SNT 2674-2010 进出口动物源性食品中那罗星残留量的测定 液相色谱-质谱 质谱法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２６７４—２０１０进出口动物源性食品中那罗星残留量的测定　液相色谱质谱／质谱法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狀犪狀犪狅犿狔犮犻狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛２０１０１１０１发布２０１１０５０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河南出入境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王素方、康庆贺、孙武勇、杨冀州、郭俊峰、张东飞、刘永、程开鹏、魏蔚、刘朝晖。Ⅰ犛犖／犜２６７４—２０１０进出口动物源性食品中那罗星残留量的测定　液相色谱质谱／质谱法１　范围本标准规定了动物源性食品中那罗星残留量测定的制样方法与液相色谱质谱／质谱定性定量测定方法。本标准适用于牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪、牛奶、猪肉、猪肝、猪肾、羊肉、羊肝、羊肾、鸡肉和鸭肉动物源性食品中那罗星残留量的测定和确证。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　方法提要试样中的那罗星残留用乙酸乙酯或乙腈、甲醇溶液提取，氮气吹干提取溶液，三羟甲基氨基甲烷水溶液溶解残渣，经正己烷液液萃取净化，弃去正己烷层，过微孔滤膜后，用液相色谱质谱／质谱仪检测和确证，外标法定量。４　试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。４．１　乙腈：高效液相色谱级。４．２　甲醇：高效液相色谱级。４．３　乙酸乙酯：高效液相色谱级。４．４　正己烷：高效液相色谱级。４．５　氯化钠。４．６　乙酸铵：液相色谱级，纯度大于等于９８％，２℃～８℃冷藏。４．７　三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ碱，英文名称：Ｔｒｉｚｍａｂａｓｅ，ＣＡＳ编号：７７８６１）：纯度大于等于９９％。４．８　１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液：准确称取适量乙酸铵（４．６）于小烧杯中，用水溶解后转移到１Ｌ容量瓶中，洗小烧杯三次，洗液转移到容量瓶中，用水定容至刻度，临用时现配。４．９　０．０１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ碱溶液：准确称取适量Ｔｒｉｓ碱（４．７）于小烧杯中，用水溶解后转移到１Ｌ容量瓶中，洗小烧杯三次，洗液转移到容量瓶中，定容至刻度，混匀后备用。４．１０　那罗星标准物质（英文名称：Ｎａｎａｆｒｏｃｉｎ，ＣＡＳ编号：５２９３４８３５，分子式：Ｃ１６Ｈ１４Ｏ６）：纯度大于９５％（ＨＰＬＣ）。４．１１　标准溶液：４．１１．１　标准储备溶液：准确称取按其纯度折算为１００％质量的那罗星（４．１０）１０ｍｇ（精确到０．１ｍｇ），１犛犖／犜２６７４—２０１０用Ｔｒｉｓ碱溶液（４．９）溶解并定容至１００ｍＬ棕色容量瓶中，得质量浓度为１００ｍｇ／Ｌ的标准储备溶液。此储备液于０℃～４℃避光保存，可使用３个月。４．１１．２　标准中间溶液：准确移取１ｍＬ标准储备溶液（４．１１．１），用Ｔｒｉｓ碱（４．９）稀释并定容至１００ｍＬ，该溶液浓度为１μｇ／ｍＬ，于０℃～４℃避光保存，可使用半个月。４．１１．３　空白样品提取液：采用空白样品，按照７．１进行提取和净化后得到的溶液。４．１１．４　基质标准工作溶液：根据需要用空白样品基质溶液，将标准中间溶液（４．１１．２）稀释至适当浓度，该溶液使用前配制。４．１２　氮气：纯度大于等于９９．９９９％。４．１３　微孔滤膜：０．２２μｍ，有机相型。５　仪器与设备５．１　液相色谱质谱／质谱仪：配电喷雾离子源（ＥＳＩ）。５．２　电子天平：感量０．１ｍｇ，０．０１ｇ。５．３　组织捣碎机。５．４　超声提取仪。５．５　旋涡混匀器。５．６　氮吹浓缩仪。５．７　离心机：４０００ｒ／ｍｉｎ，１５０００ｒ／ｍｉｎ。５．８　移液器：１０μＬ～２００μＬ和１００μＬ～１０００μＬ。５．９　具塞塑料离心管：５０ｍＬ。６　试样的制备与保存６．１　一般要求制样操作全过程应防止样品受到污染或发生影响检测残留物含量的变化。６．