乙型肝炎系列培训材料

乙型肝炎标志物相关知识培训主要内容（一）乙肝病毒的病原学、流行病学（二）乙型肝炎病毒血清标志物指标及意义（三）我公司的乙肝试剂现状一、乙肝病毒的病原学及流行病学1.1乙肝病毒的流行现状。1.2乙肝病毒的形态和结构。1.3乙肝病毒（HBV）的基因结构。1.4乙肝的传播途径。1.1乙肝病毒的流行现状1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行概况1.1.2我国HBV感染流行现状1.1.3乙肝亚型的地理分布1.1.4乙肝的传播途径1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行概况1.1.2我国HBV感染流行现状我国是HBV感染的高流行区。我国HBV感染率概况为：–抗HBc及／或抗HBs阳性：60％–非感染人群：26％–慢性乙型肝炎：2％–表面抗原阳性的慢性无症状HBV携带者：10％–表面抗原阴性的慢性无症状HBV携带者：2％资料来源：骆抗先，《乙型肝炎基础和临床》第二版1.1.3乙肝亚型的地理分布ayw多见于非洲、东地中海、中东及巴基斯坦；adw多见于北欧及美洲；adr多见于东南亚及远东，adw及adr多见于印尼、马来西亚、新几内亚及泰国我国则具有一定的民族性，汉族人以adr为主，adw次之蒙古族、维吾尔族、回族等兄弟民族几乎都是ayw亚型，ayr亚型极其少见，而adr亚型几乎没有。1.1.4传播途径血液传播、（输血、血制品、医疗器械等）日常生活（伤口、共用刀具、消化道粘膜破损或溃疡等）母婴传播性传播乙肝病毒的传播途径主要有：澄清对传播途径认识的误区HBV并不经口途径传播。依据是：–HBV不随粪便排出，除非有消化道出血者。–试验证明：污染HBsAg阳性血液的粪便保存数日后HBsAg即转阴。–未见有经水、食物污染而引起的乙肝暴发流行。蚊、臭虫等吸血昆虫在HBV传播中的作用尚无确实的证据。高危人群母亲是HBV感染者的婴儿乙肝患者的家庭成员吸毒者监狱犯人性传播疾病病人血液透析病人医护人员1.2乙肝病毒的形态和结构1.2.1HBV的基本（电镜）结构1.2.2HBV的基因结构1.2.1HBV形态结构大球形颗粒（Dane颗粒）管形颗粒小球形颗粒Dane颗粒的基本结构示意图HBsAgHBcAgDNAP（外膜蛋白）（核衣壳蛋白）HBVDNA1.2.2HBV基因结构pre-s1pre-s2SPCpre-cXHBVDNA3.2kbpre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAgHBsAgpre-S2pre-S1二、乙型肝炎病毒血清标志物指标及意义2.1HBV血清标志物及其临床意义2.2介绍几个临床乙肝检测的概念2.3临床常见乙肝血清标志物反映模式2.1HBV血清标志物及其临床意义肝功能(主要为丙氨酸氨基转移酶(ALT)乙肝病毒感染标志物※HBV-DNA※两对半:抗原抗体外膜——————HBsAgHBsAb核壳分泌蛋白——HBeAgHBeAb核壳结构蛋白——HBcAb肝组织病理学检查ALT的意义谷丙转氨酶（ALT）主要存在于肝细胞中。当肝脏发生炎症、坏死时，ALT就会从肝细胞内大量释放入血，导致血清中ALT升高，因此ALT升高是判断肝细胞损害的一个敏感指标。但是除了病毒性肝炎外，其它类型的肝炎或肝脏疾病，ALT也会升高。HBV-DNA的意义DNA是基因，因此HBV-DNA是HBV的遗传物质，当HBV侵入肝细胞后，就会以HBV-DNA为模板，合成新的HBV颗粒并释放入血，故HBV-DNA是病毒复制的一个重要指标。