BJY 201803 蒲黄药材及饮片中柠檬黄、酸性黄36和金胺O检查项补充检验方法

—1——附件3蒲黄药材及饮片中柠檬黄、酸性黄36和金胺O检查项补充检验方法（BJY201803）【检查】柠檬黄、酸性黄36和金胺O（1）取本品2g，精密称定，精密加入70%乙醇20ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，离心5分钟，取上清液，作为供试品溶液。另取柠檬黄对照试剂、酸性黄36对照试剂及金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中各含0.5mg的溶液，作为对照试剂溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，吸取上述供试品溶液10~20µl，对照试剂溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1:3:3:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应位置上，不得检出相同颜色的斑点；若检出相同颜色的斑点，或相同位置有干扰不能判断时，则采用下列高效液相色谱法验证。（2）高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，0.02mol/L的乙酸铵溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱：采用二极管阵列检测器，检测波长为428nm（柠檬黄）、422nm（酸性黄36）、436nm（金胺O）。理论板数按酸性黄36峰计算应不低于10000。——2—时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0～510905～610→3090→706～3030→9570→5对照试剂溶液的制备精密称取柠檬黄对照试剂、酸性黄36对照试剂及金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml各含25μg的混合溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备取【检查】（1）项下的供试品溶液，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照试剂溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在200~600nm波长范围内的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。备注：1.必要时，可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。建议采用乙腈-0.02mol/L醋酸铵流动相系统。2.因柠檬黄保留较弱，建议采用250mm规格色谱柱，DAD检测以吸收光谱在428nm附近是否出现最大吸收峰为主要判断依据。起草单位：云南省食品药品监督检验研究院—3——四川省食品药品检验检测院吉林省松原市食品药品检验所复核单位：广西壮族自治区食品药品检验所