DB32T 905-2006 兽药散剂中氯霉素的测定 高效液相色谱法

ICS65.020.01B40备案号：18650-2006江苏省地方标准DB32DB32/T905—2006兽药散剂中氯霉素的测定高效液相色谱法DeterminationofchloramphenicolinpowderofChinesetraditionalveterinary——HighPerformanceLiquidChromatography2006-03-25发布2006-05-25实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T905—2006前言为有效监控兽药散剂中违禁添加氯霉素，维护动物产品的安全，特制定本标准。本标准按GB/T1.1－2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T1.2－2002《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要求内容的确定方法》编制。本标准附录A为资料性附录。本标准由江苏省农林厅提出。本标准由江苏省兽药监察所起草。本标准主要起草人：蒋天梅、朱永林、时勇、毕昊容、邵德佳、颜京平、陆桂萍、吴琼、冯群科。DB32/T905—20061兽药散剂中氯霉素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了兽药散剂中氯霉素的测定高效液相色谱法的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样分析、允许偏差。本标准适用于用高效液相色谱法测定兽药散剂中的氯霉素，最低检出限为0.4μg/g。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中氯霉素经乙酸乙酯提取，加碳酸钠去杂质，提取液加正己烷减弱极性后，用盐酸溶液萃取，萃取液经阳离子交换柱（SCX）净化后氮气吹干，流动相溶解残渣，过0.45μm滤膜供高效液相色谱仪分析，外标法计算含量。4试剂和材料除特殊说明外，所用试剂均为分析纯；水应符合GB/T6682-1992中一级水规定。4.1甲醇：色谱纯4.2正己烷4.3乙酸乙酯4.4盐酸4.5碳酸钠4.6阳离子交换小柱（SCX）：500mg，3mL。4.7氯霉素标准品：纯度应不小于99.0％。4.8氯霉素标准贮备液：准确称取已知纯度的氯霉素标准品25mg（精确至0.0001g），置于250mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，该溶液中氯霉素浓度为100μg/mL,置4℃保存备用。4.9氯霉素标准工作液：准确移取标准贮备液1mL于100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，该溶液中氯霉素浓度为1μg/mL，置4℃保存备用。5仪器和设备高效液相色谱仪（紫外检测器）、离心机、振荡器、微量移液枪（单道1mL～5mL可调、10μL～100μL可调）、超纯水处理器、固相萃取装置。6试样分析6.1试样的提取DB32/T905—20062称取（1±0.05）g供试试料，置于50mL离心管中，加乙酸乙酯10mL，再加10％碳酸钠溶液10mL，涡旋振荡2min，室温8000r/min离心5min。取出上层液体5mL，加正己烷20mL、0.1mol/L盐酸溶液10mL，涡旋振荡2min，室温8000r/min离心5min，取下层提取液备用。6.2试样的净化取SCX小柱，依次用甲醇5mL、水5mL、30mmol/L盐酸溶液5mL润洗，将上述提取液全部过柱，用水5mL淋洗小柱，挤干。用50％甲醇水溶液5mL洗脱，洗脱液于50℃水浴中氮气吹干。残渣加流动相2mL溶解，过0.45μm滤膜备用。6.3色谱条件6.3.1色谱柱：C18（粒度为5μm），150mm×4.6mm（i·d）6.3.2流动相：甲醇＋水（20∶80）6.3.3流速：1.0mL/min6.3.4进样量：20μL6.3.5检测波长：278nm6.4测定取氯霉素标准工作液及试样溶液，注入色谱柱中，以色谱峰面积积峰值计算，外标法定量。色谱图见附录A。6.5结果计算试样中氯霉素的含量按式（1）计算。Wi＝Pi×V×Ci×VstPsti×m×Vi…………………………………………(1)式中：Wi——试样中氯霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）;Pi——试样溶液峰面积值;V——样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）;ci——标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）;Vst——标准溶液进样体积，单位为微升（μL);Psti——标准溶液峰面积算术平均值;m——试样质量，单位为克（g）;Vi——试样溶液进样体积，单位为微升（μL)。平行测定结果用算术平均值表示，保留至小数点后一位。6允许偏差同一分析者对同一试样两次平行测定结果的相对偏差不大于10％。DB32/T905—20063附录A（资料性附录）氯霉素标样色谱图氯霉素标样色谱图见图A.1。图A.1氯霉素标样色谱图