辅酶Q对SHR大鼠的降血压效应观察的论文-[Abstr

-1-辅酶Q10对SHR大鼠的降血压效应的观察徐呈兰晓曦庞文璟解轶声林盟菲孟晋方原吴贻明02级法文班指导老师：李稻[摘要]目的：探究、比较单用辅酶Q10以及辅酶Q10与拉贝洛尔联合作用对SHR大鼠的血压升高的抑制或降压的作用，并对辅酶Q10的降血压机制进行初步探讨。方法：实验组：SHR大鼠6只，每天灌辅酶Q1020mg/day；对照组：SHR大鼠6只，每天灌等剂量生理盐水。喂药前，测血压并采血一次，喂药开始后每间隔五天测一次血压、心率，喂药后十五天剪尾采血。第十六天先测定血压，然后注射拉贝洛尔，10min后再测血压。动物麻醉处死，心脏采血，并取心脏称重。血清学检测指标：超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）。结果：实验组动物在辅酶Q10灌胃十五天后，血压与对照组比较有显著的下降（p0.05）。注射剂量为正常最小剂量的四分之一拉贝洛尔后，实验组动物血压降低效应比对照组更明显。但血清学指标（SOD、MDA）均无明显改变。结论：辅酶Q10有明显的降血压作用，但其降血压机制可能与抗脂质过氧化作用无关。另外，长时间服用辅酶Q10能减少普通抗高血压药物的使用剂量而达到降压效果。[关键词]高血压；辅酶Q10；拉贝洛尔；脂质过氧化[Abstract]Objective:tocomparethehypotensiveeffect(inhibitionofthedevelopmentofbloodpressure)ofCoenzymeQ10(CoQ10)andCoQ10+Labetalolonspontaneoushypertensionrats(SHR).Method:12SHRweredividedintotwogroups.Wecollectedbloodsamplesfromeachofrat.Studygroup:administrationofCoQ10(20mg/day);controlgroup:placebo(physiologicalsaline),for15days.WemeasuredBpandHrevery5days.15thday:collectionofthesecondbloodsample.16thday:measurementofBpandinjectionofLabetaloland10minuteslater,wemeasureBp.Weanesthetizedtherats,collectedthethirdbloodsamplefromheartandweighrats’hearts.Serumalitems:SODandMDA.Results:after15days’administration,Bpoftheratsinstudygroupdroppedsignificantly(p0.05)whilethatofcontrolgroupwereunchanged.Aftertheinjectionofone-forthoftheminimumdoseoflabetalol,Bpoftheratsinstudygroupdroppedmorerapidlythanthatofcontrolgroup.Buttheconcentrationoftheitemsinserumdidn’tchangegreatly.Conclusion:CoQ10hasahypotensiveeffect.Itcanprotectthehighriskpeopleandreducethedoseofregularmedication(hypotensor).ThemechanismofCoQ10isindependentfromitsroleinanti-lipidperoxydation.[KeyWord]idiopathichypertension;CoenzymeQ10;Labetalol;lipidperoxydation高血压是一种常见、多发病，原发性高血压的病因不详，与遗传因素和环境因素密切相关，对高血压高危人群的防治工作尤为重要。然而传统的抗高血压治疗主要是控制血压，不能对因治疗，始终不能达到理想效果，也不能起到预防作用，所以需要不断探索新的保护、降压的途径。-2-上世纪70年代，人们就已经发现了辅酶Q10对于高血压有一定的治疗意义。有实验揭示尽管辅酶Q10不会大幅度降低血压，但是能够延长降压药物对血压控制的时间（延长两倍），因此提出辅酶Q10可以降低其他降压药的使用频率，并具有较好的协同作用。但是，目前为止，对于辅酶Q10的降压和协同机制，仍没有定论。新近发现脂质过氧化反应可能参与了高血压发生和发展的病理过程[9]。脂质过氧化作用及其产物能够对细胞产生损害，使外周血管阻力升高，诱发高血压[9]。同样有研究表明，辅酶Q10具有较好的抗脂质过氧化的作用[8]。本实验利用血压未达平台期（一般在十八周龄）的SHR大鼠模拟高血压高危人群，复制辅酶Q10降压的动物模型，探讨其降血压的可能机制，以及辅酶Q10与肾上腺素α、β受体阻断剂——拉贝洛尔联合作用对降低血压的疗效观察，探索协同用药的新途径。材料与方法动物分组与血清制备1．研究对象SHR大鼠12只，雄性，十六周龄；正常WKY大鼠3只，雄性，十六周龄。大鼠均由中国科学院上海动物实验中心提供且来源于同一窝，体重相近。SHR大鼠初始血压均接近于高血压的平台期，正常WKY大鼠血压正常。2．测基础血压先将大鼠置于37℃恒温箱中预热15-20min，取出置于大鼠固定网套中，放入已预热的血压计固定箱中，由实验人员通过留出鼠尾测定血压（大鼠血压计型号：1B型RBP大鼠血压计）。在连续三天测定血压的基础上，取第二天和第三天的血压均值作为基础血压。3．配对方法大鼠标号，按其接近血压平台期的程度进行配对，再用随机数法将其分至实验组和对照组。实验组：10、1、2、8、9、5；对照组：3、12、6、4、11、7。4．血样采集与血清制备第一次摘动物眼球取血，采血量约1.3±0.3ml；第二次为剪尾采血，采血量约0.7±0.2ml；第三次在动物麻醉条件下心脏采血，采血量约1.5±0.3ml。