２　动物肌肉、肝脏和肾脏组织从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约５００ｇ，用组织捣碎机充分捣碎，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于－１８℃以下冷冻存放。６．３　牛奶样品从所取全部样品中取出有代表性样品约５００ｇ，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于－１８℃以下冷冻存放。６．４　牛脂肪从所取全部样品中取出有代表性样品约５００ｇ，于４５℃～５０℃水浴中，使样品完全融化，充分混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于－１８℃以下冷冻存放。７　测定步骤７．１　提取和净化７．１．１　肉、肝脏、肾脏称取均质试样２ｇ（精确到０．０１ｇ），置于５０ｍＬ具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入５ｍＬ乙酸乙酯（肝２犛犖／犜２６７４—２０１０脏、肾脏基质中另加入２ｇ氯化钠），于漩涡振荡器上振荡１ｍｉｎ，超声提取５ｍｉｎ，离心５ｍｉｎ（肉类基质４０００ｒ／ｍｉｎ；肝脏、肾脏１５０００ｒ／ｍｉｎ）。取上清液至１０ｍＬ刻度离心管中，重复上述提取步骤１次，合并两次提取液，在４０℃水浴中氮吹浓缩至近干。准确加入２ｍＬＴｒｉｓ碱溶液，３ｍＬ正己烷振荡１ｍｉｎ，静置分层，弃去正己烷层，下层（Ｔｒｉｓ碱溶液层）４０００ｒ／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ后，过０．２２μｍ微孔滤膜，供ＬＣＭＳ／ＭＳ联用仪测定。７．１．２　牛奶、牛脂肪称取均质试样２ｇ（精确到０．０１ｇ），置于５０ｍＬ具螺旋盖聚丙烯离心管中，牛奶样品加入１０ｍＬ乙腈，牛脂肪样品加入１０ｍＬ甲醇，再分别加入２ｇ氯化钠于旋涡振荡器上振荡１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心４ｍｉｎ。取上清液５ｍＬ至１０ｍＬ离心管中，在４０℃水浴中氮气吹至近干，马上准确加入１ｍＬＴｒｉｓ碱溶液，３ｍＬ正己烷振荡１ｍｉｎ，静置分层，弃去正己烷层，下层（Ｔｒｉｓ碱溶液层）４０００ｒ／离心３ｍｉｎ，上清液过０．２２μｍ微孔滤膜，立即用ＬＣＭＳ／ＭＳ联用仪测定。７．２　测定７．２．１　液相色谱质谱／质谱条件　　液相色谱质谱／质谱条件如下：ａ）　色谱柱：Ｃ１８柱，２．０ｍｍ（内径）×１００ｍｍ，５μｍ，或相当者；ｂ）流动相：乙腈＋１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液（２４＋７６，犞／犞）；ｃ）流速：３００μＬ／ｍｉｎ；ｄ）柱温：３０℃；ｅ）进样量：１０μＬ；ｆ）离子源：电喷雾离子源；ｇ）扫描方式：正离子；ｈ）检测方式：多反应监测（ＭＲＭ）；ｉ）定性离子对：３０１．０／２５７．０，３０１．０／２１３．１；ｊ）定量离子对：３０１．０／２５７．０；ｋ）分辨率：单位分辨率；ｌ）质谱／质谱参考条件参见附录Ａ。７．２．２　液相色谱质谱／质谱测定和确证按照７．２．１液相色谱质谱／质谱条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中的那罗星含量。样品中那罗星含量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应用空白样品提取液进行适当稀释。在上述色谱条件下，那罗星的质量色谱峰保留时间约为２．１５ｍｉｎ。标准品的多反应监测色谱图参见附录Ｂ中图Ｂ．１。在相同实验条件下，样品与标准工作液中待测物质的质量色谱峰相对保留时间在２．５％以内，并且在扣除背景后的样品质量色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表１规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。待测化合物的定性离子的重构离子色谱峰的信噪比应大于等于３（Ｓ／Ｎ≥３），定量离子的重构离子色谱峰的信噪比应大于等于１０。３犛犖／犜２６７４—２０１０表１　使用液相色谱质谱／质谱定性时相对离子丰度最大允许误差相对丰度（基峰）％液相色谱质谱／质谱定性时相对离子丰度最大允许误差％＞５０±２０＞２０～５０±２５＞１０～２０±３０≤１０±５０７．２．３　空白试验空白样品，按上述测定步骤进行。８　结果计算与表述用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按照式（１）计算试样中那罗星的含量。