肝组织病理学检查肝组织病理学检查是“金标准”：明确诊断衡量肝脏炎症活动度衡量纤维化程度决定治疗方案，预测药物疗效对肝病而言肝组织学检查是比血清ALT更灵敏而精确的指标乙肝病毒感染血清标志物抗原抗体外膜HBsAgHBsAb核壳分泌蛋白HBeAgHBeAb核壳结构蛋白HBcAgHBcAbDNAHBV-DNA（1）HBsAg●出现时间：HBV感染后2～6个月（潜伏期）●持续时间：急性自限性肝炎：6个月内可消失慢性肝炎或慢性HBsAg携带者：可持续阳性曾用名：HA、澳抗●HBsAg有抗原性而无传染性HBVS基因整合肝细胞DNA持续表达“空心汤团”HBsAg●HBsAg的亚型adradwayrayw长江以北长江以南新疆、西藏、内蒙等（2）抗-HBs●出现时间：急性感染后期或HBsAg消失后（空白期或窗口期）●抗-HBs为保护性抗体（中和抗体）其出现标志着HBV感染进入恢复期●抗-HBs对相同HBsAg亚型的HBV再感染有免疫力，但对不同亚型的HBV保护力不完全。（3）HBeAgHBeAg是HBcAg的降解产物HBVC基因前C区C区前C/C蛋白HBeAgHBcAg表达切割、加工分泌到细胞外HBeAg只存在于血清中●HBeAg是病毒复制和传染性的标志血清HBeAg阳性者中，HBVDNA阳性率为92%左右（4）抗-HBe●出现时间：随着HBeAg的消失而出现●抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低抗-HBe阳性者中，16.3%～30%左右HBVDNA仍阳性可能与前C基因变异有关易加重病情、易演变为肝硬化α-干扰素疗效亦较差（5）抗-HBc●HBcAg主要存在于HBV感染的肝细胞内或DANE颗粒核心中，到血液中即被降解为HBeAg。一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志抗HBc-IgG：凡“有过”HBV感染者均可阳性HBcAg的免疫原性最强持续时间：6～18个月可终身阳性常规检测的HBV血清标志物的基本解释HBsAgHBV感染，但未必是急性肝炎或者慢性病变活动的病原。抗HBs感染后免疫；对疫苗的免疫应答；或HBIG的被动免疫HBeAg反映HBV复制，有病毒血症，血液高传染性抗HBeALT持续正常者表示HBV低复制或不复制，HBsAg(+)血液低传染性。ALT波动者表示病毒变异。抗HBc低滴度表示过去感染；高滴度表示现行感染。IgM抗HBc高滴度表示急性或近期感染；活动性病变可出现低滴度。来源：骆抗先，乙型肝炎基础和临床，第二版2.2介绍几个概念：①“两对半”②血清抗原—抗体转换率：HBeAg抗-HBe③“转阴”常用指标：血清HBeAg抗原—抗体转换率HBVDNA阴转率2.3临床常见乙肝血清标志物反映模式来源：骆抗先，乙型肝炎基础和临床，第二版序号HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc临床意义1-----过去和现在未感染过HBV。2----+1)既往感染未能测出抗-HBs；2)恢复期HBsAg已消，抗-HBs尚未出现；3)无症状HBsAg携带着。3---++1)既往感染过HBV；2)急性HBV感染恢复期；3)少数标本仍有传染性。①HBV感染已过；②抗HBs出现前的窗口期4-+---1)注射过乙肝苗有免疫；2)既往感染；3)假阳性5-+-++急性HBV感染后康复。6+---+1)急性HBV感染；2)慢性HBsAg携带者；3)传染性弱。7-+--+既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。8+--++1)急性HBV感染趋向恢复；2)慢性HBsAg携带者；3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。9+-+-+急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。即俗称的“大三阳”。三、我公司乙肝五项产品现状3.1各项的检测方法及生物所和临检中心质量要求。3.2我公司的试剂的基本情况3.3国内主要厂家试剂的的对比情况3.4临床操作及售前、售后服务过程中的注意事项3.5临床常见问题的分析3.1各项的检测方法及国家标准。1乙肝表面抗原（HBsAg）：双抗体夹心法。国家标准:特异性参比：20/20阳性参比：3/3灵敏度参比：adr≤0.5ng/mladw≤1ngay≤1ng精密性参比：Cv≤15％临检中心行业标准：0.5ng2乙肝表面抗体（抗-HBs）：双抗原夹心法。