采集的血液待凝固后，4000转10min离心，取上层血清。将制备得到的血清置于eppendorf管中，-20℃保存备用。动物降压实验1．辅酶Q10降压实验在测定基础血压之后，先采集第一次血样，然后每天中午给大鼠灌胃。实验组每只大鼠每日灌药量为20mg辅酶Q10（溶解于3ml生理盐水）；对照组灌等-3-量的生理盐水。连续灌胃15天。其间，所有大鼠每5天测定一次血压、心率（在当日灌胃之前）。第15天，所有大鼠剪尾取血、分离血清。2．联用拉贝洛尔实验将实验组和对照组大鼠分别置于37℃恒温箱中预热15min后，依次测其血压。然后肌肉注射拉贝洛尔（拉贝洛尔0.065mg，用生理盐水稀释到0.4ml），注射完毕放入恒温箱，立即计时。10分钟后，测定其血压。3．处死，心脏取血、称重大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠1.5ml麻醉。打开胸腔，进行心脏采血，分离血清并保存。用镊子小心提起心包膜，用眼科剪剪开，再用镊子夹住心尖提起心脏，剪断相连的动静脉，取下心脏。沿上下腔静脉、肺动静脉、主动脉分别剪开心房、心室，洗净其中的血液及血凝块。修剪动静脉口，使其与心肌壁相平。将心脏放在吸水纸上干燥10min。分析天平称重。血清学指标检测实验组和对照组三次采集和制备的血清于同一天进行SOD，MDA检测（试剂盒均购自南京建成生物工程研究所）。1．SOD检测方法（1）配制试剂试剂一：将A试剂20ml加蒸馏水稀释至200ml；试剂二：为B试剂14ml；试剂三：为C试剂14ml；试剂四：将D试剂0.5ml用7ml稀释液1:14稀释；试剂五：粉剂A加70℃-80℃热双蒸水150ml溶解；试剂六：粉剂B加蒸馏水150ml溶解；显色剂配制：按照试剂五:试剂六:冰乙酸=3:3:2的体积比配成（避光操作）。（2）测定操作试剂测定管对照管试剂一（ml）1.01.0样品5μl蒸馏水5μl试剂二（ml）0.10.1试剂三（ml）0.10.1试剂四（ml）0.10.1用漩涡混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40分钟显色剂（ml）22-4-混匀，室温放置10分钟，于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色（3）计算SOD活力（U/ml）=(对照管吸光度-测定管吸光度)/对照管吸光度÷50%×反应体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数2．MDA检测方法（1）配制试剂试剂一：将A试剂12ml适当水浴加温至溶解透明；试剂二：将B试剂12m加340ml双蒸水混匀；试剂三：将粉剂C加入到90℃-100℃的热双蒸水60ml中，充分溶解后用双蒸水补足至60ml，再加冰醋酸60ml混匀；标准品：为10nmol/ml四乙氧基丙烷5ml。（2）测定操作标准管标准空白管测定管测定空白管10nmol/ml标准品(μl)50无水乙醇(μl)50测试样品(μl)5050试剂一(μl)50505050混匀试剂二(ml)3333试剂三(ml)11150%冰醋酸(ml)1漩涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴40分钟，取出后流水冷却，然后3500-4000转/分，离心10分钟。取上清，于波长532nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色（3）计算MDA含量(nmol/ml)=（测定管吸光度-测定空白管吸光度）/（标准管吸光度-标准空白管吸光度）×标准品浓度×样本测试前稀释倍数数据统计使用SPSS10.0统计软件进行统计分析，以p0.05作为有显著差异，p0.01作为有非常显著差异。血压变化作配对T检验。血清学指标进行组间、组内对比，作独立样本T检验。-5-结果1．辅酶Q10的降压效果观察实验组动物连续服用辅酶Q1015天，对照组动物服用安慰剂（生理盐水）15天内，动物血压如图1所示。经统计处理，显示实验组血压明显下降(p0.05)，对照组血压无明显变化（图1-A）。实验组和对照组动物血压变化量也具有明显差别(p0.05)(图1-B)，说明辅酶Q10对SHR大鼠具有明显的降血压作用，并推迟其血压达到平台期的时间。165170175180185190195200205210051015Time(day)BP(mmHg)controlgroupstudygroup-20-15-10-505101520051015Time(day)ΔBP(mmHg)controlgroupstudygroup连续灌胃15天内，大鼠血压的变化（n=6）。用配对t检验的方法分别比较实验组动物和对照组动物服药前后的血压。实验组：p0.05，对照组：p0.05，表明辅酶Q10有降血压作用。AB连续灌胃15天内，大鼠血压变化量的比较(n=6)。以基础血压为零，用（Bpn-Bp0）的变化量来表示降压效果。用配对t检验的方法比较两组之间血压变化量，p0.05。服药15天内大鼠血压变化125145165185205225245051015Time(day)BP(mmHg)normalgroupcontrolgroupstudygroup服药15天内大鼠血压的自身比较125145165185205225245normalgroupcontrolgroupstudygroupBP(mmHg)BasicBP(day0)BP1(day5)BP2(day10)BP3(day15)连续灌胃15天内，大鼠血压的变化（n=6）的组间比较。随着时间的变化，在正常对照组血压不变的情况下，实验组与对照组相比，血压有着明显下降。连续灌胃15天内，大鼠血压的变化（n=6）的自身比较。随着时间变化，实验组大鼠的血压随着辅酶Q10的服用，血压有着明显的下降趋势，而对照组的趋势依然是上升的CD图1辅酶Q10连续灌胃过程中两组大鼠血压的变化比较2．酶Q10对心脏的作用辅酶Q10连续灌胃15天内，实验组与对照组大鼠心率如表1所示，比较两组心率，没有明显差异（图2）。处死动物后，称大鼠心重（表2），两组比较