.2mol/L乙酸钠缓冲溶液：按实际使用量称取适量乙酸钠（4.7）溶于水中后定容。4.15乙酸乙酯-异丙醇溶液：乙酸乙酯（4.2）：异丙醇（4.3）=5：1。4.165%氨化甲醇：准确量取5mL氨水（4.5），用甲醇（4.1）定容至100mL。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1826—201324.17非诺特罗标准储备液：准确称取50mg非诺特罗标准物质于50mL棕色容量瓶，用甲醇（4.1）溶解并定容，该溶液浓度为1g/L。置于4℃冰箱中保存，有效期6个月。4.18非诺特罗标准使用液：将标准储备液用甲醇（4.1）配制成0.5mg/L的非诺特罗标准使用液，现用现配。4.19克伦特罗内标标准储备液：准确称取50mg克伦特罗标准物质于50mL棕色容量瓶，用甲醇（4.1）溶解并定容，该溶液浓度为1g/L。置于4℃冰箱中保存，有效期6个月。4.20克伦特罗内标标准使用液：将标准储备液用甲醇（4.1）配制成2.0mg/L的标准使用液，现用现配。5仪器和设备5.1单四极杆气相色谱-质谱联用仪，配EI源。5.2具塞聚四氟乙烯离心管：50mL。5.3涡旋混合器。5.4恒温箱，控温精度±2℃。5.5离心机。5.6电子天平，感量0.0001g。5.7氮吹仪。5.8超声波清洗仪。5.9250mL鸡心瓶。5.10SCX小柱：SepPak小柱，500mg，3mL。6采样选取有代表性饲料样品至少500g，四分法缩减到100g，粉碎，全部通过0.42mm试验筛，混匀，装入密闭容器中，避光保存，备用。7分析步骤7.1提取称取5g（精确至0.01g）混匀样品于50mL具塞聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸钠缓冲溶液（4.14）20mL，用2mol/L盐酸（4.4）调节pH值至5.2，添加50μL2.0mg/L克伦特罗内标，涡旋3min，超声30min，于离心机5000r/min离心5min。上清液移入另一50mL具塞聚四氟乙烯离心管中，在残留样中分2次加入10mL乙酸钠缓冲溶液（4.14），重复以上提取过程，合并上清液于同一50mL具塞聚四氟乙烯离心管中，加入5g氯化钠（4.6）和15mL乙酸乙酯（4.2）溶液，涡旋5min，5000r/min离心10min，分层后将上层有机溶剂层移入250mL鸡心瓶中，在下层水相中分2次加入10mL乙酸乙酯-异丙醇（4.15），涡旋振荡3min，5000r/min离心5min，分层后将上层有机溶剂合并于上述250mL鸡心瓶中，45℃旋转蒸干，用3mL乙酸钠缓冲溶液（4.14）溶解残渣，备用。7.2净化SCX阳离子交换柱依次用甲醇（4.1）、超纯水、30mmol/L的盐酸（4.13）各3mL活化。将乙酸钠提取液（7.1）移入固相萃取柱中，用1mL乙酸钠缓冲溶液（4.14）淋冼鸡心瓶，洗液过柱，弃去流出本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1826—20133液，依次用6mL超纯水、6mL甲醇（4.1）淋洗小柱，弃去流出液，最后用6mL氨化甲醇（4.16）洗脱小柱，收集洗脱液于10mL衍生管中。7.3衍生在50℃下用氮吹仪吹干洗脱液（7.2），迅速加入100μLBSTFA-TMCS（4.11）衍生试剂，盖紧螺盖，涡旋1min，于70℃±2℃恒温箱中衍生40min，取出后冷却至室温，50℃下用氮吹仪吹干，以甲苯（4.9）定容至0.5mL，进行气相色谱-质谱测定。同时用非诺特罗标准使用液做系列同步衍生。7.4测定7.4.1仪器条件7.4.1.1色谱柱：用于气相色谱-质谱仪的5%聚硅氧烷毛细柱（30m×0.25mm×0.25μm）或性能相当者；7.4.1.2载气：氦气（4.10）；7.4.1.3流速：1.0mL/min，恒流模式；7.4.1.4进样口温度：230℃；7.4.1.5进样量：2μL，不分流；7.4.1.6升温程序：80℃（保持1min），以30℃/min升至200℃（保持5min），再以15℃/min升至280℃（保持5min）；7.4.1.7离子源（EI）温度：230℃；7.4.1.8离子源（EI）电子轰击能量：70eV；7.4.1.9接口温度：280℃；7.4.1.10溶剂延迟：10min；7.4.1.11四极杆温度：170℃；7.4.1.12质量扫描范围：50～400u；7.4.1.13选择离子监测方式（SIM）；7.4.1.14监测离子（m/z）：克伦特罗86*、212、258；非诺特罗73*、236、356；其中带*离子为定量离子。7.4.2气相色谱-质谱测定7.4.2.1定性测定在相同试验条件下，试样中待测物与同时检测的标准物质的保留时间之差在±2s之内，并且所选择的离子相对丰度比符合表1要求，可判定为试样中存在该药物残留。表1试样离子丰度比与标准物质离子丰度比的允许偏差范围占基峰相对丰度（%）最大允许偏差（%）＞50±10＞20～50±15＞10～20±20≤10±507.4.2.2定量测定本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1826—20134以峰面积按内标法进行单点或多点校准定量，标准工作液和试样液中非诺特罗响应值均应在仪器检测线性范围内。标准物质总离子流图参见附录A；标准物质质谱图参见附录B。8结果计算试样中非诺特罗的含量按式（1）计算：10001000×××=mVAX....................................(1)式中：X——试样中非诺特罗的含量，单位毫克每千克（mg/kg）；A——经计算得试液中非诺特罗的含量，单位毫克每升（mg/L）；V——样品最终定容体积，单位毫升（mL）；m——样品取样质量，单位克（g）；1000——单位换算系数。计算结果保留小数点后两位有效数字。9重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1826—20135AA附录A（资料性附录）样品中非诺特罗标准物质总离子流图1——克伦特罗2——非诺特罗图A.1样品中非诺特罗标准物质总离子流图本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1826—20136BB附录B（资料性附录）样品中非诺特罗衍生物的质谱图图B.1样品中非诺特罗衍生物的质谱图_________________________________本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印