GB 29685-2013 食品安全国家标准 动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素多残留的测定

ICSG中华人民共和国国家标准GB29685—2013食品安全国家标准动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素多残留的测定气相色谱—质谱法DeterminationofLincomycin,ClindamycinandSpectinomycinresiduesinanimalderivedfoodbyGasChromatographyMassSpectrometricmethod（电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准）2013-09-16发布2014-01-01实施中华人民共和国农业部中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布I目次目次.........................................................................I前言........................................................................II动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素多残留的测定气相色谱-质谱法...........１1.范围.........................................................................１2规范性引用文件..............................................................１3原理........................................................................１4试剂和材料...................................................................１5仪器和设备..................................................................２6试料的制备与保存............................................................２6.1试料的制备.................................................................２6.2试料的保存.................................................................３7测定步骤....................................................................３7.1标准曲线的制备.............................................................３7.2提取.......................................................................３7.3净化.......................................................................３7.4测定.......................................................................４7.5空白实验...................................................................５8结果计算与表述..............................................................５9检测方法灵敏度、准确度、精密度..............................................５9.1灵敏度.....................................................................５9.2准确度.....................................................................５9.3精密度.....................................................................６附录A........................................................................７II前言本标准的附录A为资料性附录。本标准系国内首次发布的国家标准。１动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素多残留的测定气相色谱—质谱法1.范围本标准规定了动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于猪、牛和鸡的肌肉和肾脏以及牛奶和鸡蛋中林可霉素、克林霉素和大观霉素单个或多个药物残留量的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中残留的林可霉素、克林霉素和大观霉素，用磷酸缓冲液提取，3％三氯乙酸沉淀蛋白，离子对原理反相SPE柱净化，N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺衍生，气相色谱-质谱法测定，外标法定量。4试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1盐酸林可霉素标准品：含量≥99％；盐酸克林霉素和盐酸大观霉素标准品：含量≥95％。4.2N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺4.3乙酸：优级纯。4.4甲醇：色谱纯。4.5乙睛：色谱纯。4.6正己烷：色谱纯。4.7磷酸二氢钾：优级纯。4.8磷酸：优级纯。２4.9氢氧化钾：优级纯。4.10三氯乙酸：优级纯。4.11十二烷基磺酸钠：色谱纯。4.12HLB固相萃取柱：60mg/3mL，或相当者。4.13提取液：取磷酸二氢钾1.36g，用水溶解并稀释至1000mL，用磷酸调节pH至4.0。4.143％三氯乙酸溶液：取三氯乙酸3.0g，用水溶解并稀释至100mL。4.152mol/L氢氧化钾溶液：取氢氧化钾11.6g，用水溶解并稀释至100mL。4.16十二烷基磺酸钠溶液：取十二烷基磺酸钠2.78g，用水溶解并稀释至50mL。4.17十二烷基磺酸钠缓冲液：取十二烷基磺酸钠2.78g，用水溶解，加乙酸1mL，用水稀释至500mL。4.181mg/mL林可霉素、克林霉素和大观霉素标准贮备液：精密称取林可霉素、克林霉素和大观霉素标准品各10mg，分别于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1mg/mL的林可霉素、克林霉素和大观霉素标准贮备液。2～8℃避光保存，有效期6个月。4.19100µg/mL标准工作液：精密量取1mg/mL林可霉素、克林霉素和大观霉素标准贮备液各1.0mL，分别于10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为100µg/mL的林可霉素、克林霉素和大观霉素标准工作液。2～8℃避光保存，有效期1周。5仪器和设备5.1气相色谱-质谱联用仪：配EI源。5.2分析天平：感量0.00001g。5.3天平：感量0.01g。5.4冷冻高速离心机5.5电热恒温水浴锅5.6旋涡混合器5.7均质机5.8聚四氟乙烯离心管：50mL。6试料的制备与保存6.1试料的制备6.1.1猪、牛和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。——取均质后的供试样品，作为供试试料。——取均质后的空白样品，作为空白试料。——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.1.2牛奶和鸡蛋３取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶和鸡蛋，混合，并使均质。——取均质后的供试样品，作为供试试料。——取均质后的空白样品，作为空白试料。——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2试料的保存组织试料-20℃以下保存。鸡蛋和牛奶试料2～8℃以下保存。7测定步骤7.1基质匹配标准曲线的制备分别精密量取100µg/mL林可霉素、克林霉素和大观霉素标准工作液适量，用甲醇稀释，配制成浓度为50、100、200、400、800、1600和3200μg/L的系列混合标准溶液，各取1.0mL，分别溶解经提取、净化及吹干的空白试料残余物，充分混匀，室温吹干，加N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺500μL和乙腈100μL，涡旋混合1min，密封，于75℃恒温箱衍生反应1h，于室温氮气吹干，加正己烷0.5mL溶解残余物，涡旋混匀，供气相色谱-质谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。7.2提取7.2.1肌肉和肾脏组织称取试料（5±0.05）g，于50mL聚四氟乙烯离心管中，加提取液10mL，振荡5min，5000r/min离心10min，取上清液于另一离心管中，残渣中加提取液10mL，重复提取一次，合并两次上清液，加3％三氯乙酸溶液5mL，混匀，8000r/min离心10min，取上清液，用2mol/L氢氧化钾溶液调pH至5.8±0.2，加十二烷基磺酸钠溶液2mL，漩涡混匀，静置15min，备用。7.2.2牛奶和鸡蛋组织称取试料（5±0.05）g，于50mL聚四氟乙烯离心管中，加提取液10mL，振荡5min，5000r/min离心10min，取上清液于另一离心管中，残渣中加提取液10mL，重复提取一次，合并两次上清液，加正己烷5mL，混匀，5000r/min离心15min，取下层液，用2mol/L氢氧化钾溶液调pH至5.8±0.2，加十二烷基磺酸钠溶液2mL，漩涡混匀，静置15min，备用。7.3净化HLB柱依次用甲醇3mL、水3mL和十二烷基磺酸钠缓冲液3mL活化，取备用液过柱，用水淋洗两次，每次3mL，用甲醇4mL洗脱，收集洗脱液，于40℃水浴氮气吹至近干，室温吹干，加N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺500μL和乙腈100μL，涡旋混合1min，密封，于75℃恒温箱衍生反４应1h，室温氮气吹干，用正己烷0.5mL溶解残余物，涡旋混匀，供气相色谱-质谱测定。7.4测定7.4.1色谱条件色谱柱：毛细管色谱柱Rtx-5（5%苯基甲基聚硅氧烷），（30m×0.25mm），或相当者；进样口温度：280℃；进样方式：不分流；进样体积：1μL；模式：恒流；载气：氦气（99.999％）；柱流速：1mL/min；柱温升温程序：表1柱温升温程序起始温度℃终止温度℃升温速率℃/min保持时间min总时间min150150150300—202.0102.019.57.4.2质谱条件离子源温度：200℃接口温度：280℃质谱采集（SIM）：林可霉素和克林霉素扫描离子：126（定量离子），127，73大观霉素扫描离子：145（定量离子），171，187，2017.4.3测定法7.4.3.1定性测定通过样品色谱图的保留时间与标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准品各色谱峰的特征离子相对照定性。样品与标准品的保留时间的相对偏差不大于5％；样品特征离子的相对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度50%20%至50%10%至20%≤10%允许的相对偏差±10%±15%±20%±50%将供试试样和标准溶液的定量离子面积之比作单点校正定量。7.4.3.2定量测定取试样溶液和标准溶液，按外标法，以峰面积定量，标准溶液及试样