洁净环境

2017年QCDISO14644-1（洁净度分级）ISO14644-2（洁净室及相关受控环境的国际标准）ISO14698（生物污染控制）欧盟GMP附录1无菌药品FDAcGMP规定及对比美国药典USP1116（无菌工艺环境的微生物控制和监测）其中：ISOClass55um对应的检测限值取消了对洁净级别的要求。但是可以进行“M”描述。所以此项目对洁净厂房检测来说是可以根据将来检查的趋势进行调整的。因为目前的粒子计数器都支持检测0.3-10.0um的粒子，我们只需要根据法规变化进行调整就好。取消29在新版本14644-1中关于悬浮粒子采样点的数量取消掉了老版本“面积开根”的方法，采用直接根据房间的面积进行图表查询法（如下）14698描述了洁净技术使用时评估与控制生物污染的系统的原则和方法，使危险区域内的生物污染得以被反复控制以及选择适当的控制方法。在14698-1的附录中中详细介绍了生物污染的测量方法的原则、气悬浮生物测量方法的指导、表面生物污染的测量方法指导、洗衣验证方法的指导等内容。在一般要求中介绍了生物污染的分析与测量介绍了可构成危害的方面有：表面、空气、液体、织物等，应采用适当的检测方法进行采样，应建立文件化的采样计划，介绍采样计划的设计、实施、培养基、采样和培养计数。采样计划设计：为了保护个人、环境、工艺和产品，采样计划要考虑危险区域的洁净度等级和正在进行活动要求的生物污染控制程度。比如：采样区域的功能、所处位置采样数量（有限或很少的采样量可能不足以提供有代表性的数据，但有时增加采样次数可以弥补不足）采样方法、采样量/面积影响培养结果特殊情况的有关因素：危险区的操作、人员和设备影响（压缩空气、房间空气、人员未保护、个人打扮、防护服、地面、门、椅子、工作台等等）培养和计数和鉴别：根据采样环境的条件、培养基的特征和微生物方法应选择适宜的培养基在适当的培养温度和时间。（涉及到厌氧、耐热的细菌可能需要特定的大气条件或延长培养时间一般细菌5天，真菌7天。对于中温菌延长3天是可以的）建议采用活体单位（VU），或者菌落计数（CFU）计数。对采样获得的微生物进行适当的特征化，特征化取决于采样区的临界性或者调查是否能够保证深入鉴别。实施对相关微生物的鉴别可采用规定的微生物检测方法至少做到属类鉴别。（鉴别分离出的活体有助于特定危险区域控制、清洁消毒效果验证。鉴别收集的信息可用于调查污染源，尤其是超行动限等。）微生物统计：可以采用有效的统计方法对所选系统进行质量控制。统计方法主要是外推法，把样品推广到采样危险区的微生物群体。趋势分析和控制：统计单一的样品数据通常意义不大，微生物检测技术可能有严重的缺陷，会导致很高的微生物数据变化用图表表示一定时间内手机的数据会有助于区分采样变化与实际的趋势。生物污染数据的说明和评估：已测的样品中没有微生物，不一定表明在调查的生物污染事件中没有微生物的污染。可能是采样时区域内恰巧不存在活的微生物粒子。反言之，活粒子的存在可能具有积极的意义，即能反映出微生物是从一个非采样区域进入了出“微生物污染”的危险区。制定出适当的受控的、定期检验的微生物监测计划可以降低不确定的程度。在评估中也应该反映出这种不确定的程度。确认：为了确定监测的效率和分析方法的效率，应该定期的以文件形式对结果进行确认。可以根据检测数据来计算空气中、表面、织物和液体的平均活粒子计数（和适当的标准偏差）的方法来检验危险区的目标限值、警报限值和行动限值。原则：无菌药品的生产，必须符合一些特殊的要求，以防止微生物、微粒和热源的污染。这很大程度上要依赖工作人员的技术水平、培训和工作态度。在这方面质量保证显得特别重要，这种类型的生产，必须严格按照完善的和经过验证的生产方法和工作程序。仅靠产品的最终灭菌和某一方面的质量控制是不允许的。规范中没有详述测定空气、表面等微生物和微粒洁净度的详细方法，请参阅EN/ISO中相关标准。洁净级别静态（atrest）动态(dynamic或inoperation)0.5um5.0um0.5um5.0umA352020352020B3520293520002900C3520002900352000029000D352000029000不作规定不作规定悬浮粒子标准（GMP2010、WHOGMP相同）Notes：尘埃粒子检查是用不连续尘埃粒子记数器测量一定量空气中等于或大于一定粒子大小的尘埃粒子的浓度。在A区必须有持续监控的装置，来检测该区域内尘埃粒子的浓度，建议在A区周围的B区也安装这样的装置。在A级和B级区常规的检查取样量，应不少于1m3，在C级区的取样量最好也达到该要求。上表中的“静态”下的微粒情况，必须在操作完成后，“自净”运行15-20分钟后达到。当产品和开口容器接触环境时，在紧接产品的的周围区域，尘埃情况必须保持在A级“动态”标准。灌装时，在灌装点由于产品本身产生的微粒和液滴，有时达不到微粒标准是可以接受的。对尘埃粒子和微生物的监控结果，要设置适当的警戒限度和措施限度。当超出这些限度时，操作规程应说明需要采取的措施。洁净级别浮游菌cfu/m3沉降菌（90mm)cfu/4小时表面微生物接触碟（55mm)cfu/碟5指手套cfu/手套A1111B10555C1005025不作规定D20010050不作规定注：(1)表中各数值均为平均值。(2)单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。欧盟GMP生产过程中微生物的监控标准（GMP2010、WHOGMP相同）对无菌操作区，必须经常使用沉降皿、空气定量法和表面取样（棉签或接触皿）等方法进行监控。生产过程中所用的取样方法，必须不影响洁净区的保护，当审核最终产品放行的批记录时，也要考虑环境监控的结果。在关键操作后，要对人员和设施的表面进行监控。