农业农村部公告第361号2 兽药固体制剂中非法添加酰胺醇类药物的检查方法

附件2兽药固体制剂中非法添加酰胺醇类药物的检查方法1适用范围1.1本方法适用于兽药固体制剂（健胃散、止痢散、球虫散、胃肠活、阿莫西林可溶性粉、氨苄西林可溶性粉、硫酸新霉素可溶性粉、盐酸大观霉素林可霉素可溶性粉、盐酸土霉素预混剂、注射用盐酸土霉素、盐酸金霉素可溶性粉、酒石酸泰乐菌素可溶性粉、硫酸红霉素可溶性粉、替米考星预混剂、盐酸林可霉素可溶性粉、硫酸粘菌素可溶性粉、恩诺沙星可溶性粉、盐酸环丙沙星可溶性粉、氧氟沙星可溶性粉、盐酸环丙沙星小檗碱预混剂、阿苯达唑伊维菌素预混剂、阿维菌素粉、地克珠利预混剂、维生素C可溶性粉、复方维生素B可溶性粉）中非法添加的酰胺醇类药物（甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素）的检查。1.2用于其它兽药固体制剂药物中非法添加酰胺醇类药物（甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素）检查时，需要进行空白试验和系统适用性试验，供试品溶液中甲砜霉素、氟苯尼考和氯霉素色谱峰与相邻的色谱峰分离度应符合要求。必要时可采用二极管阵列检测器进行峰纯度检测。2检查方法照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版一部附录0512）。色谱条件与系统适用性用十八烷基键合硅胶为填充剂（WatersAtlantisT34.6mm×250mm,5µm,或其他等效的色谱柱）；以甲醇为流动相A，以乙腈为流动相B，水为流动相C，流速为1ml/min，按下表进行洗脱；二极管阵列检测器检测，采集波长范围为190nm~400nm，分辨率为1.2nm，分别记录224nm和278nm波长处的色谱图。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）流动相C（%）01312751213127526040603013127535131275分别取甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素对照品适量，加40%甲醇溶液超声使溶解，制成每1ml中各含约50µg的溶液，作为系统适用性溶液。取10µl注入高效液相色谱仪，记录色谱图和光谱图。甲砜霉素、氟苯尼考和氯霉素之间的分离度应符合要求。测定法取供试品约0.5g，精密加入40%的甲醇溶液50ml，超声15分钟，摇匀，6000转/分钟，离心5分钟；取上清液1.0ml置10ml量瓶中，加40%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素对照品适量，加40%甲醇溶液超声使溶解，制成每1ml中各含约50µg的溶液，作为对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各10µl，分别注入高效液相色谱仪，同时记录色谱图和光谱图。必要时，可调整供试品溶液或对照品溶液的浓度，使两者峰面积近似。通过与对照品溶液色谱图保留时间、光谱图的对比，确定供试品中是否含有甲砜霉素、氟苯尼考和氯霉素。3结果判定3.1供试品色谱图中如出现与相应对照品保留时间一致的峰（差异小于等于±5%），且为单一物质峰；在规定的采集波长范围内，两者紫外光谱图匹配，且最大吸收波长一致（差异小于等于±2nm），判定为检出为甲砜霉素、氟苯尼考或氯霉素。3.2供试品溶液色谱图中峰保留时间与相应对照品峰相同，但峰面积小于检测限峰面积，判定为未检出甲砜霉素、氟苯尼考或氯霉素。4检测限本方法甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素检测限为4g/kg。附图1：酰胺醇类药物混合标准溶液224nm和278nm色谱图注：1、上图为224nm色谱图，下图为278nm色谱图；2、出峰顺序为甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素附图2：酰胺醇类药物混合标准溶液光谱图nm220240260280300320340360380mAU01020304050607080*DAD1,9.321(86.8mAU,-)Ref=9.001&9.701属于20161205000034.D甲砜霉素光谱图225.2