GB 31659.3-2022 食品安全国家标准 奶和奶粉中头孢类药物残留量的测定 液相色谱-串联质

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准奶和奶粉中头孢类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法16中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ67.100X31659.3—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofcephalosporinsresiduesinmilkandmilkpowderbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodGB20220920发布－－20230201－－实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCS代替GB/T22989—2008GB３１６５９􀆰３—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件代替GB/T２２９８９—２００８«牛奶和奶粉中头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的测定　液相色谱Ｇ串联质谱法»,与GB/T２２９８９—２００８相比,除结构调整和编辑性改动外,主要变化如下:———标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式;———标准范围中增加羊奶的检测;———标准范围增加药物品种数量;———标准灵敏度进一步提高.本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:———GB/T２２９８９—２００８.ⅠGB３１６５９􀆰３—２０２２食品安全国家标准奶和奶粉中头孢类药物残留量的测定　液相色谱Ｇ串联质谱法１　范围本文件规定了牛奶、羊奶和奶粉中头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑林、头孢哌酮、头孢乙腈、头孢匹林、头孢洛宁、头孢喹肟、头孢噻肟残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于牛奶、羊奶和奶粉中头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑林、头孢哌酮、头孢乙腈、头孢匹林、头孢洛宁、头孢喹肟、头孢噻肟残留量的检测.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理试样中的药物残留用磷酸盐缓冲溶液提取,亲水亲脂平衡固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱法测定,基质校准外标法定量.５　试剂与材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　试剂５􀆰１􀆰１　甲醇(CH３OH):色谱纯.５􀆰１􀆰２　乙腈(CH３CN):色谱纯.５􀆰１􀆰３　甲酸(HCOOH):色谱纯.５􀆰１􀆰４　正己烷(C６H１４).５􀆰１􀆰５　磷酸二氢钾(KH２PO４).５􀆰１􀆰６　氢氧化钠(NaOH).５􀆰２　溶液配制５􀆰２􀆰１　２􀆰５mol/L氢氧化钠溶液:取氢氧化钠５０g,加水溶解并稀释至５００mL.５􀆰２􀆰２　３０％乙腈溶液:取乙腈３０mL,用水稀释至１００mL.５􀆰２􀆰３　０􀆰０５mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH＝８􀆰５):取磷酸二氢钾６􀆰８g,用水溶解并稀释至１０００mL,用２􀆰５moL/L氢氧化钠溶液调节pH至８􀆰５.５􀆰２􀆰４　０􀆰１％甲酸溶液:取甲酸１mL,用水稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰５　０􀆰１％甲酸溶液Ｇ甲醇(９５∶５):取０􀆰１％甲酸溶液９５mL、甲醇５mL,混匀.５􀆰３　标准品头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑林、头孢哌酮、头孢乙腈、头孢匹林、去乙酰基头孢匹林,头孢洛宁、头孢喹１GB３１６５９􀆰３—２０２２肟、头孢噻肟标准品,含量均≥９５％,具体见附录A.