犡＝（犮－犮０）×犞犿…………………………（１）　　式中：犡———试样中那罗星的含量，单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；犮———由标准曲线得到的样液中那罗星的浓度，单位为微克每升（μｇ／Ｌ）；犮０———由标准曲线得到的空白试验中那罗星的浓度，单位为微克每升（μｇ／Ｌ）；犞———样液最终定容体积，单位为升（Ｌ）；犿———最终样液所代表的试样质量，单位为千克（ｋｇ）。９　测定低限、回收率９．１　测定低限对于牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪、牛奶、猪肉、猪肝、猪肾、羊肉、羊肝、羊肾、鸡肉和鸭肉中那罗星的测定低限均为１０μｇ／ｋｇ。９．２　液相色谱质谱／质谱法测定的回收率液相色谱质谱／质谱法的测定结果参见附录Ｃ。４犛犖／犜２６７４—２０１０附　录　犃（资料性附录）参考质谱条件１）参考质谱条件：ａ）　雾化气ＧＳ１（ＮＥＢ）：０．３１０３ＭＰａ（氮气）；ｂ）气帘气（ＣＵＲ）：０．１７２４ＭＰａ（氮气）；ｃ）喷雾电压（ＩＳ）：－３５００Ｖ；ｄ）去溶剂温度（ＴＥＭ）：６００℃；ｅ）去溶剂气流ＧＳ２：０．２７５９ＭＰａ（氮气）；ｆ）碰撞气（ＣＡＤ）：０．０３４４８ＭＰａ（氮气）；ｇ）碰撞室出口电压（ＣＸＰ）：－６Ｖ；ｈ）其他质谱参数见表Ａ．１。表犃．１　主要参考质谱参数化合物驻留时间ｍｓ去簇电压ＤＰＶ入口电压ＥＰＶ碰撞能量ＣＥｅＶ那罗星１００－２６－８－２０１００－２６－８－１４　　注：雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体。使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去簇电压、碰撞能等应优化至最佳灵敏度。对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异。１）　非商业性声明：附录Ａ所列参考质谱条件是在ＡＰＩ４０００型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。５犛犖／犜２６７４—２０１０附　录　犅（资料性附录）那罗星标准溶液的多反应监测（犕犚犕）色谱图犪）犫）犮）图犅．１　那罗星标准溶液多反应监测（犕犚犕）色谱图（１０μ犵／犔）６犛犖／犜２６７４—２０１０附　录　犆（资料性附录）样品的添加浓度及回收率试验数据表犆．１　回收率样品名称添加浓度１０μｇ／ｋｇ３０μｇ／ｋｇ５０μｇ／ｋｇ牛肉７６．５％～９３．１％７９．０％～１０１．７％８３．５％～１０２．５％牛肝脏７３．２％～９４．３％７１．６％～８３．８％８７．６％～１０６．３％牛肾脏７２．４％～１０３．２％７８．２％～１０２．５％８０．２％～１０４．７％牛脂肪７６．８％～１０３．６％７６．３％～９６．３％８１．２％～１０３．５％牛奶７８．５％～１０２．１％７４．４％～９５．９％８５．３％～１０６．５％猪肉７３．０％～９７．４％８３．９％～９９．５％９１．５％～９９．９％猪肝７０．４％～８８．３％７８．９％～１０２．０％８７．７％～１０３．７％猪肾７１．３％～１０３．５％７８．０％～８５．１％９０．１％～１０８．２％羊肉７１．２％～９４．３％７０．０％～９０．６％８５．６％～１０５．３％羊肝７０．６％～９９．９％７０．２％～８９．５％７４．０％～１０６．９％羊肾７５．２％～９４．３％７３．９％～８６．５％８６．３％～９９．９％鸡肉７３．０％～９４．３％８６．１％～１０４．０％８０．２％～１０５．２％鸭肉７６．７％～１０３．４％７３．０％～９６．４％８１．６％～１１０％７犛犖／犜２６７４—２０１０犉狅狉犲狑狅狉犱犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱狑犪狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲狅犳犖犪狋犻狅狀犪犾犚犲犵狌犾犪狋狅狉狔犆狅犿犿犻狊狊犻狅狀犳狅狉犆犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犃犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲’狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪．犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犎犲狀犪狀