GB 29697-2013 食品安全国家标准 动物性食品中地西泮和安眠酮多残留的测定 气相色谱-质谱

ICSG中华人民共和国国家标准GB29697—2013食品安全国家标准动物性食品中地西泮和安眠酮多残留的测定气相色谱-质谱法DeterminationofDiazepamandMethaqualoneresiduesinanimalderivedfoodbyGasChromatography-MassSpectrometricmethod（电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准）2013-09-16发布2014-01-01实施中华人民共和国农业部中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布I目次目次.........................................................................I前言........................................................................II动物性食品中地西泮和安眠酮残留量的测定气相色谱-质谱法.........................１1范围........................................................................１2规范性引用文件..............................................................１3原理........................................................................１4试剂和材料..................................................................１5仪器和设备..................................................................２6试料的制备与保存............................................................２6.1试料的制备.................................................................２6.2样品的保存.................................................................３7测定步骤...................................................................３7.1提取......................................................................３7.2净化......................................................................３7.3标准曲线的制备............................................................３7.4测定......................................................................３7.5空白试验..................................................................４8结果计算和表述.............................................................４9检测方法灵敏度、准确度和精密度.............................................５9.1灵敏度.....................................................................５9.2准确度.....................................................................５9.3精密度.....................................................................５附录A.........................................................................６II前言本标准的附录A为资料性附录。本标准系国内首次发布的国家标准。１动物性食品中地西泮和安眠酮多残留的测定气相色谱-质谱法1范围本标准规定了动物性食品中地西泮和安眠酮残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于猪的肌肉组织中地西泮和安眠酮残留量的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法3原理试料中残留的地西泮和安眠酮，用乙腈提取，正己烷除脂，C18柱净化，气相色谱-质谱测定，外标法定量。4试剂和材料以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1地西泮、安眠酮对照品：含量≥99.5%。4.2乙腈：色谱纯。4.3正己烷：色谱纯。4.4甲醇：色谱纯。4.5甲苯：色谱纯。4.6C18固相萃取柱：500mg/3mL，或相当者。4.750%甲醇水溶液：取甲醇50mL，用水溶解并稀释至100mL。4.870%甲醇水溶液：取甲醇70mL，用水溶解并稀释至100mL。２4.9200µg/mL地西泮和安眠酮标准贮备液：精密称取地西泮和安眠酮标准品各10mg，分别于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为200µg/mL地西泮和安眠酮标准贮备液。-20℃以下保存，有效期6个月。4.1050µg/mL混合标准贮备液：精密量取200µg/mL地西泮标准贮备液和200µg/mL安眠酮标准贮备液各25mL，于100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为50µg/mL混合标准贮备液。-20℃以下保存，有效期6个月。4.1110µg/mL混合标准贮备液：精密量取50µg/mL混合标准储备液10mL，于50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为10µg/mL的混合标准贮备液。-20℃以下保存，有效期6个月。5仪器和设备5.1气相色谱-质谱联用仪:配电子轰击离子源（EI）。5.2分析天平：感量为0.00001g。5.3天平：感量为0.01g。5.4涡旋振荡器5.5离心机5.6均质机5.7旋转蒸发仪5.8氮吹仪5.9固相萃取装置5.10超声波清洗器5.11鸡心瓶：50mL。6试料的制备与保存6.1试料的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。——取均质后的供试样品，作为供试试料。——取均质后的空白样品，作为空白试料。——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。３6.2样品的保存－20℃以下保存。7测定步骤7.1提取称取试料（2±0.02)g，于离心管中，加乙腈20mL，水浴超声5min。4000r/min离心10min，取上清液于鸡心瓶中。于50℃旋蒸至近5mL，加正己烷7.5mL，混匀静置，弃上层液。取下层液，于50℃氮气吹至1mL，加水4mL，混匀备用。7.2净化C18柱依次用甲醇3mL和水3mL活化，取备用液过柱，用50%甲醇水溶液3mL洗涤，用70%甲醇水溶液3mL洗脱，收集洗脱液，于50℃氮气吹干，用乙腈200μL溶解残余物，供气相色谱-质谱测定。7.3标准曲线的制备精密量取10µg/mL混合标准工作液适量，用甲醇稀释，配制成浓度为1、10、50、100、500和1000ng/mL的系列标准溶液，供气相色谱法-质谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。7.4测定7.4.1气相色谱参考条件气相色谱柱：DB-5MS柱（30m×0.25mm，粒径0.25µm），或相当者；载气：氦气；载气流速：0.9mL/min；进样口温度：290℃；柱温：初始温度150℃，保持1min，10℃/min程序升温至290℃，保持4min；进样量：1μL，恒流模式，不分流。7.4.2质谱参考条件电子轰击离子源(EI)；４电子轰击能：70ev；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；溶剂延迟：9min。检测模式：选择离子检测；定性离子：地西泮为m/z283，m/z256，m/z241，m/z221；安眠酮为m/z250，m/z235，m/z217，m/z91；定量离子：地西泮为m/z256；安眠酮为m/z235。7.4.3测定法7.4.3.1定性测定根据试样溶液中药物的含量，选择峰面积相近的标准工作液和试样溶液等体积参插进样。通过气相色谱保留时间与质谱选择离子共同定性。试样溶液中待测药物与标准物质的保留时间相对偏差不大于1%，而且其选择离子的相对丰度的差异不大于20%。地西泮和安眠酮的标准溶液、空白试样和空白添加试样选择离子色谱图见附录A。7.4.3.2定量测定分别取适量试样溶液和相应浓度的标准工作液，作单点校准或多点校准，以色谱峰面积定量。标准溶液及试样溶液中地西泮和安眠酮响应值均应在仪器检测的线性范围内，试样溶液进样过程中应参插标准工作液。7.5空白试验除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。8结果计算和表述供试试料中地西泮和安眠酮的残留量（μg/kg）：按下式计算式中：X—供试试料中相应的地西泮和安眠酮残留量，μg/kg；Ai—试样溶液中相应的地西泮和安眠酮色谱峰面积；X=Ai×Cs×5×VAs×m５As—标准溶液中相应的地西泮和安眠酮色谱峰面积；Cs—标准溶液中相应的地西泮和安眠酮浓度，ng/mL；V—试样溶液体积，mL；m－供试试料质量，g。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度和精密度9.1灵敏度本方法的检测限为0.5μg/kg，定量限为1μg/kg。9.2准确度本方法在1～50μg/kg添加浓度水平上的回收率为70％～120％。9.3精密度本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。６附录A（资料性附录）9.5010.0010.5011.0011.5012.0012.5013.0013.5040060080010001200140016001800Time--AbundanceTIC:2008102404.D图A地西泮和安眠酮标准溶液选择离子色谱图（10μg/L）9.5010.0010.5011.0011.5012.0012.5013.0013.5040060080010001200140016001800Time--AbundanceTIC:2008102408.D图B猪肌肉组织空白试样选择离子色谱图9.5010.0010.5011.0011.5012.0012.5013.0013.5040060080010001200140016001800Time--AbundanceTIC:2008102406.D图C猪肌肉组织空白添加地西泮、安眠酮试样选择离子色谱图（1μg/kg）ABC