在非生产状态下，也要进行微生物的监控，包括在系统的验证、清洁或消毒后。欧盟GMP附录1无菌药品中相关规定目前官方网站相关资料还执行上述内容，其中关于悬浮粒子的标准目前没有文件进行相关的更新。2016年3月国家食品药品监督管理总局食品药品审核查验中心对企业咨询“2010版GMP颁布进附录1对洁净度分级采用14644进行，14644已从14644-1999升级为14644-2015，2010版GMP相应的洁净度分级是否应执行14644-2015？”时，回复“2010版GMP规定的洁净度分级是参照ISO14644-1999制定，企业生产中还是以执行现行的GMP为主。”2016年9月有企业再次咨询类似问题时，国家食品药品监督管理总局食品药品审核查验中心回复为“企业在进行测试时应使用现行的ISO标准进行测试，基于现行ISO标准进行变更控制，评估变更影响，制定并落实变更计划。”“Werecommendthatmeasurementstoconfirmaircleanlinessincriticalareasbetakenatsiteswherethereismostpotentialrisktotheexposedsterilizedproduct,containers,andclosures.”建议在暴露的灭菌产品，容器和封闭物最有潜在风险的场所采取监测，以确定关键区域的空气清洁度。Evaluatingthequalityofairandsurfacesinthecleanroomenvironmentshouldstartwithawell-definedwrittenprogramandscientificallysoundmethods.评估洁净室环境中空气和表面的质量应从明确的书面程序和科学合理的方法开始。Itisimportantthatlocationsposingthemostmicrobiologicalrisktotheproductbeakeypartoftheprogram.重要的是，对产品构成最微生物风险的位置是该计划的关键部分。AllenvironmentalmonitoringlocationsshouldbedescribedinSOPswithsufficientdetailtoallowforreproduciblesamplingofagivenlocationsurveyed.WrittenSOPsshouldalsoaddresselementssuchas(1)frequencyofsampling,(2)whenthesamplesaretaken(i.e.,duringorattheconclusionofoperations),(3)durationofsampling,(4)samplesize(e.g.,surfacearea,airvolume),(5)specificsamplingequipmentandtechniques,(6)alertandactionlevels,and(7)appropriateresponsetodeviationsfromalertoractionlevels.所有环境监测点应在具有足够细节的SOP中进行描述，以便对被测定的给定位置进行可重复的采样。书面SOP也应该解决诸如（1）采样频率，（2）采样时（即在操作期间或结束时），（3）采样持续时间，（4）样本量（例如，表面积，空气量），（5）具体抽样设备和技术，（6）警戒和行动层面，以及（7）适应对偏离警戒或行动层面的反应。CriticalArea-Class100(ISO5)关键区域-100级（ISO5）：当无菌药品及包装容器要暴露于生产环境的生产区域。SupportingCleanAreas辅助区域：有不同的分类和功能。准备、保存和运输非无菌成分等等。与欧盟、中国GMP对比中国GMP与EU和FDA对监测相似的要求：监测点的选择基于风险原则关键区域连续监测（A/B）支持区域常规监测（C/D）微生物和粒子都要求动态监测USP1116给出了指导意见和洁净室、限制进入隔离系统（RABS)和隔离器等无菌工艺的微生物评价的监控参数，其他不要求在无菌条件下生产的无菌产品的生产环境的污染控制要求可以根据ISO环境分类执行。非无菌产品的生产环境要有不同的微生物控制等级。在有人进行操作的任何环境中，微生物污染在一定程度上是不可避免的。如果有人员存在的话，即使最谨慎的洁净室环境设计和操作也不能避免微生物的掉落。因此在所有无菌生产工艺操作过程的所有场所达到零污染在技术上是不可能的并且也是不现实的。去证明一个无菌生产工艺的环境和在这个环境中产品接触的表面是已消毒的是没有意义的。应当根据风险评估确定监测点。虽然生产者会经常对环境监测结果进行回顾以确保生产操作在受控的验证状态，但是监测结果不能证明无菌或非无菌。因为监测的局限性，所以生产者不能直接依据监测、统计或定期的无菌工艺模拟来确定灭菌的安全水平。鉴于微生物取样工具和方法的多样性，没有充分的理由证明获得这些数值就能证明微生物的到了控制，或短暂的超出这些数值，微生物就失去了控制。在一个有意义的周期内，必须进行和生产环境有关的风险评估。在任何情况下，均应在回顾实际生产调查的基础上确定污染回收率指数。无菌生产工艺环境的洁净室级别：ISO14644-1规定了不同空气质量级别的洁净环境允许的总粒子数。可以据此来考虑设计参数和建立洁净环境。在无菌生产工艺中，一般会用到ISO14644-1中的5-8级。环境控制的微生物评价的重要性：从技术上来讲，洁净室中的微生物学监测是一个半量化的试验，因为由于取样器具的局限性，对环境进行真正的量化评价是不可能的。计数方法的缺乏和被有效监测的采样体积的限制意味着从环境监测中得到无菌保证的定量信息是不充分的。即使没有活的微生物存