５􀆰４　标准溶液制备５􀆰４􀆰１　标准储备液:取标准品各１０mg,精密称量,分别用３０％乙腈溶液适量使溶解并稀释定容至２５mL容量瓶,配制成浓度为４００μg/mL的标准储备液.于－１８℃避光保存,有效期１个月.５􀆰４􀆰２　混合标准储备液:分别准确移取各标准储备液０􀆰２５mL于１０mL容量瓶中,用３０％乙腈溶液稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的混合标准储备液.于－１８℃避光保存,有效期７d.５􀆰４􀆰３　混合标准工作液:准确移取混合标准储备液适量,用０􀆰１％甲酸溶液Ｇ甲醇(９５∶５)稀释成浓度为２􀆰５μg/L、５􀆰０μg/L、２０μg/L、１００μg/L、２００μg/L和５００μg/L的系列混合标准工作溶液.现用现配.５􀆰５　材料５􀆰５􀆰１　固相萃取柱:亲水亲脂平衡型固相萃取柱,５００mg/６mL,或相当者.５􀆰５􀆰２　针头式过滤器:尼龙材质,孔径０􀆰２２μm或性能相当者.６　仪器和设备６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g和０􀆰０１g.６􀆰３　氮吹仪.６􀆰４　固相萃取装置.６􀆰５　涡旋混合器.６􀆰６　离心管:聚丙烯塑料离心管,１０mL、５０mL.６􀆰７　pH计.７　试样的制备与保存７􀆰１　试样的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试样品,并均质.a)　取均质后的供试样品,作为供试试样;b)　取均质后的空白样品,作为空白试样;c)　取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.７􀆰２　试样的保存－１８℃以下保存.８　测定步骤８􀆰１　提取取牛奶、羊奶试料５g(准确至±０􀆰０５g)或奶粉试料０􀆰５g(准确至±０􀆰０１g),于５０mL离心管,加磷酸盐缓冲溶液２０mL,涡旋混匀３０s,用２􀆰５mol/L氢氧化钠溶液调节pH至８􀆰５,备用.８􀆰２　净化取固相萃取柱,依次用甲醇５mL、磷酸盐缓冲溶液１０mL活化.取备用液,过柱,待液面到达柱床表面时再依次用磷酸盐缓冲溶液３mL和水２mL淋洗,弃去全部流出液.用乙腈３mL洗脱,收集洗脱液于１０mL离心管中,加正己烷３mL,涡旋混合１min,静置５min,弃去上层正己烷层,取乙腈层在４０℃水浴氮气吹干,加０􀆰１％甲酸溶液Ｇ甲醇(９５∶５)１􀆰０mL溶解,过０􀆰２２μm滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱测定.８􀆰３　基质匹配标准曲线的制备取空白试料依次按８􀆰１和８􀆰２处理,４０℃水浴氮气吹干,分别加系列混合标准工作溶液１􀆰０mL溶解残渣,过０􀆰２２μm滤膜,制备２􀆰５μg/L、５􀆰０μg/L、２０μg/L、１００μg/L、２００μg/L和５００μg/L的系列基质匹配标准工作溶液,供液相色谱Ｇ串联质谱测定.以定量离子对峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标,２GB３１６５９􀆰３—２０２２绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.８􀆰４　测定８􀆰４􀆰１　液相色谱参考条件a)　色谱柱:C１８色谱柱(１００mm×２􀆰０mm,１􀆰７μm)或相当者;b)　流动相:A为０􀆰１％甲酸溶液,B为甲醇,梯度洗脱程序见表１;c)　流速:０􀆰３mL/min;d)　柱温:３５℃;e)　进样量:１０μL.表１　流动相梯度洗脱条件时间minA％B％０９５５１􀆰０９５５４􀆰５５０５０６􀆰０５０５０６􀆰１９５５７􀆰５９５５８􀆰４􀆰２　质谱参考条件a)　离子源:电喷雾(ESI)离子源;b)　扫描方式:正离子扫描;c)　检测方式:多反应监测(MRM);d)　毛细管电压:２０００V;e)　RF透镜电压:０􀆰５V;f)　离子源温度:１５０℃;g)　脱溶剂气温度:５００℃;h)　锥孔气流速:５０L/h;i)　脱溶剂气流速:１０００L/h;j)　二级碰撞气:氩气;k)　定性离子对、定量离子对、碰撞能量和锥孔电压见表２.