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中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准牛可食性组织中吡利霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法22中华人民共和国国家标准备案号:XXXX-XXXXICS67.120X31613.4—2022Nationalfoodsafetystandard—Determinationofpirlimycinresidueinbovineedibletissuesbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethodGB2022 09 20发布--2023 02 01--实施发布国家市场监督管理总局中华人民共和国农业农村部CCSGB316134—2022前 言本文件按照GB/T11—2020«标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.本文件系首次发布.ⅠGB316134—2022食品安全国家标准牛可食性组织中吡利霉素残留量的测定 液相色谱G串联质谱法1 范围本文件规定了牛可食性组织中吡利霉素残留检测的制样和液相色谱G串联质谱测定方法.本文件适用于牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中吡利霉素的残留检测.2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.4 原理试料中残留的吡利霉素,用5%甲酸乙腈溶液提取,固相萃取柱净化,液相色谱G串联质谱测定,基质匹配标准溶液外标法定量.5 试剂与材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682规定的一级水.51 试剂511 乙腈(CH3CN):色谱纯.512 甲醇(CH3OH):色谱醇.513 甲酸(HCOOH):色谱纯.514 无水硫酸钠(Na2SO4).515 氯化钠(NaCl).52 溶液配制521 5%甲酸乙腈溶液:取甲酸5mL,用乙腈稀释至100mL.522 01%甲酸乙腈溶液:取甲酸1mL,用乙腈稀释至1000mL.523 01%甲酸溶液:取甲酸1mL,用水稀释至1000mL.524 80%甲醇溶液:取甲醇80mL,用水稀释至100mL.53 标准品吡利霉素(Pirlimycin,C17H31ClN2O5S,CAS号:79548G73G5),含量≥990%.54 标准溶液的制备541 标准储备液:精密称取吡利霉素标准品约10mg,于10mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为1mg/mL的吡利霉素标准储备液.-18℃以下保存,有效期12个月.542 标准中间液:精密量取吡利霉素标准储备液01mL,于10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为10μg/mL的吡利霉素标准中间液.2℃~8℃保存,有效期6个月.1GB316134—2022543 标准工作液:精密量取吡利霉素标准中间液01mL,于10mL容量瓶中,用80%甲醇稀释至刻度,配制成浓度为100ng/mL的吡利霉素标准工作液.2℃~8℃保存,有效期6个月.55 材料551 固相萃取小柱:基质增强脂肪去除柱(300mg/3mL),或相当者.552 陶瓷均质子.553 亲水性聚四氟乙烯微孔滤膜:022μm.6 仪器和设备61 液相色谱G串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).62 分析天平:感量001g和000001g.63 涡旋混合器.64 高速离心机.7 试样的制备与保存71 试样的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试样品,绞碎并均质.a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.72 试样的保存-18℃以下保存.8 测定步骤81 提取称取试料2g(准确至±005g)于50mL离心管中,加入陶瓷均质子,加入5%甲酸乙腈溶液10mL,涡旋30s,加入无水硫酸钠4g、氯化钠1g,涡旋30s,4℃下8000r/min离心8min后,快速移取上层乙腈24mL至另一离心管中,加水06mL,混匀,备用.82 净化将备用液直接过固相萃取小柱,自然流出,收集滤液,并挤干.取滤液适量过微孔滤膜后,供液相色谱G串联质谱仪测定.83 基质匹配标准曲线的制备精密量取吡利霉素标准工作液适量,用提取净化后的空白试样溶液稀释成含药物浓度分别为1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、100ng/mL和400ng/mL的基质匹配系列标准溶液,从中各取10mL,过微孔滤膜上机测定.以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.84 测定841 液相色谱参考条件a) 色谱柱:五氟苯基柱(50mm×30mm,26μm),或性能相当者.b) 流动相:A为01%甲酸溶液,B为01%甲酸乙腈溶液.流动相梯度:0min~1min保持10%B;1min~3min,10%B线性变化到90%B;3min~4min保持90%B;4min~5min保持10%B.c) 流速:04mL/min.d) 进样量:5μL.2GB316134—2022e) 柱温:30℃.842 串联质谱参考条件a) 离子源:电喷雾离子源;b) 扫描方式:正离子扫描;c) 检测方式:多反应离子监测(MRM);d) 电喷雾电压:5500V.e) 离子源温度:500℃.f) 辅助气1:50psi.g) 辅助气2:50psi.h) 气帘气:25psi.i) 碰撞气:Medium.j) 吡利霉素定性、定量离子对和对应的去簇电压、碰撞能量参考值见表1.表1 吡利霉素定性、定量离子对和对应的去簇电压、碰撞能量药物定性离子对m/z定量离子对m/z去簇电压V碰撞能量eV吡利霉素4112>36334112>11214112>1121602040843 测定法试样溶液的保留时间在基质匹配标准溶液保留时间的±25%之内.试样溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表2的要求.表2 试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围单位为百分号相对丰度允许偏差>50±20>20~50±25>10~20±30≤10±50取基质匹配标准溶液和试样溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算.基质匹配标准溶液及试样溶液中吡利霉素的峰面积应在仪器检测的线性范围之内,超出线性范围时进行适当倍数稀释后再进行分析.基质匹配标准溶液中特征离子质量色谱图见附录A中图A1.85 空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行测定.9 结果计算和表述试样中吡利霉素的残留量按标准曲线或公式(1)计算.X=C×A×V1×V3×1000As×V2×m×1000(1)式中:X———试样中吡利霉素残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);C———基质匹配标准溶液中吡利霉素浓度的数值,单位为纳克每毫升(ng/mL);A———试样溶液中吡利霉素的峰面积;As———基质匹配标准溶液中吡利霉素的峰面积;V1———提取液总体积的数值,单位为毫升(mL);V2———上清液中取出溶液体积的数值,单位为毫升(mL);3GB316134—2022V3———最终溶液体积的数值,单位为毫升(mL);m———试样质量的数值,单位为克(g).10 方法灵敏度、准确度和精密度101 灵敏度本方法对牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪的检测限为2μg/kg,定量限为10μg/kg.102 准确度本方法吡利霉素在牛肌肉10μg/kg~200μg/kg、肝脏10μg/kg~2000μg/kg、肾脏10μg/kg~800μg/kg、脂肪10μg/kg~200μg/kg添加浓度上的回收率为60%~110%.103 精密度本方法批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤20%.4GB316134—2022附 录 A(资料性)吡利霉素特征离子质量色谱图空白牛肝脏基质匹配标准溶液中吡利霉素特征离子质量色谱图见图A1.图A1 空白牛肝脏基质匹配标准溶液中吡利霉素特征离子质量色谱图(16ng/mL)5
本文标题:GB 31613.4-2022 食品安全国家标准 牛可食性组织中吡利霉素残留量的测定 液相色谱-串联
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