实验培训

选修一生物技术实践第二部分酶的应用北京市十一学校王爱丽：[e-mail];窦向梅：[e-mail]酶的应用•实验4果汁中的果胶和果胶酶•实验5加酶洗衣粉的洗涤效果和条件•实验6α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测本部分内容，已经投稿，仅供学习交流，请勿公开发表！谢谢！实验四果汁中的果胶和果胶酶相关知识及原理：•果胶(Pcctin)主要是由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯组成的线状多糖。它具有水溶性,其分子量约5万一30万。在适宜条件下其溶液能形成凝胶。食用苹果果胶药用苹果果胶果胶的应用浓缩水果饮料糖果产品牛奶制品果酱制品果胶酶概述果胶酶本质上是聚半乳糖醛酸水解酶,水解果胶主要生成β-半乳糖醛酸,果胶酶由黑曲霉经发酵而得。外观呈浅黄色粉末状。功能能完全降解果汁中的果胶质，使果汁迅速澄清能裂解果蔬细胞壁，提高果蔬汁得率；能降低果汁粘度，提过过滤速度；能有效预防产品的后浑浊，延长果汁保质期。用量添加量应根据水果含果胶质的多少而定，一般为20～100ml/吨果汁(浆），对于果胶含量高的浆果类用量在100～300ml/吨果浆，其最佳用量范围应通过实验确定。产品特点PH值特性：作用PH：2.5-6.0，最适作用PH3.5;温度特性：作用温度为15-55℃左右。最适作用温度为50℃。应用范围适用于果蔬汁加工。贮存最佳贮藏条件为4-15℃，一般为室温贮藏，避免阳光直射。实验用具及材料实验仪器：组织捣碎机、烧杯、电热恒温热水浴锅、试管、点样板、电子天平、移液器或吸管。实验材料和试剂：苹果、2%果胶酶、95%乙醇。实验步骤：1.将苹果洗净，去柄，并切成小块，放入高速组织捣碎机或榨汁机中榨汁，至苹果成匀浆状态。2.将捣碎的苹果浆倒入烧杯中，用纱布过滤苹果汁；3.观察果胶酶的作用：取2支试管，分别加入4mL苹果汁，并编号为试管1和试管2，向1号试管中加入1mL蒸馏水作对对照，向试管2中加入1mL2%果胶酶溶液振荡混匀；4.将试管1和2放入45℃水浴锅中10分钟；观察实验有无分层现象；5.然后同时过滤到另外2支试管中，观察实验现象；6.沉淀果胶：取点样板，编号点样孔1和2，点样孔1：0.5ml苹果汁+0.5ml的水作对照，混匀；点样孔2：0.5ml苹果汁+0.5ml的95%乙醇混匀；2分钟后观察现象；7.观察实验现象并填写下表。试管1：试管2：果汁稀释，出汁率比试管1低的多果汁变的澄清，出汁率提高点样孔1点样孔2无变化产生絮状沉淀实验4果汁中的果胶和果胶酶实验4果汁中的果胶和果胶酶12•实验结果参考：建议活动：一、探讨果胶酶反应的最佳温度；二、探讨果胶酶反应的最佳pH值。0253545(温度℃)(体积ml)12340253545(温度℃)(体积ml)123403456(pH值)(体积ml)123403456(pH值)(体积ml)1234果胶酶在果汁生产中的作用检测题实验5加酶洗衣粉的洗涤效果和条件•鱼血布；•番茄汁；•胡萝卜汁；实验6α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测相关知识及原理：•酶是生物体内各种化学反应的催化剂，它有高度的专一性和高效性。但酶在水溶液中很不稳定，且不利于工业化使用。固定化酶（insolubleenzyme）就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。固定化的方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。将固定化酶装柱时，在酶的作用下转变为产物。•本实验是用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上。一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶催化后，可使淀粉水解成糊精。流出液用淀粉指示液测试，呈红色，表明水解产物糊精生产。α-淀粉酶β-淀粉酶糖化淀粉酶•淀粉糊精麦芽糖葡萄糖•最适pH值为5.5-7.5，最适温度为50-70℃。实验目的：1.制备固定化ɑ-淀粉酶；2.进行淀粉水解酶的测定。实验仪器及用具：层析柱（一次性针管注射器）,锥形瓶，玻璃棒，电子天平，50mL烧杯，250mL烧杯，支架,移液枪或吸管,点样板,玻璃棒;实验材料和试剂：α-淀粉酶、0.5%淀粉溶液、石英砂、5mmol/LKI-I2溶液实验步骤：1.用50ml小烧杯称取5g石英砂，加入4mlα–淀粉酶，缓慢搅拌15分钟，使α–淀粉酶固定到石英砂上；2.用10～15ml的蒸馏水清洗石英砂2-3次，最后一次清洗时取其上清滴加到点样板上，同时滴加1%淀粉溶液充分混匀，再加入KI-I2溶液，若溶液变为蓝色，说明游离的α–淀粉酶已完全除去；3.先把滤纸片放入层析柱（针管注射器）中，再装入固定有α–淀粉酶的石英砂；4.将灌注了固定化酶的层析柱放在支架上，用滴管加1%淀粉溶液，使淀粉溶液约以1滴/6s的流速过柱。5.在流出1～2mL反应液后接收约0.5mL流出液，加入1-2滴KI-I2溶液，观察颜色。6.用水稀释淀粉滤液1倍后再观察颜色并填写下表。7.实验后，用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱，放置在4℃冰箱中，几天后再重复上述实验，看是否有相同的结果。样品水淀粉溶液淀粉滤液KI-I2溶液稀释1倍结果①对照+--+-碘色②样品1-+-+-蓝色③样品2--++-红色④样品3--+++浅红实验结果参考“实验6α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测”的实验改进请各位老师多多指正！谢谢！