表２　定性离子对、定量子离子对、碰撞能量和锥孔电压化合物名称定性离子对(碰撞能量)m/z(eV)定量离子对(碰撞能量)m/z(eV)锥孔电压V头孢氨苄３４８􀆰１/１０６􀆰０(３２)３４８􀆰１/１５８􀆰０(１０)３４８􀆰１/１５８􀆰０(１０)２６头孢拉定３５０􀆰２/１５７􀆰９(１２)３５０􀆰２/１７６􀆰０(１２)３５０􀆰２/１７６􀆰０(１２)２４头孢乙腈３６２􀆰０/１７８􀆰０(１４)３６２􀆰０/２５８􀆰０(１０)３６２􀆰０/２５８􀆰０(１０)２４头孢唑林４５５􀆰０/１５６􀆰０(１６)４５５􀆰０/３２３􀆰０(１０)４５５􀆰０/３２３􀆰０(１０)４头孢哌酮６４６􀆰２/１４３􀆰０(３８)６４６􀆰２/５３０􀆰１(１０)６４６􀆰２/１４３􀆰０(３８)２８头孢匹林４２４􀆰１/１５１􀆰９(２２)４２４􀆰１/２９２􀆰０(１２)４２４􀆰１/１５１􀆰９(２２)２８头孢洛宁４５９􀆰１/１５１􀆰９(１８)４５９􀆰１/３３７􀆰０(８)４５９􀆰１/１５１􀆰９(１８)１２３GB３１６５９􀆰３—２０２２表２(续)化合物名称定性离子对(碰撞能量)m/z(eV)定量离子对(碰撞能量)m/z(eV)锥孔电压V头孢喹肟５２９􀆰２/１３４􀆰０(１４)５２９􀆰２/３９６􀆰０(１２)５２９􀆰２/１３４􀆰０(１４)３４去乙酰基头孢匹林３８２􀆰１/１１１􀆰８(２０)３８２􀆰１/１５１􀆰９(２６)３８２􀆰１/１５１􀆰９(２６)３２头孢噻肟４５６􀆰０/１６７􀆰０(１８)４５６􀆰０/３９６􀆰０(８)４５６􀆰０/１６７􀆰０(１８)２２８􀆰４􀆰３　测定法取试料溶液和基质匹配标准溶液,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.基质匹配标准溶液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内,如超出线性范围,应将基质匹配标准溶液和试料溶液作相应稀释后重新测定.试料溶液中待测物质的保留时间与基质匹配标准工作液中待测物质的保留时间之比,偏差在±２􀆰５％以内,且试料溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表３的要求,则可判定为样品中存在对应的待测物质.标准溶液多反应监测色谱图见附录B.表３　定性确证时相对离子丰度的允许偏差单位为百分号相对离子丰度允许偏差＞５０±２０＞２０~５０±２５＞１０~２０±３０≤１０±５０８􀆰５　空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.９　结果计算和表述试样中待测药物的残留量按标准曲线或公式(１)计算.X＝Cs×A×V×１０００As×m×１０００(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:X———试样中待测药物残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);Cs———标准溶液中待测药物浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);A———试样溶液中待测药物的峰面积;V———定容体积的数值,单位为毫升(mL);As———标准溶液中待测药物的峰面积;m———试样质量的数值,单位为克(g).注:头孢匹林残留量以头孢匹林和去乙酰基头孢匹林之和计.１０　检测方法的灵敏度、准确度和精密度１０􀆰１　灵敏度本方法中头孢哌酮、头孢乙腈和头孢唑林在奶和奶粉中的检测限分别为２􀆰０μg/kg和２０μg/kg,定量限分别为４􀆰０μg/kg和４０μg/kg;其余头孢类药物和去乙酰基头孢匹林在奶和奶粉中的检测限分别为０􀆰５μg/kg和５μg/kg,定量限分别为１􀆰０μg/kg和１０μg/kg.４GB３１６５９􀆰３—２０２２１０􀆰２　准确度本方法在１􀆰０μg/kg~２００μg/kg添加浓度水平上的回收率为６０％~１２０％.１０􀆰３　精密度本方法的批内相对标准偏差≤１５％,批间相对标准偏差≤２０％.５GB３１６５９􀆰３—２０２２附　录　A(资料性)头孢类药物和去乙酰基头孢匹林的英文名称、分子式和CAS号头孢类药物和去乙酰基头孢匹林的英文名称、分子式和CAS号见表A􀆰１.表A􀆰１　头孢类药物和去乙酰基头孢匹林的英文名称、分子式和CAS号化合物英文名称分子式CAS号头孢氨苄CefalexinC１６H１７N３O４S１５６８６Ｇ７１Ｇ２头孢拉定CefradineC１６H１９N３O４S３８８２１Ｇ５３Ｇ３头孢乙腈CefacetrileC１３H１３N３O６