国家标准:特异性参比：20/20灵敏度:≤10mIu精密性参比：Cv≤15％临检中心行业标准:30mIu3.1各项的检测方法及国家标准。3乙肝E抗原（HBeAg）：双抗体夹心法。国家标准:特异性参比：15/15阳性参比：9/10灵敏度参比：1#≤1:642#≤1:1283#≤1:32精密性参比：Cv≤20％临检中心行业标准：2NCu4乙肝E抗体（抗-HBe）：竞争抑制法。国家标准:特异性参比：15/15阳性参比：9/10灵敏度参比：61#≤1:3257#≤1:3255#≤1:32精密性参比：Cv≤20％临检中心行业标准：4Ncu3.1各项的检测方法及国家标准。5乙肝核心抗体（抗-HBc）：竞争抑制法。国家标准:特异性参比：15/15阳性参比：14/15灵敏度参比：2#≤1:323#≤1:84#≤1:16精密性参比：Cv≤20％临检中心行业标准：2Ncu3.2我公司的试剂的基本情况A操作简单。B结果直观。C特异性好。D显色快且稳定。E临床符合率高。3.3国内主要厂家试剂的的对比情况HBsAg2004-9-2N2N30.5ng2ng5ng阴对阳对KH(20040816)0.0580.1230.2710.7921.6180.0493.408RSH(20040603)0.0460.0830.1970.5471.0680.1043.5LC2+(200409010.0580.0710.2270.6821.3750.0663.256抗-HBs2004-9-2N14N430mIuP1P4阴对阳对LC2+(20040901)0.0660.0740.440.4760.7220.0433.5KH(20040816)0.0580.0490.4210.4770.960.0513.173RSH(20040603)0.0790.0440.520.6150.9530.0463.228HBeAg2004-9-2N3N40.2Ncu0.5Ncu2Ncu阴对阳对LC2+(20040901)0.0470.0460.3611.0333.3280.0473.5KH(20040816)0.0930.070.3311.0463.4690.053.362RSH(20040603)0.0770.0870.1050.2412.4330.0543.366抗-HBe2004-9-2N2N144Ncu大三阳P4阴对阳对LC2+(20040901)2.7652.7230.8562.7560.0751.8920.056KH(20040818)1.9261.5620.7632.0560.3081.4390.046RSH(20040603)1.5381.0810.4091.6160.060.8180.063抗-HBc2004-9-2N2N14N3CP6P4阴对阳对LC2+(20040901)3.1392.7252.8410.0550.2011.8790.057RSH(20040603)2.6151.9872.4860.0590.1221.9130.057KH(20040810)1.9481.7111.890.0540.1061.7370.04各厂家的比较结果1前三项：KH本地高，假阳性偏多。灵敏度及个别阳性OD值较LC高。2后两项：LC阴性OD值高于KH，但阳性率低于KH。3整体五项：KH与LC均存在特殊模式且KH比LC偏多。4外观：KH的触感及视感好于LC。5品牌：KH较LC高。3.4注意事项试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡30分钟以上。实验前，仔细阅读说明书，严格按照反应时间及温度孵育。不同批试剂组分不得混用。手工洗板时避免孔内液体外溢，以避免相互污染，造成假阳性。实验物品及试剂盒均按传染品处理。使用后的剩余试剂及时回收至4度冰箱。3.5常见问题1忘加或错加酶标结合物。2漏加底物或显色剂或把终止液当成底物或显色剂加入。3显色温度不够。4操作前没看，拿错包被板。白板即整板没颜色的常见原因花板即显色不均匀、偏差大1本批标本弱阳性多。2手工洗板时，洗涤不均一，或机洗时部分孔堵塞或不彻底。3